氣相色譜法同時測定冠心蘇合丸中5 種成分含量

李婷婷，黃曉婧，王 欣，曾 楨，孔衛東，劉 莉

（四川省成都市食品藥品檢驗研究院，四川 成都 610045）

冠心蘇合丸原方出自唐開元年間《廣濟方》中吃力伽丸（白術丸）［1-3］，由15 味藥組方，后經簡化由蘇合香、冰片、乳香、檀香、土木香5 味藥組方，收載于2015 年版《中國藥典（一部）》［4］，具有理氣、寬胸、止痛功效，用于寒凝氣滯、心脈不通所致胸痹、胸悶、冠心病、心絞痛等疾病的治療。蘇合香為金縷梅科植物蘇合香樹Liquidimibarorientalis Mill. 樹干滲出的香樹脂經加工精制而成的半流動性濃稠液體，味辛、性溫，歸心、脾經，具有開竅、辟穢、止痛的功效，為冠心蘇合制劑的君藥，主要成分包括萜類、黃酮類、酚酸類、苯丙素類、揮發油類等［5-9］，蘇合香中苯甲酸芐酯、肉桂酸芐酯、肉桂酸肉桂酯等成分含量較高。土木香為菊科植物土木香Inulahelenium L. 的干燥根，味辛、苦，性溫，歸肝、脾經，具有健脾和胃、調氣解郁、止痛安胎之功效［10］，主要化學成分是倍半萜內酯類，其中土木香內酯和異土木香內酯含量較高［11-13］。參考文獻［14-18］，本研究中建立了同時測定冠心蘇合制劑中苯甲酸芐酯、肉桂酸芐酯、肉桂酸肉桂酯、土木香內酯和異土木香內酯含量的氣相色譜（GC）法，可為冠心蘇合制劑的質量控制提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890B 型氣相色譜儀，包括自動進樣器、FID檢測器（美國安捷倫科技有限公司）；XPE26 型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度為0.001 mg）；AE-240型電子天平（德國賽多利斯公司，精度為0.1 mg）；SK250H 型超聲儀（上海科導超聲儀器有限公司，功率為250 W，頻率為53 kHz）；Milli-Advantage A10 型超純水裝置（美國密理博公司）。

1.2 試藥

苯甲酸芐酯對照品（含量為99.9% ，批號為B000132005，北京曼哈格生物科技有限公司）；土木香內酯對照品（含量為98.4%，批號為110760-201209），異土木香內酯對照品（含量為98.4%，批號為110761-201505），均購自中國食品藥品檢定研究院；肉桂酸芐酯對 照 品（含 量 為 99.5% ，批 號 為 21128，德 國Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司）；肉桂酸肉桂酯對照品（含量為100.0%，批號為LF60Q43，北京百靈威科技有限公司）；冠心蘇合丸（藥都制藥集團股份有限公司，批號分別為160501，161101，161201，規格為每粒1.0 g；北京同仁堂科技有限公司，批號分別為17013556，17013558，17013561，規格為每粒0.85 g；長春人民藥業有限公司，批號分別為20170103，20170201，規格未標注；哈藥集團世一堂制藥廠，批號分別為1704155，1705107，規格未標注；吉林省鑫輝藥業有限公司，批號分別為20170101，20170505，規格未標注）；頸復康藥業集團赤峰丹龍藥業有限公司（批號分別為1702025，1704010，規格未標注）；其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

毛細管柱：AgilentDB1701 毛細管柱（30m×0.32mm，0.25 μm）；FID 檢測器；進樣口溫度：220 ℃；分流比：10 ∶1；進樣量：1 μL；檢測器溫度：250 ℃；柱溫：程序升溫，初始溫度100 ℃，保持6 min，以每分鐘10 ℃升至190 ℃，保持20 min，以每分鐘15 ℃升至220 ℃，保持20 min，再以每分鐘20 ℃升至260 ℃，保持10 min；載氣：氮氣；流速：2 mL/min。理論板數按土木香內酯峰計算不得低于20 000。色譜圖見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液制備

取苯甲酸芐酯、土木香內酯、異土木香內酯、肉桂酸芐酯、肉桂酸肉桂酯對照品適量，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加水飽和乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，混合對照品貯備液。精密吸取上述對照品貯備液1 mL，置10 mL容量瓶中，加水飽和乙酸乙酯稀釋至刻度，制成每1 mL含苯甲酸芐酯0.189 8 mg、土木香內酯0.074 0 mg、異土木香內酯0.047 7 mg、肉桂酸芐酯0.064 0 mg、肉桂酸肉桂酯0.093 4 mg 的混合對照品溶液。取冠心蘇合丸10 丸，剪碎，混勻，取8 g（丸質量），精密稱定，精密加入硅藻土8 g（硅藻土質量），研細混勻，得冠心蘇分丸粉末，取3.0 g（丸實際取樣量=取樣量×丸質量/ （丸質量+硅藻土質量），精密稱定，置錐形瓶中，精密加入水飽和乙酸乙酯25 mL，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質量，用相應溶劑補足減失的質量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按樣品的配方比例和制備工藝，分別制備缺蘇合香、缺土木香的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：精密量取混合對照品貯備液0.2，0.5，1，2，3，5 mL，分別置10 mL 容量瓶中，加入水飽和乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，得系列溶液。精密量取上述系列溶液各1 μL，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質量濃度（X，μg / mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，繪制標準曲線。結果見表1。

表1 各成分線性關系考察結果（ n=6）

精密度試驗：精密吸取混合對照品溶液1 μL，按擬訂色譜條件進樣測定6 次，記錄峰面積。結果苯甲酸芐酯、土木香內酯、異土木香內酯、肉桂酸芐酯和肉桂酸肉桂酯的 RSD 分別為0.25% ，0.35% ，0.18%，0.17%，0.24%，0.18%（n =6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批（批號為161101）樣品適量，精密稱定，依法制備供試品溶液，共6 份，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果苯甲酸芐酯、土木香內酯、異土木香內酯、肉桂酸芐酯和肉桂酸肉桂酯的平均含量分別為8.99，1.39，1.75，2.58，0.68 mg/g，RSD 分別為1.40%，1.63%，0.96%，1.40%，2.28%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一批樣品（批號為161101）適量，精密稱定，依法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0，3，6，12，18，24 h 時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果苯甲酸芐酯、土木香內酯、異土木香內酯、肉桂酸芐酯和肉桂酸肉桂酯的 RSD 分別為1.14% ，2.31%，2.66%，1.08%，1.19% （ n=6）。表明供試品溶液在室溫下放置24 h 內穩定性良好。

加樣回收試驗：取已知含量樣品（批號為161101）適量，共9 份，分別加入低、中、高質量濃度的待測成分對照品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率。結果見表2。

2.4 樣品含量測定

取冠心蘇合丸14 批次，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量。結果見表3。

3 討論

3.1 色譜柱選擇

曾考察AgilentDB-WAX 毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、Agilent HP-1 毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、Agilent HP-5 毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、Agilent DB17 毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、Agilent DB1701 毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）等為本試驗色譜柱時樣品的分離效果，結果表明，采用Agilent DB1701 毛細管柱分析時分離度及峰形較好，故選擇上述色譜柱。

3.2 提取溶劑選擇

取冠心蘇合丸粉末3.0 g，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入無水乙醇、70%乙醇、甲醇、乙酸乙酯、水飽和乙酸乙酯、乙醇-乙酸乙酯（2 ∶1，V / V）、無水乙醇-乙酸乙酯（2 ∶1，V/ V）25 mL，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質量，用相應溶劑補足減失的質量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液，依法測定，計算含量。其中，水飽和乙酸乙酯提取液中土木香內酯、異土木香內酯含量較高，甲醇提取液中苯甲酸芐酯、肉桂酸芐酯、肉桂酸肉桂酯含量較高，但與水飽和乙酸乙酯差異較小，且甲醇干擾大，基線高，故選用水飽和乙酸乙酯為提取溶劑。

3.3 提取時間選擇

取冠心蘇合丸粉末3.0 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入水飽和乙酸乙酯25 mL，稱定質量，分別超聲處理（15，30，45 min）、加熱回流（15，30，45 min），放冷，再稱定質量，用水飽和乙酸乙酯補足減失的質量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液，依法測定，計算含量。超聲處理30 min 和45 min、回流30 min 比較，含量差異不大，但超聲處理30 min 基本提取完全，故選用超聲處理30 min。

表2 加樣回收試驗結果（n=9）

3.4 方法評價

本研究中建立的方法操作簡便快速，結果準確，可用于冠心蘇合丸中苯甲酸芐酯、土木香內酯、異土木香內酯、肉桂酸芐酯、肉桂酸肉桂酯的含量測定。

表3 樣品含量測定結果（mg/g，n=3）