讓冰凍切片近似石蠟切片的制作方法

吳清萍

【摘要】目的：為改進(jìn)傳統(tǒng)的操作理念讓冰凍切片更接近石蠟切片的組織結(jié)構(gòu)，以保證術(shù)中冰凍切片的高診斷率。方法：本文強(qiáng)調(diào)新鮮活體組織取材后迅速凍結(jié)，通過(guò)恒溫式冰凍切片機(jī)切片，HE染色。結(jié)果：鏡下組織結(jié)構(gòu)清楚，形態(tài)清晰，細(xì)胞核、漿色彩鮮艷對(duì)比分明，無(wú)脫片和冰晶現(xiàn)象產(chǎn)生，近似石蠟切片。結(jié)論：要獲得一張高質(zhì)量的冰凍切片，必須加強(qiáng)責(zé)任心，在日常工作中不斷學(xué)習(xí)，掌握關(guān)鍵性技術(shù)操作要領(lǐng)，為提高病理診斷率提供更有利的條件。

【關(guān)鍵詞】冰凍切片;制片;染色

【中圖分類號(hào)】R736.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

冰凍切片是借助低溫恒冷條件使組織迅速凍結(jié)達(dá)到一定硬度進(jìn)行切片的一種方法，具有快速方便的特點(diǎn)，而大范圍用于臨床手術(shù)中的快速病理診斷[1]。術(shù)中確診病變性質(zhì)，是決定手術(shù)范圍的依據(jù)。因此，制作優(yōu)質(zhì)的冰凍切片至關(guān)重要。這就要求每個(gè)病理技術(shù)員不僅要有高度的責(zé)任心，還要有熟練的技術(shù)，用最短的時(shí)間，制作最優(yōu)的切片。我科在工作中不斷改進(jìn)，摸索出一種制片效果比較滿意的冰凍切片制作方法，從而保證了冰凍切片更接近石蠟切片的組織結(jié)構(gòu)。

1材料與方法

1.1一般材料

1.1.1冰凍切片機(jī)和包埋劑

采用德國(guó)LEICA CM 1950冷凍恒溫切片機(jī)。包埋劑使用聚乙二醇和聚乙烯醇（OCT）。

1.1.2試劑

95%乙醇、蘇木素染液、伊紅染液、1%鹽酸乙醇、梯度乙醇、二甲苯、樹膠。

1.1.3組織標(biāo)本

組織來(lái)源于2019年全年完成冰凍切1112例。

1.1.4其他材料

一次性刀片、細(xì)頭毛筆、硬毛刷、鑷子、組織托，玻片及蓋玻片。[2]

1.2方法

取新鮮活體組織，組織的取材大小<15mm×15mm×3mm為宜，取材使用的工具避免沾濕水。將取材好的組織用擦手紙包繞并稍用力擠壓，使其盡量吸附組織表面的血跡或其他液體及組織間液[2]。然后置標(biāo)本于制冷臺(tái)上，凍頭上先加少量膠，等稍凝固再放上組織，同時(shí)再加膠。冰凍后切片，冷風(fēng)稍吹干，迅速入固定液（95%乙醇）加溫（40℃）固定10s，水洗15s，蘇木素染核2分鐘，水洗15s，1%鹽酸乙醇分化1s，水洗返藍(lán)2分鐘，入酒精性伊紅1s，95%乙醇和無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片。

2結(jié)果

使用該方法制作的冰凍切片質(zhì)量好，無(wú)皺褶，結(jié)構(gòu)完好，未見冰晶。染色鮮艷，鏡下組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)清晰，細(xì)胞核、漿對(duì)比分明，細(xì)胞均無(wú)腫脹、無(wú)萎縮，封片無(wú)溢膠和氣泡，近似石蠟切片圖（1，2）。

3討論

冰凍切片在組織學(xué)技術(shù)中應(yīng)用范圍較廣，在冰凍切片過(guò)程中規(guī)定20～25min內(nèi)完成制片[3]，對(duì)臨床手術(shù)的快速診斷其意義更大。同時(shí)，病理術(shù)中冰凍切片診斷準(zhǔn)確率直接反映出病理科面對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的能力以及間接反映出醫(yī)院的手術(shù)水平。若要提高和保持較高的準(zhǔn)確率，病理技術(shù)員很關(guān)鍵。因此，保證和提高制片質(zhì)量是每個(gè)技術(shù)員的責(zé)任。我們以此為目標(biāo)，從以下5個(gè)操作環(huán)節(jié)加以改進(jìn)：

3.1溫度 冰凍溫度是影響冰凍切片的關(guān)鍵。我科冰凍切片機(jī)在待機(jī)時(shí)凍臺(tái)和凍頭溫度均設(shè)在-18℃，在冰凍切片時(shí)，根據(jù)不同的組織來(lái)設(shè)定溫度：腮腺組織設(shè)置溫度在-18℃～-16℃;腦組織、淋巴結(jié)組織設(shè)置溫度在-22℃～-18℃[4];甲狀腺溫度不宜過(guò)低在-18℃～-15℃[5];乳腺組織設(shè)置溫度在-22℃～-18℃;子宮設(shè)置溫度在-20℃-18℃;脂肪組織適宜在-35℃[6]。

3.2冰凍時(shí)間 組織冰凍時(shí)間不夠就切片，不容易成片或者細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊，如果冰凍時(shí)間過(guò)長(zhǎng)切片容易產(chǎn)生龜裂或細(xì)胞嚴(yán)重收縮。機(jī)器溫度的設(shè)定，組織的性質(zhì)、大小厚度，直接影響冰凍時(shí)間。因此建議當(dāng)OCT膠最表面或組織表面凍到發(fā)白或凝固后馬上進(jìn)行修片。

3.3包埋 冰凍頭上先加入少量OCT膠，然后再放組織，同時(shí)在組織周圍添加OCT膠，將組織完全置入膠內(nèi)，這樣可以防止切片時(shí)組織邊緣卷起或產(chǎn)生皺褶。

3.4固定 冰凍切片切好后，用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)稍吹干，立即放入加溫（40℃）95%乙醇固定液中，避免在空氣中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。長(zhǎng)時(shí)間放置在空氣中，鏡下觀察冰凍切片時(shí)細(xì)胞有云霧感，組織結(jié)構(gòu)不清晰。

3.5染色 染色時(shí)盡量保證染液的新鮮，我們將酒精性伊紅染液50%稀釋，使細(xì)胞漿顏色不會(huì)太深。細(xì)胞核、漿色彩鮮艷對(duì)比分明，鏡下組織結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞形態(tài)清晰。

如何做好術(shù)中冰凍切片，這一領(lǐng)域還有許多值得探討的空間?？傊谌粘５墓ぷ髦胁粩鄬W(xué)習(xí)，積累和提高，掌握關(guān)鍵性技術(shù)操作要領(lǐng)，加強(qiáng)責(zé)任心，讓冰凍切片更接近石蠟切片的組織結(jié)構(gòu)，為提高病理診斷提供更有利的條件。

參考文獻(xiàn)：

[1]鄧江，黎相照。固定液溫度對(duì)冰凍切片質(zhì)量的影響。中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2020（15）22，202-204.

[2]黃燚彬。冰凍切片制片的細(xì)節(jié)要點(diǎn)總結(jié)。實(shí)用醫(yī)技雜志，2020（27）06，792-793.

[3]楊霞。常用冰凍固定液對(duì)冰凍制片效果的差異分析。養(yǎng)身保健指南，2018（7）：238

[4]黃躍，張睿，吳德江等。冰凍切片的制作。現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2017，33（21）：3358-3359.

[5]賀德智。淺談如何制作優(yōu)良的甲狀腺冰凍切片。基層醫(yī)學(xué)論壇，2016，20（22）：3167-3168

[6]胡垚。富含脂肪及淋巴組織的冰凍切片制片體會(huì)。哈爾濱醫(yī)藥，2015，35（3）：200-202