枸杞多糖保護小鼠GC-1spg精原細胞氧化損傷的研究

徐楊超 賴青 許春 黃磊 吳劍 陳劍英

【摘 要】：目的觀察枸杞多糖對活性氧引起的小鼠GC-1spg精原細胞氧化損傷的保護作用。方法利用體外培養的小鼠GC-1spg精原細胞建立氧化應激模型，通過采用MTS比色法測定小鼠GC-1spg精原細胞活力，評價枸杞多糖對小鼠GC-1spg精原細胞氧化損傷的保護作用。結果次黃嘌呤/黃嘌呤活性氧化可導致精原細胞活性降低，而添加枸杞多糖可以降低次黃嘌呤/黃嘌呤活對小鼠GC-1spg精原細胞的生長抑制率。結論枸杞多糖可通過抗氧化作用保護活性氧引起的小鼠GC-1spg精原細胞氧化損傷。

【關鍵詞】：枸杞多糖;小鼠GC-1spg精原細胞;次黃嘌呤/黃嘌呤;氧化損傷

枸杞多糖（Lycium Barbarum PoIysaccharides，LBP）是枸杞子的主要功能成分之一，對生殖系統具有多種藥理作用和生物活性功能[1]。國內有研究通過枸杞多糖對生殖系統損傷大鼠的抗氧化作用及對性激素水平的影響[2]，通過在對睪丸組織超微結構觀察證實，枸杞多糖能明顯減輕大鼠睪丸組織的損傷程度，而目前枸杞多糖（LBP）對小鼠精原細胞氧化損傷的保護機制目前并未見報道。本實驗擬利用小鼠GC-1spg精原細胞為研究對象，采用次黃嘌呤/黃嘌呤氧化損傷模型，研究枸杞多糖（LBP）對小鼠GC-1 spg精原細胞有無氧化損傷的保護作用，為男性生殖健康保護和天然生物活性物質的利用提供理論依據[3-4] 。

1材料與方法

1.1GC-1 spg精原細胞培養? 小鼠GC-1spg精原細胞為上海通派生物科技公司提供，合格證編號HDC-20180562541。培養液為高糖DMEM培養液（Sigma），其中添加Hepes 1.75mmoL·mL-1、谷氨酰胺2mmoL·mL-1、青霉素100U·mL-1、鏈霉素100 mg·mL-1、胰島素10mg·mL-1、轉鐵蛋白5mg·mL-1和亞硒酸鈉3×10-8 moL·mL-1作為完全培養液。

1.2分組及藥物處理? 將小鼠GC-1spg精原細胞按隨機數字法分為4組：對照組、次黃嘌呤/黃嘌呤氧化組（hypoxanthine/xanthine oxidase，HX/XO組，次黃嘌呤10μmoL·L-1，黃嘌呤2.5U·L-1）、枸杞多糖組（LBP組，枸杞多糖10mg·mL-1）、枸杞多糖和次黃嘌呤/黃嘌呤氧化組（HX/XO+LBP組，枸杞多糖10 mg·mL-1，次黃嘌呤10μmoL·L-1，黃嘌呤2.5U·L-1）。細胞培養于37℃的培養箱。每次處理組4孔，實驗重復3次。

1.3精原細胞活性測試? 本實驗采用四氮唑藍鹽（MTS）比色法測定精原細胞活力。細胞培養24h后，加入MTS 20ul，繼續培養4h。用酶標儀測570nm下的吸收度值，并計算細胞存活率。

1.4統計學方法? 采用SPSS 11.5統計軟件對數據進行分析。計量資料用表示，組間差異比較用檢驗。

2?結果

2.1 ? LBP和HX/XO對小鼠GC-1 spg精原細胞存活的影響

通過MTS比色法檢測小鼠GC-1spg精原細胞活力發現：小鼠GC-1spg精原細胞培養24h后，與對照組相比，HX/XO氧化組小鼠GC-1spg精原細胞活力明顯降低，枸杞多糖組及枸杞多糖和HX/XO氧化組小鼠GC-1spg精原細胞活力明顯升高（均P〈0.05）見圖1。

2.2LBP和HX/XO對小鼠GC-1spg精原細胞生長抑制率的影響

通過采用MTS比色法檢測小鼠GC-1spg精原細胞生長抑制率發現枸杞多糖對小鼠GC-1spg精原細胞氧化損傷有一定保護作用，實驗結果詳見表1。

3 討論

哺乳動物精原細胞待遇細胞內外的氧化狀態高度敏感，極易受到內外的氧化損傷。本實驗結果顯示，枸杞多糖能夠顯著改善HX/XO對小鼠GC-1spg精原細胞的活力影響，并且枸杞多糖可以降低HX/XO氧化小鼠GC-1spg精原細胞生長抑制率，表明枸杞多糖對HX/XO呤所致小鼠GC-1spg精原細胞的氧化損傷有很好的防護作用，有一定的臨床意義。

參考文獻

鄒惟瑩， 夏麗萍， 楊樹龍， 等.槲皮素對小鼠精原細胞氧化應激的保護作用[J].南昌大學學報（醫學版），2014，（12）：1-3，8.

南亞昀， 雍學芳， 王禮星， 等.枸杞多糖藥理學研究進展[J].天津中醫藥，2014，（12）：763-765.

黃庚娣， 賀芳， 韓魁， 等.枸杞多糖對紫外線照射的RAW264.7細胞保護作用的分析[J].中國病理生理雜志，2015，（10）：1837-1837.

張大雷， 楊蓓， 吳磊， 等.人參皂苷保護小鼠精原細胞氧化損傷的研究[J].中國藥理學通報，2010，（8）：1014-1016.