GC 法同時測定仁術臍膏中4 種成分

曹 謙 侯雪楠 劉 宇 陳澤偉 張雙偉 張 軍*

［1.廣州中醫藥大學中藥學院， 廣東廣州510006； 2.廣州中醫藥大學第四臨床醫學院， 廣東廣州510006； 3.重慶大學附屬腫瘤醫院， 教育部生物流變科學與技術重點實驗室（重慶大學）， 重慶400044；4.廣州醫科大學附屬第二醫院中醫科， 廣東廣州510006］

仁術臍膏是挖掘并優化臨床經驗組方的在研新藥［1］，以砂仁?蒼術、肉桂?丁香藥對配伍入藥，課題組前期研究［2］發現方中丁香、肉桂可增強砂仁、蒼術止瀉效果，并確定揮發油為其有效部位。該方外敷臍部用于防治小兒腹瀉，具有應用方便、臨床順應性佳等優勢［3?7］。

目前，已上市的同類型外用給藥制劑大多采用粉碎工藝入藥，透皮吸收緩慢，產品仍具“黑、大、粗” 缺陷；仁術臍膏以臨床應用經驗為基礎，采用超臨界CO2萃取浸膏入藥，以皮膚相容性較佳的混合脂肪酸甘油酯制備膏劑，具有藥效成分含有量高、吸收快、療效好、制備工藝穩定的優勢。本實驗采用GC 法同時測定仁術臍膏中桂皮醛、乙酸龍腦酯、丁香酚、蒼術素的含有量［8］，以期為控制該制劑質量提供參考。

1 材料

1.1 儀器 GC?2010 Plus 氣相色譜儀（日本島津公司）；CP225D （十萬分之一）、AB204?N （萬分之一） 電子分析天平（瑞士Mettler?Toledo 公司）；KQ?400KDE 數控超聲波清洗器（400 W、40 kHz）。

1.2 試劑與藥物 乙酸龍腦酯（批號110759??201105，純度99.6%）、蒼術素（批號111924?201404，純度99.7%）、桂皮醛（批號110710?201619，純度98.9%）、丁香酚（批號110725?201615，純度99.8%） 對照品均購于中國食品藥品檢定研究院。仁術臍膏（批號170801、170802、170803，由南方醫科大學珠江醫院制劑室提供，每貼質量1 g，相當于生藥4 g）。肉桂（批號160301）、砂仁（批號160501）、蒼術（批號160301） 均購于廣州致信藥業有限公司，丁香（批號16215413） 購于廣東省藥材公司中藥飲片廠，經廣州中醫藥大學中藥學院張軍研究員鑒定為正品。無水乙醇為分析純。

2 方法與結果

2.1 GC 條件 Phenomenex ZB?1 ms 毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣高純度氮氣；恒壓100.0 kPa；進樣口溫度240 ℃；檢測器溫度250 ℃；分流比50 ∶1；程序升溫（初始溫度130 ℃，保持10 min，10 ℃／min 升至150 ℃，保持5 min，10 ℃／min 升至180 ℃，保持5 min，20 ℃／min 升至230 ℃，保持12.5 min）；進樣量1 μL。

2.2 對照品溶液制備 精密稱取桂皮醛、乙酸龍腦酯、丁香酚對照品適量，加無水乙醇稀釋至25 mL 棕色量瓶中，得到相應貯備液（三者質量濃度分別為7.472 8、4.282 0、9.925 6 mg／mL）。精密稱取蒼術素對照品15 mg，置于25 mL 棕色量瓶中，精密加入上述貯備液各5 mL，無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得（四者質量濃度分別為1.494 6、0.856 4、1.985 1、0.613 6 mg／mL）。各精密吸取適量，依次稀釋2.5、5、12.5、25 倍，配制梯度質量濃度溶液。

2.3 供試品溶液制備 取膏劑（批號170801） 1 貼，揭去包材，精密稱取0.5 g，精密加入25 mL 無水乙醇，稱定質量，超聲 （280 W、40 kHz） 提取30 min，4 ℃下靜置30 min后冷卻至室溫，無水乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液制備 分別取缺肉桂、缺砂仁、缺丁香、缺蒼術的陰性樣品，按“2.3” 項下方法制備，即得。

2.5 專屬性試驗 精密吸取供試品溶液、對照品溶液（稀釋5 倍）、陰性樣品溶液各1 μL，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定，結果見圖1。由此可知，供試品在對照品相同保留時間位置上有色譜峰，陰性無干擾。

2.6 線性關系考察 精密吸取“2.2” 項下對照品溶液，在“2.1” 項色譜條件下各進樣1 μL 測定。以溶液質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y） 進行回歸，得桂皮醛、乙酸龍腦酯、丁香酚、蒼術素方程分別為Y＝155 797X-558.926 （r＝0.999 98）、Y＝150 216X-111.846（r＝1.000 00）、Y＝138 269X-889.358 （r＝0.999 97）、Y＝156 581X-143.402 （r＝0.999 99），分別在0.059 78～1.494 6、0.032 46～0.856 4、0.079 40～1.985 1、0.024 54～0.613 1 μg／μL 范圍內線性關系良好。

2.7 精密度試驗 精密吸取“2.2” 項下同一份稀釋5 倍的對照品溶液1 μL，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定6次，測得桂皮醛、乙酸龍腦酯、丁香酚、蒼術素峰面積RSD 分別為0.68%、1.35%、1.00%、1.34%，表明儀器精密度良好。

圖1 各成分GC 色譜圖

2.8 重復性試驗 精密稱取同一批膏劑（批號170801），按“2.3” 項下方法平行制備6 份供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進樣測定，測得桂皮醛、乙酸龍腦酯、丁香酚、蒼術素含有量RSD 分別為0.79%、1.00%、1.13%、0.73%，表明該方法重復性良好。

2.9 穩定性試驗 精密稱取同一批膏劑（批號170801），按“2.3” 項下方法制備供試品溶液，于0、2、4、8、12、24 h 在“2.1” 項色譜條件下進樣測定，測得桂皮醛、乙酸龍腦酯、丁香酚、蒼術素含有量RSD 分別為0.50%、0.99%、0.61%、0.73%，表明供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

2.10 加樣回收率試驗 精密稱取含有量已知的同一批膏劑（批號170801） 0.25 g，各6 份，精密加入“2.2” 項下對照品溶液2.8 mL、無水乙醇22.2 mL，按“2.3” 項下方法平行制備6 份供試品溶液，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定，計算回收率，結果見表1。

2.11 樣品含有量測定 取3 批膏劑，按“2.3” 項下方法制備供試品溶液，在“2.1” 項色譜條件下進樣測定，計算含有量，結果見表2。

3 討論與結論

本實驗考察了多種等溫或程序升溫的GC 分離條件，并進行預試驗［9?14］，發現在等溫條件下主成分色譜峰出現出峰時間間隔過長、分離度不達標等情況，難以達到滿意的分離效果；在程序升溫條件下，初始柱溫過低會導致出峰時間晚、峰型過寬等問題，而過高又導致出峰時間過早、分離度差的情況，同時升溫速率過快也會導致主成分峰過于集中。最終，確定為“2.1” 項下條件，此時出峰時間適宜，峰型對稱，分離度良好，結果穩定。

表1 各成分加樣回收率試驗結果（n＝6）

表2 各成分含有量測定結果（n＝3）

在制備供試品溶液時，本實驗考察了提取方法（直接超聲提取、水浴融化后超聲提?。⑻崛∪軇┓N類（無水乙醇、甲醇） 及用量（25、50 mL）、提取時間（15、30、45 min）、超聲功率 （160、280、400 W）、靜置溫度（-20、0、4 ℃） 及時間（15、30、60、120 min），發現在以無水乙醇超聲提取或水浴后超聲提取、超聲功率280 W或400 W、提取時間30 min 或45 min 時體系澄清透明，各成分含有量均無明顯差異。為了簡化操作，最終確定為“2.3” 項下方法。

綜上所述，本實驗建立GC 法同時測定仁術臍膏中桂皮醛、乙酸龍腦酯、丁香酚、蒼術素的含有量，發現各成分可控程度高，而且方法簡便準確，重復性好，可更好地控制該制劑質量。