不同濃度NAA對(duì)白芨壯苗培養(yǎng)的影響

李云海 陳麗華 李美英

摘要 ? ?本次試驗(yàn)以經(jīng)過(guò)叢芽增殖培養(yǎng)后獲得的1.5 cm左右高的紫花白芨試管苗為壯苗培養(yǎng)的起始材料，以MS+6-BA 0.5 mg/L并分別添加不同濃度的NAA（0.3、0.5、0.7、0.9 mg/L）為對(duì)比培養(yǎng)基，對(duì)紫花白芨試管苗壯苗培養(yǎng)的適宜NAA濃度進(jìn)行了篩選。結(jié)果表明，MS+NAA 0.9 mg/L+6-BA 0.5 mg/L培養(yǎng)基的壯苗培養(yǎng)效果最好，白芨試管苗平均株高達(dá)到了4.72 cm，平均每叢葉片數(shù)和新增芽數(shù)分別為8個(gè)和4個(gè)。在此培養(yǎng)基下，試管苗的新增芽數(shù)較適中，植株生長(zhǎng)勢(shì)、葉片質(zhì)量和苗叢的健壯程度等均最好，能夠?yàn)楹罄m(xù)白芨試管苗的生根培養(yǎng)和移栽成活等提供較好的物質(zhì)基礎(chǔ)。因此，本試驗(yàn)篩選出的適宜白芨優(yōu)質(zhì)試管種苗壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基激素濃度組合為NAA 0.9 mg/L+6-BA 0.5 mg/L。

關(guān)鍵詞 ? ?白芨;組織培養(yǎng);NAA濃度;壯苗培養(yǎng);株高;葉片數(shù);新增芽數(shù)

中圖分類(lèi)號(hào) ? ?S567.23+9 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ? ?A

文章編號(hào) ? 1007-5739（2020）16-0043-02

白芨（Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.）是蘭科白芨屬多年生草本植物，別名地螺絲、連及草，因根部呈白色且數(shù)個(gè)相連而生，故名白芨或白根[1-2]。白芨原產(chǎn)自中國(guó)，廣泛分布于我國(guó)的西南、東南及華北等地區(qū)，我國(guó)擁有的4個(gè)種分別是華白芨、白芨、黃花白芨、小白芨。白芨自身有較多的優(yōu)勢(shì)，因而有廣泛的應(yīng)用，如白芨是一種具有止血、抗菌、防癌等作用的名貴中藥材，其塊莖干燥后磨粉可用于補(bǔ)肺、生肌、咳血和慢性潰瘍等癥的治療[3]。白芨莖中主要成分是白芨膠，可替代阿拉伯膠等作為混懸劑及乳化劑，廣泛用于醫(yī)藥、化妝品和食品化工等領(lǐng)域[4-5]。此外，白芨還可作為一種觀賞性植物，其花形奇特，盛開(kāi)時(shí)異常驚艷美麗。因此，白芨的藥用價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值和觀賞價(jià)值均較高。過(guò)去由于人們長(zhǎng)期進(jìn)行掠奪式采挖，致使白芨野生資源數(shù)量急劇減少，目前已被國(guó)家列為重點(diǎn)保護(hù)的野生藥用植物之一[6]。

白芨和其他蘭科植物一樣，蒴果中的種子雖然數(shù)以萬(wàn)計(jì)，但因種子極細(xì)小且無(wú)胚乳，在自然狀態(tài)下，種子的萌發(fā)率極低，致使白芨自然繁殖極其困難[7]。而以分生為主的白芨常規(guī)繁殖方法，也因其繁殖系數(shù)較低、生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、耗種量大等原因，不能適應(yīng)規(guī)模化生產(chǎn)種植的種苗需求[8]。因此，為了滿足白芨人工栽培對(duì)大量種苗的需求，更好地保護(hù)白芨自然資源，近年來(lái)較多學(xué)者開(kāi)展了用植物組織培養(yǎng)技術(shù)提高白芨優(yōu)質(zhì)種苗繁育速度的研究[9]。通過(guò)白芨無(wú)菌種子試管培養(yǎng)、叢生芽增殖誘導(dǎo)、試管苗壯苗生根及移栽等關(guān)鍵環(huán)節(jié)的研究，建立了完整而系統(tǒng)的白芨組培快繁技術(shù)體系[10]，應(yīng)用于白芨資源的有效保護(hù)和開(kāi)發(fā)利用。本試驗(yàn)參考上述學(xué)者的研究方法及結(jié)果，以經(jīng)過(guò)叢芽增殖培養(yǎng)后獲得的白芨試管苗為壯苗培養(yǎng)的試驗(yàn)材料，在MS培養(yǎng)基中添加0.5 mg/L 6-BA的基礎(chǔ)上，設(shè)置4個(gè)不同濃度NAA的對(duì)比試驗(yàn)組，對(duì)白芨試管苗壯苗培養(yǎng)適宜的NAA濃度進(jìn)行了篩選，以期為下一步白芨試管種苗的生根培養(yǎng)提供基礎(chǔ)，進(jìn)而為白芨優(yōu)質(zhì)試管種苗的規(guī)模化快速生產(chǎn)繁育提供數(shù)據(jù)依據(jù)。

1 ? ?材料與方法

選擇已經(jīng)過(guò)叢生芽增殖培養(yǎng)階段的長(zhǎng)勢(shì)中等的紫花白芨試管苗，待株高1.5 cm左右時(shí)，用來(lái)開(kāi)展壯苗培養(yǎng)NAA適宜濃度的篩選試驗(yàn)。設(shè)置的4個(gè)處理的培養(yǎng)基配方為MS+NAA（0.3、0.5、0.7、0.9 mg/L）+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L（pH值5.8），分別用A1、A2、A3和A4代表，互為對(duì)照。培養(yǎng)基配制完成后，于121～125 ℃高溫高壓濕熱條件下滅菌25 min，取出后置于培養(yǎng)室中3～5 d備用。

試驗(yàn)時(shí)，將白芨叢生苗切分成單苗均勻地接種于上述4個(gè)處理的培養(yǎng)基中，每個(gè)處理接種6瓶（重復(fù)），每瓶接種3株單苗。接種完成后于培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為23～26 ℃，光照強(qiáng)度為1 500～2 000 lx，光照時(shí)長(zhǎng)為12 h/d。培養(yǎng)30 d后，統(tǒng)計(jì)、觀察各處理、各重復(fù)白芨試管苗的株高、葉片數(shù)、新生芽數(shù)和苗的健壯程度、葉片質(zhì)量、新芽壯弱等指標(biāo)，并對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 ? ?結(jié)果與分析

不同處理的試管苗經(jīng)過(guò)30 d培養(yǎng)后，各處理試管苗的平均株高、平均葉片數(shù)、平均新芽數(shù)和健壯程度等指標(biāo)如表1所示。可以看出，隨著NAA濃度呈梯度增加（即NAA與6-BA濃度比值呈梯度增加，下同），白芨試管苗的平均株高及健壯程度隨之增加，而苗的平均葉片數(shù)和新芽數(shù)則逐漸減少。

2.1 ? ?不同處理白芨試管苗的株高

從表2可以看出，各處理的平均株高隨著NAA濃度呈梯度的增加而逐漸升高。方差分析可知，各處理間的平均株高差異達(dá)到了極顯著水平，說(shuō)明不同濃度NAA對(duì)白芨試管苗株高的影響極大，當(dāng)培養(yǎng)基中NAA濃度呈梯度逐漸增加時(shí)，會(huì)加速白芨苗的增長(zhǎng)。進(jìn)一步多重比較（SSR檢驗(yàn)，下同）后可得出，A4與A1、A2差異極顯著，與A3差異顯著;A3與A1差異顯著，與A2差異不顯著;A2與A1差異不顯著。說(shuō)明，A4培養(yǎng)基（MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.9 mg/L）能極顯著地促進(jìn)白芨試管苗的高生長(zhǎng)。結(jié)合對(duì)試管苗健壯程度的觀察，可以得出在6-BA濃度為0.5 mg/L不變的情況下，當(dāng)NAA濃度增加到0.9 mg/L時(shí)，對(duì)白芨試管苗的壯苗效果最佳。

2.2 ? ?不同處理白芨試管苗的葉片數(shù)

由表3可以看出，各處理培養(yǎng)條件下白芨試管苗平均每叢葉片數(shù)伴隨著NAA濃度呈梯度的增加，呈現(xiàn)出逐漸減少的趨勢(shì)，由A1的每叢16個(gè)減少為A4的每叢8個(gè)。而葉片質(zhì)量卻逐漸提高，葉色由淡黃色逐漸增加為濃綠色，葉片大小由小逐漸變大，葉片長(zhǎng)勢(shì)也由弱逐漸變好變強(qiáng)。進(jìn)行方差分析和多重比較后可以得出，各處理平均葉片數(shù)之間的差異達(dá)到了極顯著水平，說(shuō)明NAA濃度呈此梯度的增加對(duì)白芨試管苗葉片數(shù)的減少影響極為顯著。結(jié)合葉片的質(zhì)量和長(zhǎng)勢(shì)，可以進(jìn)一步說(shuō)明A4培養(yǎng)基更能促進(jìn)白芨試管苗的健壯生長(zhǎng)。

2.3 ? ?不同處理白芨試管苗的新增芽數(shù)

由表4可以看出，白芨試管苗經(jīng)過(guò)各處理培養(yǎng)基的壯苗培養(yǎng)之后，新增芽數(shù)隨著NAA濃度呈梯度的增加而逐漸減少，由A1的平均每叢8.67個(gè)新芽減少到A4的平均每叢4.00個(gè)新芽。而新芽的葉片則隨著NAA濃度的增加由小逐漸增大，新芽由嫰弱逐漸變健壯。進(jìn)行方差分析和多重比較后可以得出，除了A3與A4的平均芽數(shù)差異顯著之外，其余各處理的平均芽數(shù)之間均達(dá)到了極顯著差異。結(jié)合新芽葉片大小和壯弱程度的觀察比較，更進(jìn)一步說(shuō)明A4培養(yǎng)基的壯苗效果最好。A4培養(yǎng)基培養(yǎng)出來(lái)的試管苗，增殖的新芽數(shù)量比較適中且比較健壯，利于后續(xù)的生根培養(yǎng)和移栽成活等。

3 ? ?結(jié)論與討論

綜上所述，本次試驗(yàn)以經(jīng)過(guò)叢芽增殖培養(yǎng)后獲得的1.5 cm左右高的紫花白芨試管苗為壯苗培養(yǎng)的起始材料，以MS+6-BA 0.5 mg/L同時(shí)添加不同濃度的NAA（0.3、0.5、0.7、0.9 mg/L）為對(duì)比培養(yǎng)基，對(duì)紫花白芨試管苗壯苗培養(yǎng)的適宜NAA濃度進(jìn)行了篩選。試驗(yàn)結(jié)果表明，MS+NAA 0.9 mg/L+6-BA 0.5 mg/L培養(yǎng)基的壯苗培養(yǎng)效果最好，白芨試管苗平均株高達(dá)到了4.72 cm，平均每叢葉片數(shù)和新增芽數(shù)分別為8個(gè)和4個(gè)。在此培養(yǎng)基培養(yǎng)下，試管苗的新增芽數(shù)較適中，植株生長(zhǎng)勢(shì)、葉片質(zhì)量和苗叢的健壯程度等均最好，能夠?yàn)楹罄m(xù)白芨試管苗的生根培養(yǎng)和移栽成活等提供較好的物質(zhì)基礎(chǔ)。

在本次白芨試管苗的壯苗培養(yǎng)試驗(yàn)中，在其他培養(yǎng)條件相同的情況下，NAA作為生長(zhǎng)素類(lèi)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有使細(xì)胞伸長(zhǎng)，從而促進(jìn)植株健壯生長(zhǎng)的作用。其試管苗壯苗的效果主要由NAA濃度或NAA與6-BA的濃度比決定的，NAA濃度呈梯度的增加或減少，直接顯著地影響了白芨試管苗壯苗培養(yǎng)時(shí)的株高、葉片數(shù)、新增芽數(shù)和植株健壯程度等生理指標(biāo)。本次試驗(yàn)結(jié)果與鄒 ?娜等[10]的研究結(jié)論較一致。通過(guò)壯苗培養(yǎng)，可以獲得健壯的白芨試管苗，為白芨試管優(yōu)質(zhì)種苗的生根培養(yǎng)提供物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)白芨人工栽培用優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化規(guī)模化生產(chǎn)。建議今后在白芨試管苗增殖培養(yǎng)階段所獲得的植株較健壯的情況下，可進(jìn)行壯苗和生根同步進(jìn)行的適宜培養(yǎng)基及其激素濃度組合篩選的試驗(yàn)探索，以用于優(yōu)化白芨優(yōu)質(zhì)試管種苗的快速繁殖技術(shù)體系[11-12]。

4 ? ?參考文獻(xiàn)

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