核磁共振法定量測定氫溴酸東莨菪堿的絕對含量研究

梁麗娜 時(shí)惠敏 周群華

【摘 要】 目的：探討核磁共振法定量測定氫溴酸東莨菪堿的絕對含量。方法：使用核磁共振法定量測定氫溴酸東莨菪堿的絕對含量。解析氫溴酸東莨菪堿H譜、含量、殘留溶劑的核磁共振法定量測定結(jié)果。結(jié)果：δ1.64對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為d，J為17，歸屬為6（a）-H，δ1.85對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為d，J為17，歸屬為7（a）-H，δ2.21對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為m，J為17、4.5，歸屬為6（e）-H，δ2.28對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為m，J為17、4.5，歸屬為7（a）-H，δ2.63對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為3，峰型為s，歸屬為10-CH3，δ2.82對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為d，J為3.5，歸屬為3-H，δ3.59對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為2，峰型為m，歸屬為2-H、4-H，δ3.79對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為3，峰型為m，歸屬為22-H、1-H、21（b）-H，δ4.02對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為m，歸屬為21（a）-H，δ4.87對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為t，J為5，歸屬為8-H，δ6.63對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為4，峰型為s，歸屬為IS-H（4），δ7.20對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為2，峰型為m，歸屬為16-H、20-H，δ7.26對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為3，峰型為m，歸屬為17-H、18-H、19-H;以δ2.63峰計(jì)算樣本含量結(jié)果中，樣1為91.4，樣2為91.6，平均值為91.5;以δ2.82峰計(jì)算樣本含量結(jié)果中，樣1為91.2，樣2為91.8，平均值為91.5;以δ3.47峰計(jì)算乙醇含量結(jié)果中，樣1為3.8，樣2為3.8，平均值為3.8;以δ1.02峰計(jì)算乙醇含量結(jié)果中，樣1為3.8，樣2為3.8，平均值為3.8。結(jié)論：氫溴酸東莨菪堿的絕對含量檢測中，核磁共振法定量測定方法更加準(zhǔn)確快速，同時(shí)可以對其中的未知雜質(zhì)進(jìn)行定量、定性分析，是對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)絕對含量進(jìn)行測定的良好方法，值得使用。臨床上應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 核磁共振法定量;測定;氫溴酸東莨菪堿;絕對含量;研究

【中圖分類號】 R6 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】B ? 【文章編號】1005-0019（2020）17-047-01 ?當(dāng)前，使用核磁共振定量法對藥物進(jìn)行定量、定性分析、對含量進(jìn)行測定越來越廣泛，在英國、歐洲、美國藥典中均有此方法，我國在2010年首次收載了核磁共振波譜法[1]。氫溴酸東莨菪堿是一種抗膽堿藥，在中國藥典2010年版本中有所收載[2]。此次研究主要是對核磁共振法定量測定氫溴酸東莨菪堿的絕對含量情況進(jìn)行研究，希望可以為臨床測定氫溴酸東莨菪堿的絕對含量提供新的思路，研究如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 （1）選擇核磁共振譜儀（AvanceDRX500型，瑞士布魯克） 進(jìn)行測定，配備超屏蔽超導(dǎo)磁體（11.74T）、雙核z-梯度探頭（5mm，DUEL）、溫控單元（BVT-2000）、實(shí)驗(yàn)控制、數(shù)據(jù)處理專用軟件（Topspin（1.3））、分析天平（METTLERTOLEDOAE240）。（2）試劑氫溴酸東莨菪堿、樣品由廣州漢方公司生產(chǎn)提供;苯二酚（純度99.5%，ACROS公司生產(chǎn)提供）;重水（產(chǎn)品號：174611，99.8%氘代，J&KScientific公司生產(chǎn)提供）[3]。氫溴酸東莨菪堿對照品批號：100049-200308。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備 稱取適量的氫溴酸東莨菪堿對照品與苯二酚，在其中加入適量體積的重水配置成0.068mol/L、0.052mol.L-1的溶液，后將其轉(zhuǎn)入到核磁管中備用（5mm）[4]。

1.2.2 測定條件 使用脈沖序列（zg30）在25℃恒溫條件下獲得1核磁共振譜。試驗(yàn)參數(shù)設(shè)置：譜寬（SWH）：5000Hz;采樣時(shí)間（AQ）：3.2s;采樣點(diǎn)數(shù)（TD）：32K;射頻中心頻率（O1P）：2500Hz;增益（RG）：160;空掃次數(shù)（DS）：2次;采樣次數(shù)（NS）：8次;馳豫延遲時(shí)間（D1）：15s。

1.2.3 圖譜測定結(jié)果 采集圖譜（見圖2），對樣品與苯二酚的選定峰的峰面積相對比值進(jìn)行測定，對含量進(jìn)行計(jì)算。

1.2.4 內(nèi)標(biāo)選擇 苯二酚容易溶于水，故將其作為了內(nèi)標(biāo)，樣品中苯二酚化學(xué)位移為6.6ppm，和樣品的氫信號分離度比較好。

1.2.5 溶劑選擇 樣品和內(nèi)標(biāo)均比較溶于水，溶劑峰對測定結(jié)果不會(huì)造成干擾，因此，重水為溶劑。

1.2.6 定量峰選擇 選擇獨(dú)立尖銳雙重峰δ2.82的單氫信號、單峰δ2.63的-CH3氫信號，均與相鄰峰的分離度比較好。

1.2.7 儀器參數(shù)選擇 馳豫延遲時(shí)間（d1）對積分值的影響比較大，因此建議選擇規(guī)定D1值為1-5倍的縱向弛豫時(shí)間（T1）。翻轉(zhuǎn)恢復(fù)試驗(yàn)對質(zhì)子共振譜線T1值進(jìn)行測定，最大縱向弛豫時(shí)間：2.5s。為了確保每次采樣間地共振信號強(qiáng)度相同，本次選擇的D1值：15s。最終顯示，該選擇可以有效滿足測量精度的要求。掃描8次可以達(dá)到信噪比要求。

1.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 將樣品圖譜重復(fù)積分5次，對單氫信號峰（δ2.82ppm）與內(nèi)標(biāo)對苯二酚的定量峰面積比值進(jìn)行計(jì)算，RSD：0.25%。

1.2.9 定量結(jié)果分析 通過兩組氫信號定量結(jié)果分析基本相同，且與上批對照品作為外標(biāo)使用HPLC法對結(jié)果進(jìn)行測定，與92.27%的結(jié)果的基本相同。且與核磁中溶劑峰相對比，可以在本品氫譜上看

到一組比較明顯的乙醇?xì)湫盘枺é?.47;q;-CH2-;δ1.02;t;-CH3）（具體見圖2），提示本品中含有揮發(fā)性雜質(zhì)乙醇。同時(shí)使用GC法對本品的殘留溶劑進(jìn)行檢查，供試品溶液色譜圖中有較大未知峰，將乙醇作為對照品，并通過DB-624、聚乙二醇為填料對其進(jìn)行測定，確定峰值為乙醇，含量為4.03%，與核磁定量法檢測的結(jié)果基本相同，因此，本品干燥失重與卡式爐水分的差值為3.78%。

1.3 觀察指標(biāo) （1）解析氫溴酸東莨菪堿H譜[5]。

（2）分析含量、殘留溶劑的核磁共振法定量測定結(jié)果[6]。

2 結(jié)果

2.1 氫溴酸東莨菪堿H譜解析 δ1.64對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為d，J為17，歸屬為6（a）-H，δ1.85對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為d，J為17，歸屬為7（a）-H，δ2.21對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為m，J為17、4.5，歸屬為6（e）-H，δ2.28對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為m，J為17、4.5，歸屬為7（a）-H，δ2.63對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為3，峰型為s，歸屬為10-CH3，δ2.82對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為d，J為3.5，歸屬為3-H，δ3.59對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為2，峰型為m，歸屬為2-H、4-H，δ3.79對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為3，峰型為m，歸屬為22-H、1-H、21（b）-H，δ4.02對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為m，歸屬為21（a）-H，δ4.87對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為1，峰型為t，J為5，歸屬為8-H，δ6.63對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為4，峰型為s，歸屬為IS-H（4），δ7.20對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為2，峰型為m，歸屬為16-H、20-H，δ7.26對應(yīng)的氫個(gè)數(shù)為3，峰型為m，歸屬為17-H、18-H、19-H，見表1。

2.2 含量、殘留溶劑的核磁共振法定量測定結(jié)果分析 以δ2.63峰計(jì)算樣本含量結(jié)果中，樣1為91.4，樣2為91.6，平均值為91.5;以δ2.82峰計(jì)算樣本含量結(jié)果中，樣1為91.2，樣2為91.8，平均值為91.5;以δ3.47峰計(jì)算乙醇含量結(jié)果中，樣1為3.8，樣2為3.8，平均值為3.8;以δ1.02峰計(jì)算乙醇含量結(jié)果中，樣1為3.8，樣2為3.8，平均值為3.8，見表2。

3 討論

在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)化的期間，對化合物地絕對含量、雜質(zhì)組成進(jìn)行確定非常關(guān)鍵。當(dāng)前，核磁共振法測定定量限（LOQ）、檢測限（LOD）的準(zhǔn)確度顯著提高，在一定程度上可以代替色譜法[7]。且核磁定量法測定氫溴酸東莨菪堿的絕對含量是一個(gè)切實(shí)可行的辦法，可以對未知成分進(jìn)行確定[8]。

綜上所述，氫溴酸東莨菪堿的絕對含量檢測中，核磁共振法定量測定方法更加準(zhǔn)確快速，同時(shí)可以對其中的未知雜質(zhì)進(jìn)行定量、定性分析，是對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)絕對含量進(jìn)行測定的良好方法，值得使用。

參考文獻(xiàn)

[1] 蘇俊霖，董汶鑫，馮杰，等.黏土表面結(jié)合水的低場核磁共振定量研究[J].鉆井液與完井液，2018，35（1）：8-12.

[2] 張垚.基于低場核磁共振技術(shù)的玉米單子粒含水率測定方法研究[J].玉米科學(xué)，2018，26（3）：89-94.

[3] 高飛，閆鑌，曾磊，等.非增強(qiáng)核磁共振圖像中肝臟腫瘤病理分級的定量分析方法[J].生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，2019，55（4）：581-589.

[4] Zhao J， Khan I A， Combrinck S ， et al. 1H-NMR and UPLC-MS metabolomics： Functional tools for exploring chemotypic variation in Sceletium tortuosum from two provinces in South Africa[J]. Phytochemistry， 2018， 152（Suppl 2）：191-203.

[5] 張臣，陳輝，趙蕾，等.磁共振相位對比法評價(jià)老年慢性阻塞性肺疾病患者肺動(dòng)脈血流及右心功能[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2019，38（5）：542-546.

[6] 李志清，孫洋，胡瑞林，等.基于核磁共振法的頁巖納米孔隙結(jié)構(gòu)特征研究[J].工程地質(zhì)學(xué)報(bào)，2018，26（3）：758-766.

[7] 郝金華.超聲耦合劑軟膠袋墊襯法對磁共振高分辨率睪丸成像質(zhì)量影響[J].放射學(xué)實(shí)踐，2018，44（06）：627-632.

[8] Roy K S， Goud R D， Mazumder A ， et al. Triazine-Based Covalent Organic Framework： A Promising Sorbent for Efficient Elimination of the Hydrocarbon Backgrounds of Organic Sample for GC-MS and 1 H NMR Analysis of Chemical Weapons Convention Related Compounds[J]. ACS Applied Materials & Interfaces， 2019， 11（17）：16027-16039.