兩種酒精依賴SD大鼠模型制備的比較

安子宜 李齊 楊勇

【摘 要】 目的：建立兩種酒精依賴SD大鼠模型，并探討其優(yōu)缺點(diǎn)，為制備酒精依賴動(dòng)物模型提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：根據(jù)不同模式建立兩種SD大鼠酒精依賴模型。結(jié)果：兩種模式都能成功建立酒精依賴動(dòng)物模型。結(jié)論：兩種酒精依賴模型均能開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，10%酒精依賴模型組焦慮狀態(tài)更明顯，成模型效果更好，更適宜進(jìn)行酒精依賴后短期戒斷實(shí)驗(yàn)研究。

【關(guān)鍵詞】 酒精依賴模型;高架十字迷宮

【中圖分類號(hào)】 R749 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A ? 【文章編號(hào)】1005-0019（2020）17-088-01 ?酒精依賴已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題[1]。全世界約有230萬人死于與酒精有關(guān)的疾病 [2]。目前國(guó)內(nèi)外常用的建立酒精依賴動(dòng)物模型包括自由飲、灌胃、腹腔注射等方式[3] ，本研究采用自由飲方式建立了兩種酒精依賴動(dòng)物模型，并進(jìn)行分析比較，為酒精依賴相關(guān)的分子生物學(xué)研究提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 采用體重為170～200g（6周齡）的SPF級(jí)雄性SD大鼠30只，自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司【SCXK（遼）2015-0001】購(gòu)買。于牡丹江醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)鼠類實(shí)驗(yàn)室【SYXK（黑）2019-006】進(jìn)行動(dòng)物模型的構(gòu)建及檢測(cè)。

1.1.2 試劑及儀器 無水乙醇;高架十字迷宮

1.2 方法

1.2.1 酒精依賴動(dòng)物模型的構(gòu)建 30只SPF級(jí)雄性SD大鼠單籠飼養(yǎng)在SPF級(jí)動(dòng)物室，光照/黑暗周期為12h。實(shí)驗(yàn)前大鼠用Excel軟件隨機(jī)分為3組，每組10只，分別為（A）對(duì)照組，（B）20%酒精依賴模型組和（C）10%酒精依賴模型組。

1.2.1.1 20%酒精依賴模型組的構(gòu)建 B組為雙瓶自由間歇性飲酒模型，第一天9：00雙瓶分別為蒸餾水和20%酒精溶液，24h時(shí)后測(cè)量飲水量（ml/24h）和飲酒量（ml/24h），并將20%酒精瓶替換為水瓶，此時(shí)，大鼠飲用雙瓶水。如此反復(fù)交替，為了防止位置偏愛對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，每次交替水瓶和酒瓶的位置，共28天。

1.2.1.2 10%酒精依賴模型組的構(gòu)建 C組為雙瓶自由連續(xù)性飲酒模型，一瓶為蒸餾水，一瓶為10%酒精溶液，每天9：00測(cè)量飲水量（ml/24h）和飲酒量（ml/24h），記錄數(shù)據(jù)并更換水瓶和酒瓶的位置，所有溶液每天更新一次，連續(xù)造模4周，共28天。

1.2.2 高架十字迷宮檢測(cè) 在最后一次飲酒24h后，將3組大鼠置于安靜、昏暗且光線恒定、溫度恒定在24℃的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。大鼠于高架十字的中央處開始測(cè)試，測(cè)試時(shí)間為3min。實(shí)驗(yàn)參數(shù)包括：總路程（總活動(dòng)度）;開臂進(jìn)入次數(shù);開臂進(jìn)入次數(shù)百分比;開臂滯留時(shí)間;開臂滯留時(shí)間百分比等。

1.2.3 酒精戒斷綜合征評(píng)分（EWS） 在撤出酒精24h、48h和72h后對(duì)三組大鼠進(jìn)行酒精戒斷行為學(xué)觀察評(píng)分。觀測(cè)項(xiàng)目包括刻板行為、激惹性、尾巴強(qiáng)直、異常姿勢(shì)和聽源性癲癇發(fā)作情況，該5個(gè)項(xiàng)目相加為總的評(píng)分，評(píng)分越高說明戒斷癥狀越嚴(yán)重。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 23.0軟件，數(shù)值變量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組組間比較采用單因素方差分析（ANOVA），以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩組間比較采用LSD檢驗(yàn)，繪制統(tǒng)計(jì)圖運(yùn)用Graphpad Prism 7.0。

2 結(jié)果

2.1 造模期間兩個(gè)模型組的飲酒量和飲酒偏好 在雙瓶自由飲模式下，B組經(jīng)過14次循環(huán)間歇飲酒的酒精攝入量逐漸增加，最后到達(dá)平臺(tái)期（17.20±0.82）ml/24h，而飲水量隨著飲酒量的增加而下降，直至穩(wěn)定在（12.95±1.23）ml/24h，酒精偏好增加到（57.10±3.06）%，見圖1（A和B）。C組經(jīng)過28次連續(xù)飲酒在最后7天的酒精攝入量（16.45±0.85）ml/24h保持穩(wěn)定，飲水量穩(wěn)定在（11.91±0.66）ml/24h，酒精偏好穩(wěn)定在（58.0±0.23）%，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見圖1（C和D）。

2.2 高架十字迷宮測(cè)試比較各組行為學(xué)變化 在模型組最后一次飲酒24h后，對(duì)B、C組和A組大鼠進(jìn)行高架十字迷宮檢測(cè)。大鼠在開放臂的探索時(shí)間增加，表示其焦慮程度較低;若大鼠在開放臂的探索時(shí)間減少，則表示其焦慮程度相對(duì)較高，選取焦慮程度較高的大鼠為酒精依賴成功模型。高架十字迷宮檢測(cè)結(jié)果情況見表1圖2。

2.3 酒精戒斷評(píng)分評(píng)估大鼠的戒酒癥狀 撤出酒精24h、48h和72h后對(duì)大鼠進(jìn)行酒精戒斷行為學(xué)觀察評(píng)分見表2。

3 討論

成功建立動(dòng)物模型是進(jìn)展實(shí)驗(yàn)研究的關(guān)鍵步驟。酒精依賴動(dòng)物模型以自由飲方式進(jìn)行構(gòu)建模型，避免了連續(xù)腹腔注射引起的感染，大大降低了動(dòng)物死亡率[4]。本實(shí)驗(yàn)選用SD大鼠品系制備10%雙瓶連續(xù)飲酒和20%雙瓶間斷飲酒兩種不同的酒精依賴動(dòng)物模型。兩種酒精依賴模型均能開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，10%酒精依賴模型組焦慮狀態(tài)更明顯，成模型效果更好，更適宜進(jìn)行酒精依賴后短期戒斷實(shí)驗(yàn)研究。

參考文獻(xiàn)

[1] Müller CP， Chu C， Qin L， et al. The Cortical Neuroimmune Regulator TANK Affects Emotional Processing and Enhances Alcohol Drinking： A Translational Study[J]. Cereb Cortex， 2019， 29（4）： 1736-1751.

[2] Charlet K， Heinz A. Harm reduction-a systematic review on effects of alcohol reduction on physical and mental symptoms[J]. Addict Biol， 2017 ， 22（5）： 1119-1159.

[3] 王睿哲. 外側(cè)韁核和伏隔核DNMT1和PRMT1表達(dá)在大鼠酒精依賴中的作用[D].吉林大學(xué)，2019.

[4] Deal AL， Konstantopoulos JK， Weiner JL，et al. Exploring the consequences of social defeat stress and intermittent ethanol drinking on dopamine dynamics in the rat nucleus accumbens[J]. Sci Rep， 2018， 8（1）： 332.