農殘快速檢測常見問題探討

郝 明

（遼寧省檢驗檢測認證中心 遼寧省農產品及獸藥飼料產品檢驗檢測院，遼寧 沈陽 110016）

食品安全越來越引起世界各國的重視，它與人民健康有著直接的聯系，因此，世界各國在嚴格控制農藥施用的同時加大對農產品中農藥殘留量監測檢測的力度。在我國，“無公害蔬菜”“菜籃子”工程也已納入到各級政府的日常工作中。農藥殘毒快速檢測酶抑制技術以其操作簡便、檢測效率高、檢測成本低、對人員技術水平要求低、易于在基層（生產基地、批發市場）推廣使用等優勢，是當前我國控制農產品中高毒農藥殘留的使用最廣泛的一種方法。但是在實際樣品檢測時，常出現空白值過低、樣品吸光值過高、抑制率值為負數，以及假陰性、假陽性問題。“錯檢”“錯判”屢屢發生。這不僅使農業生產者遭受損失，消費者對農產品質量安全難以放心，同時也給農產品質量安全監管帶來困擾。筆者通過半年來近300個不同種類蔬菜樣品的檢測和大量加標對比試驗，從檢測原理、藥品配制及樣品前處理、上機檢測、試驗結果說明、儀器選擇等五部分，對如何解釋、解決以上問題加以說明。

1 檢測原理

農藥殘毒快速檢測酶抑制技術是根據有機磷、氨基甲酸酯類農藥具有抑制動物神經系統中乙酰膽堿酯酶活性，造成其神經系統傳導介質乙酰膽堿的過渡積累，引發神經傳導異常，導致動物中毒致死這一原理開發出來的。即如果農產品的提取液中不含有機磷、氨基甲酸酯類農藥或農藥殘留量很低，酶活性就不會被抑制，底物就會被全部或部分水解，其產物與顯色劑產生顏色；反之，則不顯色或顯色變化范圍較小，應用農藥殘毒快速檢測儀測定其吸光值隨時間變化，便可得出抑制率，據此判定農藥殘留情況。此項技術實質就是一個典型的酶促反應，因此，其受酶的質量和酶促反應條件影響巨大。對影響酶促反應的溫度、酸堿度、氧化還原電位等關鍵參數予以控制，嚴格把握酶的種類、純度、活性和酶濃度等關鍵核心要素是保證分析的靈敏度、準確度和重現性的必由之路。

2 試劑配制和樣品前處理

2.1 試劑配制

試劑配制包括提取劑、酶、底物及顯色劑。其中提取劑配制至關重要，要注意緩沖鹽的純度差別對緩沖液pH值的影響，必要時應對其pH加以校正至8.0。酶液、底物和顯色劑應注意保存和使用溫度，防止變質失效。實驗表明，丁酰膽堿酯酶溶液在溫度23.5℃和濕度70%條件下，酶快速失活，5小時后基本失活，24小時后⊿AC≈0.0，酶完全失活。此外還應注意使用前酶活性的驗證。如果空白值⊿AC＜0.4，即表明酶活性降低，在適當加大酶的用量后仍未達到要求，就必須對酶進行更換，確保實驗結果準確。

2.2 樣品前處理

樣品提取須按農產品種類選擇適宜的檢測部位。葉菜類蔬菜應去腐、枯、蕊葉，并選擇不同植株的葉片；果菜、豆菜類蔬菜應從表皮至果肉1～1.5厘米處取樣，果肉不要取的過多；葉綠素等色素較高的農產品取樣時要避免切的過碎，降低色素干擾；對茄子等易氧化農產品切碎后要立即加入提取劑，避免氧化致使提取液顏色加深，導致樣品本底吸光值升高。樣品制備最好選擇5毫升培養管，大規格的培養管容易造成微量的試劑殘留在管壁上，無法完全進入到培養液中，引起誤差。與此同時，也應保證培養箱的溫度和培養時間在37.0～38.0℃和30分鐘。

3 上機檢測

上機檢測必須要保證儀器穩定、比色杯無色差，并控制操作時間。在RP508上分別對丁酰膽堿酯酶、乙酰膽堿酯酶做平行對比試驗，結果表明（見表1），使用丁酰膽堿酯酶的空白⊿AC隨時間變化大，其活性較高，加入底物后反應快速，所以，應盡量縮短操作時間，否則隨著Ai、Af值不斷升高，⊿AC值將迅速減小，影響檢測的靈敏度；與此相反，用乙酰膽堿酯酶的空白⊿AC受操作時間影響不大。

4 試驗結果

4.1 空白值

從300個樣品近12個批次的檢測和百余個對比試驗中得出，用丁酰膽堿酯酶，⊿AC的正常值為0.620左右（見表2）。當然，不同的酶在不同型號儀器上因儀器設計差異、檢測條件不同和酶活性差異，其空白值是不同的。

表1 Ai、Af、⊿AC 值統計表

4.2 吸光值

樣品吸光值（Ai、Af）偏高是檢測中常見的問題。酶活性降低、樣品本底顏色深和反應中化學、物理干擾是其產生的根本原因。酶失效會引起其顏色加深（由乳白色變為黃色）、樣品色素含量高、提取液中含有樣品組織液等都會使透過光被額外的吸收或被散色，使透光率降低，在吸光度上表現為值的增大。通過對用丁酰膽堿酯酶在VIS7220SC上所做的大量試驗數據的匯總得出，對于殘留農藥低于檢出線的樣品的Ai、Af分別按正態分布統計得出：Ai=0.6±0.1、Af=1.2±0.1應為正常值。

4.3 抑制率為負

樣品檢測結果偶爾出現負值，且負值誤差在-10%以內，是可以被接受的。其產生原因主要是操作誤差。酶分解底物，分解物再與顯色劑結合的動力學過程迅速，操作者操作不熟練就會產生這樣的人為誤差。但隨著操作者操作熟練度的提高，其是可以避免的。

表2 樣品空白值統計表（儀器：VIS7220SC；溫度15.0～26.0℃；濕度51%～73%）

4.4 假陽性與假陰性

假陽性是因酶活性降低或失活，使底物不能被水解，無法與顯色劑結合顯色造成的。假陰性是因為特定農藥對某種酶抑制作用很小或無作用而產生的，表現出無農藥的假象。除此，化學干擾在假陽性和假陰性問題上也是值得關注的。如植物細胞中大量的微粒體氧化酶和解毒酶，這些酶可以把對硫磷、樂果等分別氧化成毒性更高的對氧化磷和氧化樂果；但大部分氧化酶、水解酶都可以快速把眾多殺蟲劑通過羥基化、裂解等方式，轉化為低毒甚至無毒的化合物。因此，只能通過選擇有較好活性、較強選擇性的酶來盡量減少此類問題的發生。至于化學干擾的排除目前還沒有很好的解決辦法。

5 儀器的選擇

當今市場上銷售的農藥殘毒快速檢測儀形形色色，這些儀器雖然在功能上、自動化程度上有所差別，但從儀器穩定性和檢測靈敏度上看，其中的差別并不是很明顯。因此，在儀器的選擇上應根據各地的經濟狀況，檢測人員的技術水平來挑選適合本地實際檢測工作的儀器型號。