結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)聯(lián)合降鈣素原檢測(cè)對(duì)結(jié)核桿菌感染的臨床意義分析

王琳

肺外結(jié)核是目前臨床上常見(jiàn)的一種慢性傳染病。近年來(lái)，環(huán)境不斷惡化導(dǎo)致我國(guó)結(jié)核病的發(fā)病率逐年上升。肺外結(jié)核已經(jīng)嚴(yán)重危害我國(guó)患者的健康和生活質(zhì)量，因此肺外結(jié)核的診斷非常重要［1］。目前，細(xì)菌學(xué)診斷是臨床診斷肺外結(jié)核較為準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，但細(xì)菌學(xué)診斷檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，對(duì)肺外結(jié)核的診斷正確率并不高。近年來(lái)，結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)檢測(cè)是檢測(cè)肺外結(jié)核的有效方法，是在QuantiFERON-TBGold試驗(yàn)基礎(chǔ)上改進(jìn)的新型免疫學(xué)方法。本研究在結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)檢測(cè)的基礎(chǔ)上聯(lián)合PCT 檢測(cè)對(duì)患者臨床意義，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2019 年1 月～2020 年1 月收治的270 例疑似結(jié)核感染患者納入實(shí)驗(yàn)組，參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)制定的《肺結(jié)核診斷和治療指南》［2］，對(duì)患者進(jìn)行診斷，并且將結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性、組織病理學(xué)檢查呈干酪樣壞死改變的患者納入活動(dòng)性結(jié)核組，將陳舊性結(jié)核病、結(jié)核潛伏感染患者納入非活動(dòng)性結(jié)核組。270 例實(shí)驗(yàn)組患者中，72 例為結(jié)核感染［活動(dòng)性結(jié)核46 例(活動(dòng)性結(jié)核組)，非活動(dòng)性結(jié)核26 例(非活動(dòng)性結(jié)核組)］，198 例為非結(jié)核感染(非結(jié)核組)。選取同期健康體檢人群100 例納入對(duì)照組。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①疑似結(jié)核感染，自愿接受結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)和PCT 聯(lián)合檢測(cè)，經(jīng)痰培養(yǎng)明確診斷；②病歷資料完整，影像學(xué)檢查無(wú)腫瘤類疾病，實(shí)驗(yàn)室檢查確認(rèn)身體狀態(tài)良好。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①具有肝腎功能障礙的患者，代謝系統(tǒng)疾病的患者；②自身免疫系統(tǒng)疾病的患者；③有免疫抑制劑或免疫增強(qiáng)類藥物使用史的患者；④不愿意參加者。

1.3 方法 所有受試者均采集外周靜脈血進(jìn)行結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)。由上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)研究科技有限公司提供結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)檢測(cè)試劑盒，5 h 內(nèi)分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。將細(xì)胞重新懸浮于aim-v 培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞濃度為2.5×106/ml 來(lái)制備標(biāo)準(zhǔn)溶液。將50 μl 的aim-v 培養(yǎng)基和植物血凝素分別加入到實(shí)驗(yàn)組以及對(duì)照組的微孔板中。依次向每個(gè)孔中加入100 μl 含2.5×105PBMC 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將微孔板置于36.6℃且CO2濃度5%的培養(yǎng)箱中25 h。洗脫后應(yīng)加入60 μl 底物顯色液，室溫孵育6 min，用蒸餾水徹底清洗培養(yǎng)板停止反應(yīng)。計(jì)算每個(gè)孔中色斑的數(shù)量。判定標(biāo)準(zhǔn)：陰性對(duì)照孔數(shù)＜5 個(gè)的試樣作為陰性，陰性對(duì)照孔數(shù)≥5 個(gè)的試樣為陽(yáng)性。PCT 檢測(cè)：采集受試者外周靜脈血5 ml，使用PCT 定量檢測(cè)試劑盒按照試劑盒使用說(shuō)明書檢測(cè)血清PCT 水平。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)聯(lián)合PCT 的檢測(cè)結(jié)果及血清PCT 水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)聯(lián)合PCT 的檢測(cè)結(jié)果 結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)聯(lián)合PCT 檢測(cè)的靈敏度為86.11%(62/72)，特異度為91.92%(182/198)。見(jiàn)表1。

2.2 各組受試者PCT 水平比較 活動(dòng)性結(jié)核組PCT(0.37±0.05)ng/ml 明顯高于非活動(dòng)性結(jié)核組的(0.20±0.11)ng/ml、非結(jié)核組的(0.09±0.06)ng/ml、對(duì)照組的(0.09±0.03)ng/ml，非活動(dòng)性結(jié)核組PCT 水平明顯高于非結(jié)核組、對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；非結(jié)核組與對(duì)照組的PCT 水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組受試者PCT 水平比較(，ng/ml)

表2 各組受試者PCT 水平比較(，ng/ml)

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與非結(jié)核組比較，bP＜0.05；與非活動(dòng)性結(jié)核組比較，cP＜0.05

3 討論

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種慢性傳染病，且結(jié)核桿菌可以侵襲人體的各種器官，但結(jié)核桿菌主要侵犯患者肺部，稱為肺結(jié)核，臨床高發(fā)［3］。其中呼吸道傳播是肺結(jié)核感染的一種主要途徑。患者感染途徑是患者接觸到結(jié)核桿菌排放的肺結(jié)核患者。在臨床上，發(fā)現(xiàn)更有效的診斷方法已成為了一種趨勢(shì)，由于該病影像學(xué)特征不明顯，痰細(xì)菌的陽(yáng)性率較低，診斷率不高，但是有著較高的漏診率與誤診率。結(jié)核菌素純蛋白衍生物試驗(yàn)在臨床上應(yīng)用比較多，是臨床上主要的診斷結(jié)核感染的指標(biāo)，其缺點(diǎn)為假陽(yáng)性率較高，在臨床應(yīng)用上局限性比較大。應(yīng)用結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對(duì)結(jié)核病進(jìn)行早期診斷已經(jīng)成為一種新的趨勢(shì)，該檢測(cè)準(zhǔn)確率比較高，但是結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)仍是結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)其診斷的局限性和誤診率高，主要是由于結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，但是敏感性低，已經(jīng)漸漸被新技術(shù)淘汰。血清結(jié)合抗體檢測(cè)其假陽(yáng)性比較高，主要的假陽(yáng)性群來(lái)自于既往感染過(guò)結(jié)核桿菌，但是已經(jīng)痊愈，或者對(duì)結(jié)核菌已獲得免疫力的群體，也會(huì)造成假陽(yáng)性，有些患者體質(zhì)特殊，還會(huì)造成假陰性，影響臨床診斷［4］。因此，臨床上探索一種有效的結(jié)核病診斷方法具有重要意義。

結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)是在細(xì)胞熒光技術(shù)單細(xì)胞水平檢測(cè)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型細(xì)胞免學(xué)檢測(cè)技術(shù)，細(xì)胞熒光技術(shù)具有較高的敏感性和特異性，臨床準(zhǔn)確率高。主要的工作原理是感染結(jié)核分枝桿菌，機(jī)體會(huì)出現(xiàn)記憶性T 淋巴細(xì)胞，如果再次受到結(jié)核分枝桿菌的感染，記憶性T 淋巴細(xì)胞會(huì)快速繁衍，效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞形成，抗干擾素-γ 分泌增多，因此通過(guò)檢測(cè)抗干擾素-γ 的淋巴細(xì)胞數(shù)目，可以準(zhǔn)確的判斷是否感染結(jié)核分枝桿菌［5］。由于結(jié)核病患者的不同階段，體液免疫與細(xì)胞免疫之間存在一定的失衡。此時(shí)，體液免疫和細(xì)胞免疫的檢測(cè)可以從不同角度反映結(jié)核病的診斷效果，在一定程度上提高了結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷的準(zhǔn)確性。在臨床上聯(lián)合應(yīng)用結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對(duì)結(jié)核病的診斷具有較高的敏感性和特異性，并且可以排除假陽(yáng)性，結(jié)合結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)可顯著提高結(jié)核病的診斷水平以及檢出率。由于我國(guó)患者結(jié)核病感染以及隱性結(jié)核病感染例數(shù)較多，因此，一些國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)只能作為參考，不能完全符合我國(guó)的實(shí)際情況。作者在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)特異性較高，特別是抗原A 孔和B 孔的斑點(diǎn)數(shù)＞25 時(shí)就強(qiáng)烈提示患者具有結(jié)核感染，但對(duì)結(jié)核桿菌敏感性較低。

本研究也具有一定的局限性，本研究的不足之處在于入選病例數(shù)少，非結(jié)核健康人與非結(jié)核肺疾病患者沒(méi)有分離。因此，在后期，需要繼續(xù)增加研究樣本的數(shù)量，進(jìn)一步研究結(jié)核病的診斷。另一點(diǎn)局限性為在敏感性評(píng)價(jià)中，部分受試者可能是臨床懷疑度高和缺乏細(xì)菌學(xué)證據(jù)的肺結(jié)核患者。特異性評(píng)價(jià)中沒(méi)有一名受試者有明確的活動(dòng)性肺結(jié)核接觸史，但經(jīng)臨床證實(shí)為其他感染疾病。由于對(duì)潛伏性肺結(jié)核感染的診斷沒(méi)有“金標(biāo)準(zhǔn)”。PCT 無(wú)激素活性，是降鈣素前肽物質(zhì)，非疾病狀態(tài)下血清中含量非常低，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)嚴(yán)重感染的情況下才會(huì)增加，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)嚴(yán)重細(xì)菌感染，會(huì)迅速分泌大量PCT。有研究顯示，當(dāng)機(jī)體處于結(jié)核桿菌感染活動(dòng)期是，其PCT 水平會(huì)高于非活動(dòng)期結(jié)核組，這與本研究的結(jié)果相同。分析原因，主要是因?yàn)殡S著機(jī)體結(jié)核感染的加重，機(jī)體轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1、腫瘤壞死因子-α、C 反應(yīng)蛋白、PCT 等多種細(xì)胞因子水平顯著上升，他們之間相互誘導(dǎo)，促進(jìn)結(jié)核疾病的進(jìn)展，導(dǎo)致結(jié)核結(jié)節(jié)和干酪樣壞死的發(fā)生發(fā)展。此外，葉綏艷等［6］使用結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)聯(lián)合PCT檢測(cè)結(jié)核感染發(fā)現(xiàn)，結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)準(zhǔn)確率明顯高于其他檢測(cè)方法，血清PCT 水平變化與結(jié)核感染患者預(yù)后呈顯著負(fù)相關(guān)，說(shuō)明對(duì)結(jié)核病的診斷和預(yù)后判斷，以上研究與本研究相同。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)聯(lián)合PCT 檢測(cè)的靈敏度為86.11%(62/72)，特異度為91.92%(182/198)。活動(dòng)性結(jié)核組PCT(0.37±0.05)ng/ml 明顯高于非活動(dòng)性結(jié)核組的(0.20±0.11)ng/ml、非 結(jié)核組的(0.09±0.06)ng/ml、對(duì)照組的(0.09±0.03)ng/ml，非活動(dòng)性結(jié)核組PCT 水平明顯高于非結(jié)核組、對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；非結(jié)核組與對(duì)照組的PCT 水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

綜上所述，對(duì)結(jié)核患者采取結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢驗(yàn)的意義顯著，特異性、敏感性強(qiáng)，結(jié)合血清PCT 檢測(cè)能夠輔助判斷病情發(fā)展及預(yù)后，兩種檢驗(yàn)同時(shí)應(yīng)用，具有較高的臨床診斷價(jià)值，臨床醫(yī)生可以聯(lián)合應(yīng)用，值得進(jìn)一步研究。