以功效為目標的五味安神片的提取工藝優化研究

趙權

（吉林農業科技學院中藥學院，吉林 吉林132101）

中醫中藥作為傳統的醫藥衛生和養生文化,是我國保健食品研制的重要理論基礎和有效的物質來源，特別是中藥類保健食品已經普遍受到了人們的認可和歡迎，并且具有廣闊的前景和需求。研究表明，北五味子具有補腎寧心的功效[1-2]，酸棗仁、靈芝、天麻等都具有養心安神的功效[3-4]。本產品根據中醫傳統理論，以五味子為君藥，酸棗仁為臣藥，佐以靈芝、天麻組成之復方，經提取制得的片劑。方中五味子配伍使用，可以起到收斂心氣，安神定志的作用；天麻調達肝氣，與五味子合用具有補益肝腎、寧心安神的功效；靈芝補氣安神，止咳平喘，臨床與酸棗仁、五味子配伍具有補肺心脾,止咳平喘，安神等功效。諸藥配伍，氣血并補，重在益氣，是氣血不足，心神不寧證的代表方。中藥提取主要以目標成分和浸膏得率的提取率為考核指標，但是復方中藥組分多，成分復雜，具體哪種中藥哪種成分起到作用很難判別，提取工藝是復方中藥開發產品的主要瓶頸，本產品開發提取部分改變以成分為考核指標的研發思路，以功效大小為考核指標，對藥材提取工藝進行優化，為后續的產品開發的中試及規模化生產提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

五味子、酸棗仁、靈芝、天麻購自吉林市東鵬大藥房。

1.2 試驗方法

1.2.1 提取。本方五味子：酸棗仁：天麻：靈芝的比列為2:2:1:1。考慮藥材成分的化學性質特點，五味子、酸棗仁、天麻中的木脂素、生物堿、皂苷及天麻素等成分更適合醇提，而靈芝多糖更適合水提，而靈芝多糖提取技術非常成熟和完善，因此靈芝多糖提取不做提取工藝優化處理。參考他人的工藝并適當修改，靈芝粉碎過80 目篩，料液比為1:20(g/mL)，浸提溫度為80℃，浸提時間為4h，提取后濃縮定容10ml[5]。方中五味子為非藥食同源，因此根據中藥學教材規定計量進行計算給藥[6]。五味子按成人體重50kg計算，每天6g即0.12g/kg，實驗小鼠體重0.02kg，通過計算得知小鼠每天五味子給藥量為0.0024g，按照給藥28 天計算，三次重復總量為0.2g，每次重復10 只小鼠，即總藥材量為2g。即每個單因素實驗藥材用量為五味子2g，酸棗仁2g、天麻1g，靈芝1g。前三種按照組方的比列混合粉碎進行提取工藝篩選，靈芝單獨水提取。提取次數分別為1 次、2 次和3 次；提取時間分別為4h、6h 和8h；料液比分別為1：8、1：12 和1：16，提取溫度分別為40℃、60℃和80℃，按照一定料液比加入75%的乙醇溶液進行提取，提取后揮干乙醇，加入靈芝提取液，定容到600ml 作為小鼠給藥原液。

1.2.2 閾下值催眠劑量戊巴比妥鈉小鼠入睡率試驗。由于戊巴比妥鈉通過肝酶代謝，而對該酶有抑制作用的藥物，也能延長戊巴比妥鈉睡眠時間，所以為了排除這種影響，應進行閾下劑量實驗[7]。每天取不同單因素提取液2ml 小鼠給藥，三次重復，第28 天給藥后，對照組給予等體積蒸餾水，30min 后，各組均按150mg/kg·bw腹腔注射戊巴比妥鈉，以翻正反射消失30s 以上作為入睡判斷標準，觀察受試物對注射閾下戊巴比妥鈉的小鼠入睡率的影響。

1.2.3 正交試驗優選提取工藝。根據單因素試驗結果，選擇提取工藝中對小鼠入睡率影響較大的因素，進行L9（34）正交試驗，以小鼠入睡率為評價指標確定最佳提取工藝。

2 結果與分析

2.1 提取次數對小鼠入睡率的影響

圖1 提取次數對小鼠入睡率的影響

提取次數對藥材有效成分提取影響很大，同時也影響處方藥的功效，提取次數增加有助于藥材功效成分浸出，但是次數增加相應增加成本。本實驗單因素設置了三次提取，由圖可以看出隨著提取次數的增加，小鼠入睡率也不斷增加，三次提取的入睡率分別為50.43%、55.62%和56.27%。三次重復數據進行方差分析，得出提取2次和3 次與提取1 次差異極顯著，2 次和3 次差異不顯著。故以提取次數為2 次為較優提取次數。

2.2 提取時間對小鼠入睡率的影響

圖2 提取時間對小鼠入睡率的影響

大量研究表明，提取時間與有效成分的提出成正比，但是有些成分會隨著時間的增長出現分解等現象，因此合理的提取時間對產品的功效影響很大。本實驗單因素設置了提取時間為4h、6h、8h。由圖可以看出隨著提取時間的增加，小鼠入睡率也不斷增加，三個時間提取的入睡率分別為50.16%、54.33%和54.61%。三次重復數據進行方差分析，得出提取6h 和8h 與提取4h 差異極顯著，6h 和8h 次差異不顯著。故以提取時間為6h 為較優提取時間。

2.3 提取料液比對小鼠入睡率的影響

圖3 提取料液比對小鼠入睡率的影響

合理的料液比是增加提取率和節約成本關鍵因素，理論上料液比越大提取率越高，但是會增加溶劑的投入。本實驗單因素料液比設置了1:8、1:12、1:16。由圖可以看出隨著料液比的增加，小鼠入睡率也不斷增加，三個時間提取的入睡率分別為49.41%、54.62%和55.63%。三次重復數據進行方差分析，得出提取1:12 和1:16 與提1:8 小鼠入睡率差異極顯著，1:12 和1:16 差異不顯著。故以1:12 為較優提取料液比。

2.4 提取溫度對小鼠入睡率的影響

圖4 提取溫度對小鼠入睡率的影響

溫度對中藥材提取率影響很大，溫度過低有效成分不宜浸出，溫度過高可能成分降解。本實驗根據三中藥材五味子、酸棗仁、天麻主要成分的特點，單因素料液比設置了40℃、60℃、80℃。由圖可以看出隨著溫度的增加，小鼠入睡率也不斷增加，三個溫度入睡率分別為53.23%、56.49%和55.38%。但是80℃入睡率低于60℃的入睡率，可能是某些有效物質高溫降解所致。三次重復數據進行方差分析，得出60℃和80℃與40℃小鼠入睡率差異極顯著，60℃和80℃差異不顯著。故以60℃為較優提取料液比。

2.5 正交試驗優選處方藥材提取工藝

表1 因素水平表

由表2 可知，影響處方藥材提取出膏率的的4 個因素的主次順序是：C＞B＞D＞A，即提取的料液比是最主要的影響因子，其次是提取次數，再次是提取時間，影響最小的是提取溫度。處方藥材提取的最優組合為A2B2C3D1，即提取溫度為60℃，提取次數為2次，提取料液比為1:12，提取時間為6h。

表2 處方藥材提取優化正交試驗結果（n=3）

3 討論與分析

藥理作用五味子具有明顯的鎮靜作用，五味子提取物能減少小鼠自主活動，延長巴比妥睡眠時間、抑制動物攻擊行為，對抗電休克和化學性驚厥，作用與安定藥相似，尚有鎮痛作用、肌肉松弛作用。酸棗仁富含黃酮、皂苷、多糖類、油脂和生物堿成分，甘、酸，平，具有養心補肝，寧心安神，斂汗，生津功效。主要治療虛煩不眠，驚悸多夢。用于心脾氣虛血虧、心悸失眠，常與當歸、黃芪、黨參等同用，如歸脾湯。天麻含天麻苷，天麻苷元，β- 甾谷醇和胡蘿卜苷，檸蒙酸及其單甲酯，棕櫚酸、琥珀酸和蔗糖等，肝風內動，驚癇抽搐，眩暈，頭痛。藥理作用表明，天麻水、醇提取物及不同制劑，具有鎮靜、抗驚厥、鎮痛、保護腦神經細胞作用，天麻及天麻制劑有擴張血管、降低血壓、抗炎作用，還有抗血小板聚聚、抗血栓形成作用，天麻多糖有免疫活性。靈芝多糖類化合物，尚含三萜類、生物堿、核酸類、氨基酸以及微量元素。具有補氣安神，止咳平喘之功效，主要治療心神不寧，失眠，驚悸。本實驗根據四味中藥的成分特點，五味子、酸棗仁、天麻采用了有機溶劑乙醇作為提取溶劑，更多是考慮一些脂溶性物質的有效提出，但是像天麻多糖、酸棗多糖及五味子中的水溶性物質的會有一定損失，另外靈芝中不溶于水的物質也會損失一定部分，但是綜合考慮，采取了乙醇和水的雙重提取方法，實驗還存在很多不完善的地方，應該對主要成分如五味子甲素、五昧子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五昧子醇乙、皂苷、黃酮、生物堿等有效成分進行檢測，把成分和功效一起作為提取工藝的最佳標準進行優化更為合理，相關實驗項目組還會進行深入研究。