電針“三陰交-懸鐘”對類痛經模型大鼠子宮內皮素（ET）、一氧化氮（NO）的影響

辛思源 郭建恩 徐大釗 林鳳 李春華

摘 要：通過觀察電針對類痛經模型大鼠的鎮痛效應及子宮內皮素（ET）、一氧化氮（NO）的影響，探討針刺緩解胞宮疼痛的作用機制及“三陰交-懸鐘”的特異性。得出結論：電針“三陰交-懸鐘”能夠調節子宮ET及其ET/NO的比值，以此緩解子宮平滑肌痙攣的狀態，來緩解胞宮疼痛，且針刺“三陰交-懸鐘”治療痛經具有特異性。

關鍵詞：電針;三陰交-懸鐘;痛經;扭體反應;內皮素;一氧化氮

臨床上常用相對穴“三陰交-懸鐘”來治療痛經。當前，運用電針調節類痛經大鼠ET、NO的相關研究較少，因而，本實驗采用電針模型大鼠相對穴“三陰交-懸鐘”、三陰交穴、懸鐘穴以及非穴，觀察子宮ET與NO的水平，用以初步探究電針相對穴“三陰交-懸鐘”緩解胞宮疼痛的內在機制，初步探討相對穴“三陰交-懸鐘”的特異性。

一、實驗材料

（一）實驗動物與分組方法

本動物實驗選用48只清潔級健康雌性SD大鼠，鼠齡為3個月，體重為（240±20）g，性成熟且未交配。飼養期給予普通清潔級飼料和自由飲水，室溫為（20±1）℃，濕度為（45±5）%，日光燈照射。采用完全隨機法將大鼠分為8組，即對照組、模型組、三陰交組、懸鐘組、“三陰交-懸鐘”組、非穴組，每組8只。

（二）主要儀器與實驗試劑

G6805-Ⅱ型電針治療儀;一次性針灸針;苯甲酸雌二醇注射液;縮宮素注射液;內皮素（ET）ELISA試劑盒;一氧化氮（NO）試劑盒。

（三）模型制備

選擇動情間期的大鼠來制備實驗性類痛經模型。模型組、各電針組：連續10d皮下注射苯甲酸雌二醇，第1天和第10天每只大鼠皮下給藥0.5mg，余下日為0.2mg，待第10天注射苯甲酸雌二醇1h后給予腹腔注射縮宮素0.2mL/只。對照組：每日每只大鼠皮下注射同等劑量的生理鹽水，待第10天皮下注射生理鹽水1h后給予腹腔注射生理鹽水02mL/只。

（四）實驗取穴及針刺方法

實驗取穴：根據大鼠的生理特點以及形態和解剖位置，引用《實驗針灸學》穴位定位標準，選取“相對穴”三陰交-懸鐘穴。三陰交穴位于大鼠后肢內踝尖上10mm;懸鐘穴位于大鼠后肢外踝尖上10mm，腓骨前緣;非穴選取與三陰交、懸鐘穴處于同一水平，旁開對照點選各穴左側旁開3mm處。每組皆為雙側取穴。

電針方法：三陰交、懸鐘和非穴均為直刺3mm左右，相對穴“三陰交-懸鐘穴”為透刺，透刺方向為三陰交透懸鐘，并在穴位的近心端旁開約2～3mm處再刺一針，刺入皮膚即可，兩針之間置一棉球，防止短路，并用膠布加以固定。兩針分別連電針儀正極、負極，刺激頻率為2/15Hz，強度為1mA，20min。在實驗開始開始后的第1、3、5、7d進行實驗干預，共4次。對照組與模型組以同樣的方法和時間固定，不給予電針處理。

（五）大鼠扭體反應評定

扭體反應是目前公認的評價指標，扭體行為可分為0至3四個等級。0級表現為正常的姿勢（前爪平放盒底/正常探查行為）;1級表現為身體斜向一邊;2級表現為后肢伸展和后爪背屈，軀體伸展并伴頻繁地盆骨側向旋轉;3級表現為腹部肌肉收縮和后肢后伸。本實驗記錄20min內扭體評分及扭體反應潛伏期。扭體評分：總分=0級×0分+1級×1分+2級×2分+3級×3分，扭體潛伏期：注射縮宮素后直至出現扭體反應的時間段。

（六）實驗取材及檢測方法

待扭體反應評分結束，即刻摘取大鼠的子宮，并將其置于生理鹽水中煮沸5min后稱重，而后放于玻璃勻漿管，加入1N的HCL1mI，再用勻漿機勻漿，充分勻漿后室溫放置100min，再加入1N的NaO110.8ml，使之中和到一定的PH值;3500rpm離心15min后，取上清液，置于-70℃保存以備用。模型大鼠子宮ET的含量需用ELISA的方法來測定，NO的含量需用化學發光法來測定。

（七）統計學方法

應用SPSS21.0統計軟件進行分析，實驗數據用均數±標準差（x±s）來表示。各組間差異采用單因素方差分析，并以LSD對每兩組間的差異加以分析，以P<0.05表示差異具有統計學意義。

二、結果

（一）電針對扭體的影響

與對照組相比，模型組大鼠的扭體評分值明顯增高，扭體潛伏期時長明顯縮短（P<0.01），證實模型大鼠已制備成功。與對照組相比，各電針組大鼠的扭體評分均明顯增高（P<0.01），扭體潛伏期時長（除“三陰交-懸鐘”組）明顯縮短（P<0.01）。與模型組相比，相對穴“三陰交-懸鐘”組扭體評分明顯減少（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組，三陰交穴組的扭體潛伏期時長明顯延長（P<0.05，P<0.01）。

各電針組之間比較，相對穴“三陰交-懸鐘”組扭體潛伏期較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯延長（P<0.01）;相對穴“三陰交-懸鐘”組的扭體評分較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯降低（P<0.05，P<0.01）。詳見表1。

（二）電針對子宮ET和NO的含量、以及ET/NO比值的影響

與對照組相比，模型組大鼠子宮ET的含量，以及ET/NO的比值明顯升高，而NO的含量則明顯降低（P<0.01），各電針組ET含量（除“三陰交-懸鐘”組）明顯升高，NO含量、ET/NO比值（除“三陰交-懸鐘”組）明顯降低（P<0.01）。與模型組比較，“三陰交-懸鐘”組子宮ET含量明顯降低，NO含量明顯升高，ET/NO比值明顯降低（P<0.01）。

各電針組之間比較，“三陰交-懸鐘”組子宮ET含量、ET/NO比值較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯降低（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組NO含量較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯升高（P<0.01）。詳見表2。

三、討論

文獻研究顯示，痛經是針灸治療婦產科疾病中應用最多的病種[1]，且“三陰交-懸鐘”的聯合應用對于痛經具有較好的治療效果。本研究中模型組大鼠子宮ET的含量、ET/NO比值較對照組明顯升高，NO含量明顯降低，提示ET對子宮動脈的收縮作用較為敏感，大鼠痛經狀態下，ET增加，使二者比值失衡。有研究發現，ET/NO比值可以作為瘀血證嚴重程度的指標之一[2]。本實驗中，模型組大鼠ET/NO的比值明顯升高，這說明二者之間比重失衡，從而導使子宮內組織缺血缺氧，發生或加重痛經。

與模型組比較，三陰交-懸鐘組子宮ET含量均明顯降低，NO含量均明顯升高，ET/NO比值均明顯降低，提示：電針“三陰交-懸鐘”可通過調節子宮ET、NO含量及ET/NO比值，使子宮平滑肌的痙攣狀態得以緩解，進而使胞宮疼痛得以緩解。各電針組間相比較，相對穴“三陰交-懸鐘”組子宮ET含量、ET/NO比值較三陰交組、懸鐘組、非三陰交-懸鐘組均明顯降低，提示電針“三陰交-懸鐘”可能通過調節子宮ET、NO的含量來調節ET/NO的平衡，其作用較單純電針“三陰交”“懸鐘”非穴更顯著。進一步提示“三陰交-懸鐘”在調節子宮的平滑肌及其舒縮物質方面的有一定的特異性，這或許與相對穴“三陰交-懸鐘”的內在的協同增效作用有關。

本實驗研究初步證實：電針相對穴“三陰交-懸鐘”可調節血管舒縮物質且其作用有一定的特異性，從而進一步證實疼痛調控效應的存在，初步證實“三陰交-懸鐘”對胞宮疼痛的特異性調控作用，后期將繼續對“三陰交-懸鐘”調節胞宮疼痛的作用機制進行深入探討。

參考文獻：

[1]杜元灝，李晶，孫冬緯，等.中國現代針灸病譜的研究.中國針灸，2017，27（5）：373-378.

[2]余運賢，梁暉，黃健，等.急性腦梗塞血瘀證與一氧化氮、內皮素相關性研究[J].中國中西醫結合雜志，2017，20（7）：501-503.

基金項目：2018年4月河北省高等學校科學技術研究項目：基于三陰交-懸鐘對疼痛的調控作用探討相對穴與經穴效應的相關性（No.NQ2018082）

作者簡介：辛思源（1986—），女，漢族，河北承德人，碩士，講師，主治醫師，研究方向：經穴主治規律研究。

*通訊作者：李春華（1982—），女，漢族，河北保定人，博士，副主任醫師，研究方向：穴位效應特異性研究。