補(bǔ)陽還五湯對運(yùn)動疲勞腦損傷大鼠腦組織凋亡信號通路的影響

尹瑞欣

【摘 要】目的：探究補(bǔ)陽還五湯對運(yùn)動疲勞腦損傷大鼠腦組織凋亡信號通路的影響。方法：選擇36只SD大鼠為研究對象，將其分為模型組和補(bǔ)陽還五湯組各18只。觀察并對比兩組大鼠的PI3K/AKT 信號通路、腦組織水含量、腦組織細(xì)胞凋亡數(shù)量以及腦血屏障（BBB）通透性等。結(jié)果：補(bǔ)陽還五湯組大鼠的PI3K/AKT相比模型組顯著增高，且腦組織水含量、BBB通透性相比模型組顯著降低，P<0.05，存在統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：補(bǔ)陽還五湯對腦損傷具有保護(hù)作用，不僅能夠降低BBB通透性，還能降低腦組織水含量，激活PI3K/AKT信號通路。

【關(guān)鍵詞】補(bǔ)陽還五湯;腦損傷;大鼠腦組織;凋亡信號通路

【中圖分類號】R651.1+5 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1002-8714（2020）09-0158-01

引 言

補(bǔ)陽還五湯臨床治療中被應(yīng)用于缺血性、出血性腦病中，能夠通過減少腦組組細(xì)胞凋零，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞修復(fù)等，增強(qiáng)防治效果。胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）信號轉(zhuǎn)到通路是腦損傷后出現(xiàn)的細(xì)胞凋亡活動中具有影響力的信號通路。根據(jù)腦出血相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)陽還五湯能夠激活數(shù)條和細(xì)胞凋亡聯(lián)系緊密的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，對其進(jìn)行用藥干預(yù)之后，腦組織中的PI3K/AKT信號通路中的PI3K、AKT蛋白表達(dá)會發(fā)生變化，關(guān)系到腦水腫、腦組凋亡信號通路變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇36只SD大鼠為研究對象，分為模型組和補(bǔ)陽還五湯組各18只。所有大鼠平均體質(zhì)量（250±22）克，均為成年雄性清潔級大鼠。

1.2 方法

對兩組大鼠均采用10%的水合氯醛進(jìn)行麻醉，采用立體儀進(jìn)行固定，在頭部正中行縱形切口，將大鼠骨膜剝離，裸露出冠狀縫和前囟。在前囟之前2毫米位置、中線右側(cè)3毫米位置鉆直徑為1毫米的小孔，采用微量注射器從股動脈處抽取適量血液，采用立體儀按照鉆孔垂直進(jìn)針6毫米，緩緩注入血液80微升，留針10分鐘后撤針，用消毒真縫合切口。以此建立模型組，并此基礎(chǔ)上，28天對其灌入補(bǔ)陽還五湯，湯劑藥方包括赤芍4.5克、生黃芪120克、當(dāng)歸尾6克、桃仁3克、干地龍3克、川芎4.5克、紅花3克，藥量為26g·kg-1·d-1。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并對比兩組大鼠的PI3K/AKT 信號通路、腦組織水含量以及腦血屏障（BBB）通透性等。

PI3K、AKT 蛋白檢測采用Leica石蠟切片機(jī)進(jìn)行連續(xù)冠狀切片，厚度為5微米，在4℃冰箱環(huán)境下保存，進(jìn)行凋亡蛋白與基因的免疫組化測試，其中PI3K的稀釋度為1：150，AKT的稀釋度為1：100。

腦組織含水量（%）=（濕重-干重）/濕重X100%。

腦血屏障（BBB）通透性采用伊文恩藍(lán)（EB）法進(jìn)行檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

利用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行方差分析，出現(xiàn)P<0.05，則代表存在統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

補(bǔ)陽還五湯組大鼠的PI3K為（15.88±2.14）μg/ml，AKT為（15.89±2.01）μg/ml相比模型組（8.97±1.21）μg/ml、（8.35±1.74）μg/ml顯著增高，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。

補(bǔ)陽還五湯組大鼠腦組織含水量（68.25±3.54）%顯著低于模型組（78.69±5.47）%，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。

一般通過EB含量判斷BBB通透性，EB增高，BBB通透性強(qiáng)，反之，BBB通透性差。研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)陽還五湯組大鼠的EB含量（14.36±0.78）μg/ml明顯低于模型組（25.54±1.02）μg/ml，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

通常腦出血后細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的PI3K/AKT信號通路，在激活過程中被分為四個步驟：第一，某些物質(zhì)產(chǎn)生或?qū)野彼峒っ富钚允荏w產(chǎn)生刺激并激活;第二，激活PI2K;第三，激活絲氨酸或蘇氨酸蛋白激酶;第四，磷酸化之后的絲氨酸或蘇氨酸蛋白激酶會對下游凋亡蛋白進(jìn)行調(diào)控，進(jìn)而保護(hù)腦組織。

在本研究中，在建立腦出血模型大鼠的基礎(chǔ)上，為補(bǔ)陽還五湯組大鼠灌入補(bǔ)陽還五湯后發(fā)現(xiàn)，PI3K、AKT的蛋白陽性表達(dá)明顯增高，而且大鼠腦組織含水量、BBB通透性明顯低于模型組。補(bǔ)陽還五湯作為中藥湯劑，具有補(bǔ)氣、活血、通絡(luò)等功效，對心腦血管具有明顯的藥理作用，能夠良好的保護(hù)腦細(xì)胞和腦組織，將PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活，通過宏觀調(diào)控，能夠減輕大鼠的腦水腫情況，抑制細(xì)胞凋亡。隨著對細(xì)胞凋亡和其機(jī)制之間關(guān)系的深入研究，能夠進(jìn)一步了解腦出血的情況，進(jìn)而為腦損傷、腦出血疾病臨床治療提供切入點(diǎn)和治療思路。由于本研究內(nèi)容有限，對腦損傷大鼠腦組織凋亡信號通路的研究有限，還未知其他激活通路的信號，還需進(jìn)一步研究。

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