RNF6在胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床特征和預(yù)后的關(guān)系

黃子明 葛恒發(fā) 畢傳昊

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院，江蘇淮安 223300）

胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，在癌癥中發(fā)病率排名第四，且病死率排名第二[1]。其5年的生存率僅有30%～40%[2]。泛素化修飾中的泛素連接酶與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，目前已有研究表明RNF6高表達(dá)與白血病發(fā)展有相關(guān)性[3]，但RNF6與腫瘤的相關(guān)研究并不多見。本研究通過(guò)采集相關(guān)的臨床數(shù)據(jù)，分析其與臨床病理特征的相關(guān)性，探討RNF6在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用[4]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2013年1月至2015年1月南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)切除的55例胃癌患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者在手術(shù)治療前未接受任何放療、化療或其他針對(duì)胃癌的治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：有既往嚴(yán)重心腦血管疾病，其他重大手術(shù)病史。標(biāo)本均進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，其中男性34例，女性21例，年齡41～73歲，平均年齡（60.12±8.68） 歲，原發(fā)灶、淋巴結(jié)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（TNM）分期Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例。55例胃癌標(biāo)本組織制成石蠟切片（進(jìn)行免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)），采用電話聯(lián)系方式定期采訪出院患者，隨訪時(shí)間：術(shù)后1年內(nèi)，每3個(gè)月隨訪一次，隨后每6個(gè)月隨訪一次，隨訪截止日期為2019年12月。本研究所有患者及家屬均已知曉，并簽署知情同意書。本研究獲南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 免疫組織化學(xué)法

55例胃癌標(biāo)本連續(xù)切片4μL貼附于經(jīng)多聚賴氨酸處理的玻片上，80℃烘烤50 min，免疫組化所有試劑均購(gòu)自北京中杉金橋公司。蛋白的表達(dá)和分布情況通過(guò)在光鏡下觀察染色的切片，RNF6蛋白陽(yáng)性在細(xì)胞內(nèi)的分布主要集中在細(xì)胞質(zhì)，為棕黃色顆粒。免疫組化積分=染色強(qiáng)度積分+陽(yáng)性細(xì)胞百分率積分。結(jié)果判定由兩名具備高級(jí)職稱的病理醫(yī)師經(jīng)雙盲法獨(dú)立評(píng)分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 RNF6蛋白表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系

RNF6蛋白表達(dá)與胃癌患者性別、年齡、腫瘤部位均無(wú)相關(guān)性（P＞0.05），但與腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)（P＜0.05），見表1。

表1 RNF6蛋白表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.2 RNF6蛋白表達(dá)與胃癌患者5年總生存率的關(guān)系

本研究的隨訪截止日期為2019年12月，RNF6低表達(dá)組與高表達(dá)組的總例數(shù)分別為27、28例，患者總體5年生存率分別為 59.3%和 9.3%，RNF6高表達(dá)組的5年總生存率顯著低于RNF6低表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.301，P=0.003），見圖1。

3 討論

胃癌是全球致死率第三的腫瘤[5-6]，中晚期死亡率高，預(yù)后不良。胃癌發(fā)展的分子機(jī)制涉及極多的癌基因、抑癌基因調(diào)控表達(dá)，是一個(gè)多因素多步驟的病理過(guò)程，這些生物學(xué)改變會(huì)導(dǎo)致增殖失控進(jìn)而發(fā)生惡性轉(zhuǎn)換，所以從基因水平探討胃癌的生物學(xué)特性，提高胃癌臨床分子診斷水平，發(fā)現(xiàn)胃癌治療的新靶點(diǎn)成為熱點(diǎn)研究之一。一般認(rèn)為在泛素化過(guò)程中，在腺苷三磷酸（ATP）供能的前提下，泛素通過(guò)其C端與E1中具有活化作用的半胱氨酸形成高能硫酯鍵從而得到活化，然后E2從E1接受活化的泛素，接著連接酶E3識(shí)別待降解的目標(biāo)蛋白并把泛素從E2轉(zhuǎn)移使之共價(jià)結(jié)合到目標(biāo)蛋白的賴氨酸殘基上，經(jīng)過(guò)前面多次循環(huán)，靶蛋白可以發(fā)生單泛素化或多聚泛素化，而泛素化后的蛋白可以被去泛素化酶去泛素化，使此過(guò)程處在動(dòng)態(tài)平衡之中[7]。目前研究已經(jīng)證明，蛋白質(zhì)泛素化系統(tǒng)的紊亂與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)（其中包括結(jié)直腸癌）[8]。有研究表明，泛素化和去泛素化與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[9]，RNF6即環(huán)指蛋白6，作為泛素-蛋白酶體系中的E3連接酶，基因全長(zhǎng)2058 bp，包含特征性的C-端的RING-H2指結(jié)構(gòu)和N端的螺旋結(jié)構(gòu)域，RING型鋅指基序是存在于環(huán)指蛋白（RNF）泛素連接酶家族蛋白中的鋅結(jié)合結(jié)構(gòu)域，它能促進(jìn)E2呈遞的泛素分子轉(zhuǎn)移到靶蛋白上，從而促進(jìn)蛋白質(zhì)泛素化過(guò)程的發(fā)生，在蛋白質(zhì)降解、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞生長(zhǎng)和腫瘤發(fā)生等許多細(xì)胞生理生化過(guò)程中都發(fā)揮著重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，RNF6的表達(dá)與腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而與性別、年齡、腫瘤部位均無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。生存分析結(jié)果表明，RNF6陽(yáng)性的患者5年生存率較陰性者低（P＜0.05）。以上結(jié)果提示，RNF6高表達(dá)在胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，RNF6在人胃癌組織中高表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤的大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期密切相關(guān)，RNF6的高表達(dá)水平預(yù)示著臨床的不良預(yù)后，這預(yù)示將來(lái)RNF6的抑制劑可能成為胃癌治療的靶點(diǎn)。