一株具有溶藻特征的假單胞菌分離鑒定及其溶藻動力學研究

王美娟 吳凌云 許明宸 黃金杰 毛林強 張文藝

摘 ? ?要：從田螺內臟中分離獲得一株溶藻菌株（命名為W10），利用16S rDNA序列分析及生理生化特征對該菌株進行了鑒定，探究了其對銅綠微囊藻的作用方式、菌液及其無菌上清液在不同條件下的溶藻特性，并構建了溶藻動力學模型。結果表明：菌株W10歸屬于假單胞菌屬（Pseudomonas sp.， GenBank ID為MN688696）;W10溶藻式是通過分泌某些熱穩定性差的溶藻物質間接作用于銅綠微囊藻，使其裂解、溶解;NA和淀粉培養基對W10菌株的培養效果無顯著差異（P>0.05），二者顯著優于改良基礎培養基（P<0.05），但因NA培養基成分復雜，故確認淀粉培養基適宜于菌株W10培養;同一生長時期的菌液及其無菌上清液溶藻效果無顯著差異（P>0.05），二者均表現為穩定期與衰亡期最高，二者無顯著差異（P>0.05），然后依次是對數期和延滯期;當菌液與藻液體積比為1∶10時，W10菌液溶藻率最高為80.05%，而無菌上清液的溶藻效果與投加量呈正相關，在1∶2處理溶藻率最高為92.15%;當菌藻比1∶10以銅綠微囊藻為降解底物時，菌株W10的溶解作用遵循一級反應動力學。

關鍵詞：溶藻細菌;銅綠微囊藻;分離鑒定;溶藻特性;溶藻動力學

中圖分類號：X703 ? ? ? ? ?文獻標識碼：A ? ? ? ? ? DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.07.005

Abstract： An algicidal bacteria strain W10 was isolated from a snail's viscera and identified based on 16S rDNA gens and biochemical and morphological characteristics. The algae-lysing way of W10 and the effects of different conditions on the algae-lysing action were investigated to analyze the algicidal characteristics of strain W10 and its filtrate， and then built the algae-lysing kinetic model of W10. The results showed that strain W10 was identified as Pseudomonas sp. （Accession No.MN688696）. And W10 indirectly attacked Microcystis aeruginosa by secreting algicidal substances with poor thermal stability. There was no significant difference of algicidal ratio （P>0.05） between NA and starch medium， both of which were significantly better than the modified basic medium （P<0.05）. However， due to the complex composition of the NA medium， it was confirmed that the starch medium was suitable for cultivating W10. There was no significant difference of algicidal ratio （P>0.05） between W10 and its filtrate at the same growth phase. The algae lysing of W10 and its filtrate were highest in the stable growth phase and the decay growth phase. There was no significant difference of algicidal ratio（P>0.05） between the stable growth phase and the decay growth phase， followed by the logarithmic growth phase and the delay growth phase. Furthermore， when the volume ratio of W10 to Microcystis aeruginosa was 1∶10， the highest removal rate of W10 was 80.05%. But the algicidal effect of W10's filtrate was positively correlated with the dosage; the highest removal rate of W10's filtrate was 92.15% in the 1∶2 treatment. When the bacteria-algae ratio of 1∶10 and Microcystis aeruginosa was used as degradation substrates， the dissolution of Microcystis aeruginosa by W10 followed first-level kinetics.

Key words： algicidal bacteria; Microcystis aeruginosa; isolation and identification; algicidal characteristics; algae-lysing kinetics

藻類在富營養化水體中大量繁殖，形成有害藻華（HABs）導致水質惡化、魚類死亡，甚至會產生藻毒素對水生動物和人體造成直接危害[1]，近年來，由于其嚴重的生態效應和負面的經濟影響，引起了全世界的關注[2-3]。細菌等微生物能控制自然環境中藻類的生物量，調節藻類的動態平衡，這種藻-細菌的相互作用使得利用溶藻細菌對藻華進行生物控制成為可能[4-6]。

溶藻細菌按溶菌方式分為直接溶菌和間接溶菌[7-8]，迄今為止發現的溶藻細菌約70%為間接溶藻，其余30%需要與藻細胞直接接觸[9]。史榮君等[10]從赤潮爆發海域沉積物中分離出的芽孢桿菌N3，可以使錐狀斯氏藻和海洋原甲藻的藻細胞變形膨脹，最終破裂死亡，屬于直接溶藻。Tian等[11]從藍藻水華爆發時期的太湖水樣中篩選出對銅綠微囊藻有去除效果的細菌A27，結果表明，A27溶藻方式為間接溶藻，可分泌至少2種不同的溶藻活性物質，達到抑藻的目的。

國內外有關溶藻細菌的篩選及其溶藻特性研究報道眾多，但是溶藻細菌的分離源大多為藍藻頻發的自然水體水樣或沉積物[12]，菌種來源較為單一。田螺在自然環境中可攝食藻類、細菌和浮游生物等，何健等[13]將田螺養殖在生活污水中，實驗組柵藻的增長率比對照組低，說明田螺能去除一定數量柵藻。由此可以推斷，田螺內臟中可能含有溶藻細菌。本研究以太湖流域內野生田螺作為溶藻細菌的分離源，經富集培養后分離出溶藻效果顯著的菌株;以銅綠微囊藻為指示藻，研究溶藻細菌的溶藻特性，并建立其溶藻動力學模型。

1 材料和方法

1.1 材 料

1.1.1 供試藻種 試驗藻種為銅綠微囊藻（Microcystis aeruginosa，FACHB-905）購自武漢水生生物所，活化后接種于BG11培養基。

1.1.2 培養基 BG11培養基[14]用于銅綠微囊藻培養;牛肉膏蛋白胨（簡稱NA）培養基[15]用于細菌的分離、純化;改良基礎培養基[16]、淀粉培養基[17]用于細菌的富集培養。

1.2 方 法

1.2.1 藻細胞生長曲線的測定 銅綠微囊藻置于溫度28 ℃，光照強度2 000 lx，光暗周期為12 h∶12 h條件下培養。藻液中葉綠素a含量可以作為水體生物量的表征參數[18]，因此采用乙醇提取分光光度計法[19]，每2 d測定其葉綠素a含量，每個樣品設置3組平行，繪制生長曲線。

1.2.2 溶藻細菌的分離與純化 選擇野生生長狀況良好的田螺，取適量的田螺內臟剪成小份后進行研磨[20]，隨后放入200 mL無菌水中，于25 ℃、150 r·min-1的振蕩箱中振蕩培養24 h后，靜置沉淀，得到粗提液。粗提液經0.8 μm濾膜過濾，將10 mL濾液加入100 mL對數生長期的銅綠微囊藻液中共同培養，以接入10 mL無菌水的銅綠微囊藻液為對照組，7 d后將黃化明顯的藻液倍比稀釋，在NA培養基上平板涂布、劃線分離，挑取菌落形態明顯不同的菌株，編號為W1～W11。將純化后的菌株W1～W11轉接至NA液體培養基中制成菌液，菌液與藻液混合培養1周，其中溶藻效果顯著、生長速率快的為實驗候選菌株。

1.2.3 溶藻細菌生理生化及分子鑒定 參照《常見細菌系統鑒定手冊》[21]與《伯杰氏細菌鑒定手冊》[22]對細菌W10進行生理生化鑒定。菌株W10的基因組DNA提取、PCR擴增、序列測定由生工生物工程（上海）有限公司完成，將所得序列在NCBI網站上用BLAST程序與GenBank中已有的序列進行同源性比較，利用MEGA5.0軟件構建系統發育樹。

1.2.4 溶藻細菌生長動力學研究 以體積比1%的接種量將W10菌液接入到100 mL淀粉液體培養基中，于25 ℃、150 r·min-1的振蕩箱中振蕩培養，每2 h取樣，使用分光光度計測其在600 nm處的吸光度，以OD600值表征其生長狀況，參考王曉旭[23]的方法建立OD600與細菌濃度的線性關系，繪制生長曲線。利用生長曲線數據擬合Logistic方程[24]，建立菌株的生長動力學初級模型[25-26]。Logistic方程為：

式中，y為細菌累積生長量;t為細菌生長的時間，h;k是相對最大細菌濃度，CFU·mL-1;b為細菌生長瞬時速率，h-1;a是模型參數;e是自然對數的底數。

1.2.5 溶藻細菌溶藻方式的探究 采取以下5種處理方式判斷溶藻細菌W10的溶藻方式。不做任何處理的原菌液，記為T1;菌液經8 000 r·min-1、4 ℃離心15 min，將上清液與菌體細胞分離，上清液用0.22 μm針筒式濾膜過濾2次，平板檢驗無菌后，記為T2（即無菌上請液）;將菌液離心后的菌體用淀粉培養基重懸，記為T3; 121 ℃滅菌20 min處理離心過膜后的上清液及原菌液，分別記為T4、T5，各組均設置3組平行，7 d后測定葉綠素a含量并計算溶藻率。

式中，Ct為試驗組藻液的葉綠素a含量，單位：mg·m-3;C0為空白對照組藻液的葉綠素a含量，單位：mg·m-3。

1.2.6 溶藻特性 （1）培養基對溶藻效果的影響。配制NA培養基、改良基礎培養基、淀粉培養基3種培養基，分別接入溶藻菌W10，以體積比10%的接種量將菌液及其無菌上清液接入至生長良好的銅綠微囊藻藻液中，對照組分別接入等量但不接菌的3種培養基，7 d后測定葉綠素a含量并計算溶藻率。

（2）不同生長時期對溶藻效果的影響。按照測定的W10菌株的生長曲線，取不同生長時期的菌液以及不同生長時期菌株分泌的無菌上清液，以體積比10%的接種量加入藻液中，每組設置3組平行，7 d后測定葉綠素a含量并計算溶藻率。

（3）不同投加量對溶藻效果的影響。為確定菌液與無菌上清液最佳的投加量，設置體積比為1∶100、1∶20、1∶10、1∶5、1∶2的試驗組，每組設置3組平行，7 ?d后測定葉綠素a含量并計算溶藻率。

1.2.7 溶藻動力學研究 以體積比10%的投加量將W10與銅綠微囊藻混合培養，每24 h測定培養液中葉綠素a含量，探討W10對銅綠微囊藻的溶藻動力學。溶藻過程中不僅有溶藻細菌對藻細胞的降解，還存在著實驗中藻細胞自身生長[27]，以及當營養物質消耗殆盡時，藻類與細菌相互競爭等問題[28]。因此溶藻細菌對藻類的降解是十分復雜的生物反應過程，本實驗忽略藻細胞自身的生長及死亡，采用一級動力學模型擬合實驗數據，一級動力學方程為：

S=S0e-ωt ? ? （3）

式中，S為t時培養液中葉綠素a含量，單位：mg·m-3;S0為培養液中初始葉綠素a含量，單位：mg·m-3;t為溶藻過程進行的時間，單位：d;ω為速率常數，單位：d-1;e為自然對數的底數。

2 結果與分析

2.1 藻細胞的生長曲線

活化的銅綠微囊藻接種于BG11培養基，生長曲線如圖1所示。剛開始培養的8 d，藻類處于生長調整期，在此階段，藻細胞調整自身以適應新環境，葉綠素a含量緩慢增加，隨后進入為期18 d左右的對數生長期，藻細胞大量繁殖，此時藻液中葉綠素a含量幾乎呈線性增長。28 d后葉綠素a含量呈現出“Z”字型增減交替的狀態，營養物質不足導致銅綠微囊藻種內競爭激烈，第40天葉綠素a含量達到峰值3 310.21 mg·m-3，隨后葉綠素a含量逐漸減少，表明此階段藻細胞進入了生長末期，藻細胞死亡率大于生長率。2.2 溶藻細菌菌株W10的分離與鑒定

2.2.1 菌株W10的分離 從太湖田螺消化道中分離出11株對銅綠微囊藻具有溶藻能力的細菌，經過復篩，其中一株菌株溶藻效果較為顯著，命名為W10。菌株W10在NA固體培養基上菌落呈圓形，黃色透明，表面濕潤有光澤，邊緣整齊，在光學顯微鏡下，菌體呈桿狀。

2.2.2 菌株W10的16S rDNA鑒定及生理生化特性 菌株W10測序后得到了長度為1 366 bp的16S rDNA序列，將其序列提交至GenBank數據庫，獲得基因登錄號為MN688696，系統發育樹如圖2所示。由發育樹可知，菌株W10與Pseudomonas yamanorum 8H1（EU557337）最為接近且聚為一支，其支持率高達99，查閱Blast結果顯示菌株W10與Pseudomonas yamanorum 8H1（EU557337）的相似率為99.93%。表1為菌株W10的生理生化檢測結果。結合形態學與生理生化檢測指標，基本確定篩選得到的溶藻菌株鑒定為Pseudomonas sp. W10。

2.3 溶藻細菌的生長動力學分析

利用Origin9.0軟件，對試驗數據和Logistic方程進行非線性擬合，得到溶藻細菌生長動力學初級方程：

溶藻細菌的生長情況如圖3所示。由圖3可知，溶藻菌株W10在6 h內處于生長延滯期，6 h后進入對數生長期，穩定期為34～56 h，56 h后菌株W10濃度開始逐漸減少，進入衰亡期。菌株W10的生長曲線接近“S”型，Logistic模型曲線與菌株實際生長曲線擬合度較好，相關系數R2=0.990 8（P<0.001），說明Logistic方程能很好的描述在實驗室環境中菌株生長過程中濃度的變化。菌株的瞬時生長速率為0.126 h-1，代時約為5.5 h，與郭惠娟等[29]研究的溶藻菌Microbacterium oleivorans最大生長速率0.05 h-1相比，菌株W10生長速度較快，代時較短，能夠在短時間內達到溶藻的效果。

2.4 溶藻細菌W10溶藻方式的探究

初始銅綠微囊藻液的葉綠素a含量為2 543.99 mg·m-3，將銅綠微囊藻與5種不同處理的溶藻菌混合培養，7 d后測各組葉綠素a的含量，試驗結果如圖4。在實驗室環境中，空白組藻液的葉綠素a含量增加了174.52 mg·m-3，證明實驗過程中銅綠微囊藻自然衰亡率低于增長率。T1、T2組都表現出較好的溶藻活性，溶藻率分別為78.70%，76.81%;T3組幾乎沒有溶藻能力，溶藻率僅4.37%;而經過高溫高壓處理后的菌液、無菌上清液對銅綠微囊藻的去除率低于T1、T2組，表明菌液及無菌上清液中具有溶藻活性的物質熱穩定性較低。

微生物的溶藻方式分為直接溶藻與間接溶藻，W10的無菌上清液對銅綠微囊藻的抑制作用較強，且溶藻效果沒有因為將菌體去除而減弱，溶藻率與不做任何處理的T1組接近，因此可以判斷對銅綠微囊藻有溶解作用的物質存在于W10的無菌上清液中，菌株W10是通過分泌某些胞外活性物質溶解藻類而非與藻類競爭營養物質，胞外活性物質熱穩定性較差，可能為蛋白質類物質，屬于間接溶藻。

2.5 溶藻細菌W10溶藻特性

2.5.1 培養基對溶藻效果的影響 由圖5可知，在葉綠素a含量為1 024.63 mg·m-3的初始條件下，W10在NA培養基中培養，溶藻率表現為菌液（80.46%）>無菌上清液（73.66%）>對照（24.88%），三者之間差異均達顯著水平;W10在淀粉培養基和改良基礎培養基中培養，其菌液及無菌上清液的溶藻率差異不顯著，二者均顯著高于對照組（P<0.05）。3種培養基中，W10菌液及無菌上清液在NA和淀粉培養基中的溶藻效果差異不顯著（P>0.05），二者均顯著優于改良基礎培養基（P<0.05），但由于NA培養基為天然培養基[30]，其成分復雜，會對銅綠微囊藻的生長產生消極影響，故其對照組的溶藻率顯著高于淀粉和改良基礎培養基對照組（P<0.05），因此后續使用成分簡單明了的淀粉培養基，有利于排除培養基對試驗結果的干擾。

2.5.2 不同生長時期對溶藻效果的影響 試驗初始葉綠素a含量為1 109.58 mg·m-3，經過7 d混合培養后，各試驗組的葉綠素a含量均低于初始值。由圖6可知，4個生長時期的菌株W10及其無菌上清液對銅綠微囊藻的生長均有抑制作用，溶藻率表現為除穩定期與衰亡期差異不顯著（P>0.05）外，其他各時期之間差異均達顯著水平（P<0.05），且同一生長時期W10菌液與其無菌上清液之間的溶藻率差異均不顯著（P>0.05）。延滯期的菌液溶藻效果最低，原因可能是細菌在延滯期還未完全適應新環境，生長較為緩慢，并且分泌的胞外溶藻活性物質少。隨著培養時間的延長，菌株W10產生的胞外溶藻活性物質逐漸積累，進入對數生長期和穩定期后，W10活性較高，溶菌效果均顯著提升。而衰亡期的菌液中含有大量死亡的菌體，添加等體積的菌液與銅綠微囊藻共同培養，菌液中的胞外溶藻活性物質相對穩定期時減少，導致溶藻率降低，這也從側面證明了菌株W10的作用方式為間接溶藻。司曉光等[31]也證明溶藻效果與菌株分泌的溶藻物質數量有關，溶藻物質越多，則溶藻效果越好。衰亡期W10及其無菌上清液溶藻活性與穩定期相比不再增加，說明穩定期的無菌上清液的溶藻效果幾乎達到極限，細菌進入衰亡期后，幾乎不再繼續分泌胞外溶藻活性物質。

2.5.3 不同投加量對溶藻效果的影響 如圖7所示，初始銅綠微囊藻葉綠素a含量為1 124.07 mg·m-3，隨著投加量的增加，W10菌液溶藻率呈先升高后降低的趨勢，當菌液與藻液的體積比為1∶10時達到最大值，且各投加量處理間差異均達顯著水平（P<0.05）;無菌上清液溶藻率呈上升趨勢，至體積比1∶2時達到最大值，各投加量處理之間除1∶10與1∶5差異不顯著（P>0.05）外其他處理間差異均達顯著水平（P<0.05）;在菌藻比1∶100、1∶20和1∶10處理，同一投加量處理W10菌液與其無菌上清液溶藻率差異不顯著，而在菌藻比1∶5和1∶2處理，W10菌液溶藻率顯著低于無菌上清液。無論是W10菌液還是無菌上清液，均在體積比1∶100處理溶藻率最低，幾乎沒有溶藻現象，此時細菌或無菌上清液添加量少，藻細胞占主導地位，藻細胞的胞外分泌物可保護藻細胞不被溶解。溶藻過程進行7 d后，當菌藻比超過1∶10時繼續增加菌液的投加量，細菌對銅綠微囊藻的葉綠素a的去除效果不增反而減少，這可能是因為隨著時間的延長，錐形瓶環境中營養物質消耗殆盡，大量細菌因缺乏營養物質衰亡，同時細菌種內競爭增大，最終導致溶藻率下降。

2.6 W10對銅綠微囊藻的降解動力學分析

菌株W10降解銅綠微囊藻的一級動力學方程為：

S=1 079.003 9e-0.235 7t（5）

溶藻細菌W10溶解銅綠微囊藻過程中葉綠素a含量變化與動力學模型擬合的結果如圖8所示。溶藻菌株與藻液混合培養的第1天，培養液中藻細胞濃度較高，藻類占主導地位，溶藻反應還未完全開始，此時葉綠素a含量下降緩慢。隨著溶藻時間的增加，W10的胞外溶藻活性物質逐漸累積，同時利用已裂解的藻細胞來滿足自身的生長繁殖，培養液的葉綠素a含量不斷下降。表2為菌株W10實際溶藻過程中的葉綠素a含量與一級動力學模型預測的葉綠素a含量之間的比較，實際結果與預測結果的相對誤差范圍為0.568 3%～6.825 0%。此外，一級動力學模型曲線與菌株W10實際溶藻過程葉綠素a含量變化擬合度較好，相關系數R2=0.988 2（P<0.001）。由此我們可以推斷，W10菌株在溶藻過程中，對銅綠微囊藻的溶解遵循一級反應動力學。

3 結 論

（1）從太湖流域內野生田螺內臟中分離出溶藻菌株W10，經鑒定W10與假單胞菌屬的16S rDNA序列同源性達99%，歸屬于假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）。溶藻菌株W10對銅綠微囊藻的溶解方式為間接溶藻，且胞外溶藻活性物質熱穩定性較差，可能為蛋白質類物質。以銅綠微囊藻為底物時，溶藻菌株W10的溶解作用遵循一級反應動力學，其溶藻動力學方程為S=1 079.003 9e-0.235 7t。

（2）溶藻菌株W10及其無菌上清液在不同培養基、生長時期及投加量等條件下均具有一定溶藻效果。其中，NA和淀粉培養基顯著優于改良基礎培養基;同一生長時期的菌液與其無菌上清液溶藻效果無顯著差異（P>0.05），二者均表現為：穩定期與衰亡期最高，二者差異不顯著（P>0.05），然后依次是對數期和延滯期;當菌液與藻液體積比為1∶10時，W10菌液溶藻率最高為80.05%，而無菌上清液的溶藻效果則與投加量呈正相關，以100 mL銅綠微囊藻加入50 mL無菌上清液處理溶藻率最高，可達92.15%。

參考文獻 ：

[1]SU J F， MA M， WEI L， et al. Algicidal and denitrification characterization of Acinetobacter sp. J25 against Microcystis aeruginosa and microbial community in eutrophic landscape water[J]. Marine pollution bulletin， 2016，107（1）：233-239.

[2]MIZUTA D D， WIKFORS G H. Can offshore HABs hinder the development of offshore mussel aquaculture in the northeast United States[J]. Ocean and coastal management， 2020， 183.

[3]ZHENG N N， DING N， GAO P K， et al. Diverse algicidal bacteria associated with harmful bloom-forming Karenia mikimotoi in estuarine soil and seawater[J]. The science of the total environment， 2018， 631-632.

[4]LI Y， ZHU H， ZHANG H， et al. Toxicity of algicidal extracts from Mangrovimonas yunxiaonensis strain LY01 on a HAB causing Alexandrium tamarense[J]. Journal of hazardous materials， 2014， 278：372-381.

[5]SU J F， SHAO S C， MA F， et al. Bacteriological control by Raoultella sp. R11 on growth and toxins production of Microcystis aeruginosa[J]. Chemical engineering journal， 2016， 293：139-150.

[6]YANG Y F， HU X J， ZHANG J， et al. Community level physiological study of algicidal bacteria in the phycospheres of Skeletonema costatum and Scrippsiella trochoidea[J]. Harmful algae， 2013， 28：88-96.

[7]SU J， YU Z， TIAN Y， et al. Biological activity of a red-tide alga—A. tamarense under co-cultured condition with bacteria[J]. Journal of environmental sciences， 2005， 17（6）： 1047.

[8]WANG X， LI Z J， SU J Q， et al. Lysis of a red-tide causing alga， Alexandrium tamarense， caused by bacteria from its phycosphere[J]. Biological control， 2009， 52（2）：123-130.

[9]ROTH P B， TWINER M J， MIKULSKI C M， et al. Comparative analysis of two algicidal bacteria active against the red tide dinoflagellate Karenia brevis[J]. Harmful algae， 2008， 7（5）：682-691.

[10]史榮君， 黃洪輝， 齊占會， 等. 海洋細菌N3對幾種赤潮藻的溶藻效應[J]. 環境科學， 2013， 34（5）： 1922-1929.

[11]CHUAN T， XIANGLONG L， JING T， et al. Isolation， identification and characterization of an algicidal bacterium from Lake Taihu and preliminary studies on its algicidal compounds[J]. Journal of environmental sciences （China）， 2012， 24（10）：1823-1831.

[12]張文藝， 李仁霞， 陳雪珍， 等， 從泥鰍體內篩選的溶藻菌及利用其去除銅綠微囊藻的方法[P]. CN103484403A， 2014-01-01.

[13]何健， 谷孝鴻， 黃誠. 短鈍溞（Daphnia obtusa Kurz）在“藻-螺-溞”系統中的反饋養殖與污水凈化[J]. 湖泊科學， 1999（4）： 328-332.

[14]朱曉漫， 羅玉雙， 李娜， 等. 一株溶藻細菌的分離、篩選與分子鑒定[J]. 湖南文理學院學報（自然科學版）， 2017， 29（1）： 28-34.

[15]崔亞青， 雍曉雨， 張風革， 等. 一株溶藻細菌的分離鑒定及溶藻效果[J]. 應用與環境生物學報， 2012， 18（5）： 752-760.

[16]許珂， 吳剛， 余文平， 等. 溶藻細菌W5培養條件優化及發酵培養[J]. 環境科學與技術， 2009， 32（2）： 12-15.

[17]林敏， 潘偉斌， 張太平， 等. 三株溶藻細菌溶藻活性代謝產物的初步研究[J]. 生態環境， 2007（2）： 358-362.

[18]劉波， 崔莉鳳， 劉載文. 北京市城區地表水體葉綠素a與藻密度相關性研究[J]. 環境科學與技術， 2008（8）： 29-33.

[19]陳建勛， 王曉峰. 植物生理學實驗指導（第二版）[M]. 廣州：華南理工大學出版社， 2006.

[20]董小娜， 陳澤慧， 毛林強， 等. 太湖土著激浪魚內臟中溶藻菌R1的篩選及其特性研究[J]. 工業安全與環保， 2018， 44（8）： 69-72.

[21]東秀珠，蔡妙英. 常見細菌鑒定手冊[M].北京：科學出版社， 2001.

[22]布坎南RE，吉本斯NE. 伯杰氏細菌鑒定手冊（第8版）[M].北京：科學出版社. 1984.

[23]王曉旭， 徐峰， 沈麗萍， 等. 分光光度法測定豬鏈球菌菌懸液濃度[J].上海畜牧獸醫通訊， 2017（5）： 40-41.

[24]VOGELS M， ZOECKLER R， STASIW D M， et al. P. F. Verhulst's “notice sur la loi que la populations suit dans son accroissement” from correspondence mathematique et physique. Ghent， vol. X， 1838[J]. Journal of biological physics， 1975， 3（4）： 183-192.

[25]孫鵬， 孫源. 3種方法對中肋骨條藻Logistic生長模型擬合的比較研究[J]. 江蘇農業科學， 2019， 47（2）： 229-232.

[26]王福林， 王吉權. 生長曲線參數估計的一種新方法—優化回歸組合法[J]. 生物數學學報， 2007（3）： 533-538.

[27]CHOI H J， KIM B H， KIM J D， et al. Streptomyces neyagawaensis as a control for the hazardous biomass of Microcystis aeruginosa （Cyanobacteria） in eutrophic freshwaters[J]. Biological control， 2005， 33（3）：335-343.

[28]李小彩. 一株紅球菌的溶藻特性及應用研究[D].濟南：山東大學，2007.

[29]郭惠娟， 張偉， 張小梅， 等. 溶藻細菌Microbacterium oleivoran的溶藻進程與葉綠素降解動力學[J]. 環境化學， 2019， 38（6）： 1274-1281.

[30]呂偉英， 趙以軍， 周瑞， 等. 一種快速檢測分離溶藻細菌方法的初探[J]. 微生物學通報， 2007（1）： 119-122.

[31]司曉光， 張曉青， 郝建安， 等. 芽孢桿菌dhs-330-021對鏈狀亞歷山大藻的溶藻機理研究[J]. 生物技術通訊， 2017， 28（4）： 485-489.