檢測抗繆勒氏管激素的方法學性能驗證報告

張瑩 王曉芳 徐進

【摘要】目的 分析康潤公司的酶聯免疫法（ELISA）定量檢測抗繆勒氏管激素（anti-mullerian hormone，AMH）的方法學性能，評價其是否與試劑盒說明書中性能質量結果相一致。方法根據實驗室認可準則和美國 CLIA88 性能驗證文件，選取河南省人民醫院生殖中心患者血清，分別用羅氏E601型全自動電化學發光儀器和DS-2全自動酶免疫儀檢測患者血清AMH水平，比較同一份標本用兩種方法檢測的精密度、正確度、可報告范圍和線性范圍。結果 康潤酶聯免疫法的抗繆勒氏管激素定量檢測試劑盒批內精密度、批間精密度、正確度、可報告范圍和線性范圍等均符合要求。結論 康潤公司的酶聯免疫法檢測AMH的試劑盒的性能較好，與試劑說明書中性能質量結果相一致，適用于開展臨床應用。

【關鍵詞】抗繆勒氏管激素、電化學發光法、酶聯免疫法

【中圖分類號】R122.1 ? 【文獻標識碼】A ? ?【文章編號】2107-2306（2020）03-278-02

抗繆勒氏管激素（anti-mullerian hormone，AMH）是轉化生長因子 β（TGF-β）超家族中的二聚體糖蛋白，參與調節組織生長和分化1，又稱為繆勒氏管抑制物。在女性體內，AMH主要由卵巢顆粒細胞分泌，于初級卵泡的顆粒細胞最早開始表達，并持續整個卵泡的發育過程，AMH在卵巢的卵泡發育中發揮重要作用2。本研究探討電化學發光法和酶聯免疫法定量檢測AMH結果的重復性、精密度、正確度、可報告范圍和線性區間，以滿足臨床檢測和認可組織的要求，報道如下。

1.資料與方法

1.1一般資料隨機選取河南省人民醫院生殖中心患者血清。入選標準：按各性能指標要求選入血清樣本，要求全部為新鮮血清樣本，選取的樣本檢測值盡量覆蓋全線性范圍，每例樣本需至少500μl，評估精密度的樣本需至少1000μl。避免溶血、脂血及黃疸樣本。本研究經河南省倫理委員會批準通過，研究對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 分別用羅氏E601型全自動電化學發光儀器及羅氏配套AMH試劑和DS-2全自動酶免儀及廣州康潤生物科技有限公司抗繆勒氏管激素（AMH）定量檢測試劑盒（酶聯免疫法）檢測患者血清AMH水平，均按照試劑盒說明書進行操作。

1.2.2批內精密度分析：批內精密度是指同一樣品的多個復管在一次測定中的重現性，變異系數（CV）小于10%。按照實驗室操作規程，低值（L）、中值（M）AMH質控品（或樣本）各1例，檢測2個水平的質控品（或樣本），每個質控品（或樣本）重復檢測20次，分別計算高低兩個濃度質控品（或樣本）檢測的CV值，變異系數（CV）=標準差SD/均數x100%。

1.2.3批間精密度分析：批間精密度是指同一樣品在多批測定間的重現性，CV%小于15%。按照實驗室操作規程，低值（L）、中值（M）AMH質控品（或樣本）各1例，檢測2個水平的質控品（或樣本），每個質控品（或樣本）重復檢測4次，復孔檢測，連續檢測5日，分別計算高低兩個濃度質控品（或樣本）檢測的CV值。

1.2.4 ?正確度驗證：目前常用的正確度驗證方法為統計實驗室參加室間質評活動的成績，比較回報靶值和實驗室檢測結果，計算偏差及偏倚，絕對值后統計平均值平均偏倚《1/2，允許總誤差（TEa）。

1.2.5臨床可報告范圍：選用高限值（H）和低限值樣本（L），在已知線性區間內選擇1個高濃度水平樣本和一個低濃度水平樣本，采用康潤酶聯免疫法檢測，已知低濃度樣本的檢測結果為0.06ng/mL，高濃度樣本的檢測結果為15.77ng/mL，按低濃度樣本與高濃度樣本以5：0、4：1、3：2、2：3、1：4、0：5的比例進行稀釋，稀釋后的標本分別編號為1、2、3、4、5、6，每個濃度水平的樣本重復測定2次，在1天之內完成。將2次測定結果取平均值并與稀釋后的預期值相比較，采用線性回歸分析，理論值為Y，理論值為已知高低值根據倍比稀釋系數得出的數值，實測均值為X，均值為檢測值1和檢測值2的總和/2，得線性方程Y=aX+b。a為斜率，b為Y軸截距，R2為相關系數的平方，判斷其是否線性。

1.3 ?統計學處理：采用SPSS 19.0統計學軟件進行分析，計算精密度、多元方程、回歸系數等，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 ?結果

2.1 精密度

驗證所得兩個濃度水平批內CV%均小于廠家聲明的10%，批間CV%均小于廠家聲明的15%，表明該方法的精密度可達到要求。

2.2 ?正確度驗證

2.3 ?根據預測值和實測均值繪制回歸曲線見圖1，R2=0.9957> 0.99，符合要求。

三、討論

3.1 AMH 參與調節卵泡的生長與發育，對卵巢微環境產生影響，可用于評估女性生殖能力。AMH水平增高可反映非梗阻性無精子癥患者睪丸內生殖細胞庫的耗竭，是睪丸外分泌功能整體受損的標志3 。因此，檢測AMH的方法顯得尤為重要，本研究中，AMH分別應用康潤和羅氏的AMH試劑盒進行檢測，康潤公司研發的AMH試劑盒采用酶聯免疫法測定，羅氏公司研發的AMH試劑盒采用電化學發光法測定。，本研究旨在評估康潤酶聯免疫法檢測AMH試劑盒的精密度、正確度、可報告范圍、線性范圍，是否與試劑說明書中性能質量結果相一致。

3.2結果顯示AMH 低、高濃度時，批內精密度CV分別是2.64%和2.77%，批間精密度CV分別為7.8%和5.99%，電化學發光法的批內CV%為2.77%和2.60%;批間CV%為5.56%和7.0%，均小于判定標準，表明兩種試劑盒方法的穩定性和重復性良好，精密度屬于可接受范圍。正確度驗證偏倚均小于 1/ 2Tea，表明該試劑盒檢測結果準確。

3.3 按照NCCLS的EP-6A文件評價AMH的分析測量范圍，與羅氏電化學發光法進行樣本一致性比對后，各自樣本均落在各自的參考區間內，結果一致;線性評價中實測值與理論值相關性較好，根據預測值和實測均值繪制直線回歸曲線，相關系數R2=0.9957> 0.99，驗證在試劑盒線性區間內AMH在不同濃度時檢測結果與理論值呈線性分布，符合要求。

綜上所述，應用康潤公司AMH檢測試劑盒檢測AMH，精密度高，正確度好，具有良好的線性測量范圍，驗證和評價標準符合，保證AMH檢驗結果的準確、可靠，可用于臨床AMH血清樣本的常規檢測，值得推廣應用。

參考文獻

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