降脂膠囊的質量標準提升研究

曾芳俐 張 磊* 馮 華

遵義市產品質量檢驗檢測院，貴州 遵義 563000

降脂膠囊主要由葛根、何首烏、銀杏葉、山楂、水蛭、海藻六味中藥材組成[1]，具有消食除痰，活血祛瘀功效。用于脾運失常所致的頭暈、頭痛、胸悶、四肢沉重及高血脂等癥。目前，該制劑已應用于臨床治療中，由于該中藥復方制劑具有藥味較多，成分復雜等特點，現行標準難以保證降脂膠囊質量。為有效控制降脂膠囊的生產質量，本文對其質量標準進行了系統的研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津 LC-20AD高效液相色譜議(包括二元泵，紫外檢測器，柱溫箱，自動進樣器，Shimadzu分析儀器工作站和處理軟件)，Diamosil?C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)為色譜柱；AB265-S型梅特勒電子天平(北京中恒日鑫科技有限公司)，KQ-300DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 葛根對照藥材、葛根素對照品(購于中國食品藥品檢定研究院，批號分別：121551-201103，110752-201806)，甲醇為色譜純(天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20180409)，水為娃娃哈純凈水，其他試劑均為分析純，3批降脂膠囊(批號分別為：161201、180309、180901)遵義市中醫院購買，陰性樣品自制。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別[2-6]取樣品約2.0 g，加甲醇10 mL,放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取葛根對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液，再取葛根素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液，同樣品制法制成陰性樣品溶液。吸取上述4種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶3∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。結果表明，分離度好，斑點顯色清晰，而陰性無干擾，見圖1。

1-3.樣品 4.對照藥材 5.陰性樣品 S.葛根素對照

2.2 含量測定[2-9]

2.2.1 色譜條件 Diamosil?C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)為色譜柱，甲醇-水(30∶70)為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長為250 nm，柱溫35 ℃。進樣量10 μL，相連兩峰分離度應符合規定，理論塔板數按葛根素峰計，應不低于4000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取葛根素照品適量，加甲醇溶解制成含葛根素16.16 μg/mL的對照品溶液，搖勻，用0.45 μm 的微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 取內容物約1.0 g(批號：180901),精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，超聲處理30 min，取出，放冷至室溫，用甲醇補足損失的重量，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 陰性溶液制備 取缺葛根藥材處方下自制陰性樣品，按“2.2.3”項下供試品溶液制備方法制備成陰性對照溶液。精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，按照色譜條件下測定，結果表明陰性對照的色譜圖在葛根素相應的保留時間無干擾峰，詳見色譜圖2。

圖2 HPLC圖譜

2.2.5 線性關系的考察 精密吸取對照品溶液2 μL、6 μL、10 μL、14 μL、18 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，分別以葛根素濃度(μg)為橫坐標，峰面積積分值(A)為縱坐標，繪制標準曲線，計算，回歸方程為：Y=63415X-301.5，R= 0.9999；在32.32～290.88 μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸對照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀中，連續測定6次，記錄峰面積，結果葛根素峰面積的RSD為1.33%%，結果表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩定性試驗 分別吸取(批號180901)同一供試品溶液于0、4、8、12、16、20、24 h，精密吸(批號180901)樣品制備的供試品溶液10 μL進樣，測得峰面積，RSD均值為0.12%，表明在24 h內穩定。

2.2.8 重復性試驗 取同一批樣品(批號180901)6份，精密稱定，按照“2.2.3”項下方法制備成供試品溶液。測定峰面積，計算葛根素平均含量為0.36 mg/g，RSD為0.13%，結果表明重復性好。

2.2.9 加樣回收試驗取(已知含量含葛根素0.36 mg/g)的樣品6份，每份約0.5 g，精密稱定，精密稱取葛根素對照品適量，按“2.2.3”項下的方法操作，計算回收率,葛根素平均回收率為99.15%、RSD為0.66%，見表1。

表1 葛根素加樣回收試驗結果

2.2.10 3批樣品含量測 結果詳見表2。

表2 3批樣品含量測定結果 (n=3)

3 討論

葛根和葛根素的薄層鑒別研究中分別比較了含4%醋酸鈉的硅膠G薄層板、聚酰胺薄層板、硅膠G薄層板和硅膠 GF254 薄層板的效果，結果發現硅膠G薄層板清晰圓整和，硅膠GF254薄層板展開的斑點次之，Rf值到不到要求，而聚酰胺層析板和4%醋酸鈉的硅膠 G 薄層板的斑點分離不理想，所以鑒別過程中選擇硅膠G板用。試驗過程中，對不同的展開劑進行了對比研究，分別嘗試了以二氯甲烷-甲 醇-水(7∶2.5∶0.25)、三氯甲烷-甲醇(8∶2)、三氯甲烷-甲醇-水(10∶2.5∶0.25)、三氯甲烷-甲醇-水(10∶3∶0.1)4 種展開劑。結果表明，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶3∶0.1)為展開劑的斑點與周圍雜質斑點分離較好。

降脂膠囊為復方制劑，為了制定出一種適合降脂膠囊的科學、合理、可行的質量控制分析方法,本論文作了如下研究工作:本實驗使用甲醇-水(15∶85)、甲醇-0.1%磷酸溶液(10∶90)、乙睛-水(15∶85)作為流動相，但是葛根素分離效果不好，并且樣品峰不能回到基線上，所以最后確定以甲醇-水(30∶70)為流動相，不但分離效果最好，并且樣品峰能回到基線。

綜上所述，本試驗對降脂膠囊中的葛根分別進行了薄層鑒別和含量測定研究，所建立的方法穩定可靠、重復性好、專屬性強，陰性無干擾，可以有效控制降脂膠囊中葛根藥材的質量，適用于降脂膠囊的質量控制。