黎辣根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

鄭曉陽(yáng) 黃文峰 何鳳蘭* 劉麗燕

1.廣東省陽(yáng)江市人民醫(yī)院，廣東 陽(yáng)江 529500；2.廣東省陽(yáng)江市檢測(cè)檢驗(yàn)中心，廣東 陽(yáng)江 529500

黎辣根RhamnuscrenataSieb.et Zucc.是鼠李科鼠李屬植物長(zhǎng)葉凍綠的根，又名鈍葉鼠李根[1]、長(zhǎng)葉鼠李根[1]、苦李根、黎羅根[2]，黎辣根具有清熱利濕、殺蟲(chóng)解毒的作用，臨床上治療疥瘡疔瘡、癩癬、麻風(fēng)、蛔蟲(chóng)病等癥狀。有文獻(xiàn)收載其植物形態(tài)圖[2]，但沒(méi)有其藥材性狀、飲片性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別以及含量測(cè)定記載。本研究對(duì)黎辣根進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 DIONEX UltiMate 3000型高效液相色譜儀，水浴鍋，電子天平及各種玻璃儀器。

1.2 材料 黎辣根飲片購(gòu)買于陽(yáng)江市江城區(qū)杏春藥店，取其干燥根粉碎(過(guò)40目藥典篩)，測(cè)得其水分為12.5%。

2 植物形態(tài)與藥材性狀

2.1 植物形態(tài)[1]為落葉灌木或小喬木。高7 m。幼枝帶紅色，被毛，后脫落。葉互生，葉柄長(zhǎng)4～12 cm，被密柔毛。倒卵狀橢圓形、披針狀橢圓形或倒卵形，長(zhǎng)4～14 cm，寬2～5 cm，先端漸尖或短急尖，基部楔形或鈍，邊緣具鋸齒，上面無(wú)毛，下面被柔毛或沿脈被柔毛。聚傘花序腋生，總花梗長(zhǎng)4～15 mm，被柔毛；花單性，異株，淡綠色或紫色；花萼5裂，裂片三角形與萼管等長(zhǎng)，外面有微毛；花瓣5，近圓形，先端2裂；雄蕊5，與花瓣等長(zhǎng)；子房上位，球形，無(wú)毛，3室，花柱不分裂，柱頭不明顯。核果球形，成熟時(shí)黑色或紫黑色，長(zhǎng)5～6 mm。種子青灰色，無(wú)溝。花期5～8月，果期8～10月。見(jiàn)圖a 植物形態(tài)圖(幼苗)和圖b 植物形態(tài)圖。

圖a 植物形態(tài)圖(幼苗) 圖b 植物形態(tài)圖

2.2 藥材性狀 外表面棕褐色或黃褐色。有棕皺紋及橫裂紋。斷面皮部粗糙，黃褐色；木部黃色或淡黃色。質(zhì)堅(jiān)硬，不易折斷。見(jiàn)圖c黎辣根藥材和圖d 黎辣根飲片。

圖c 黎辣根藥材 圖d 黎辣根飲片

3 顯微鑒別

3.1 根粉末顯微特征 石細(xì)胞長(zhǎng)梭形，密集成團(tuán)，胞腔狹小，紋孔明顯，見(jiàn)圖e；紅棕色塊類圓形，重疊集結(jié)成團(tuán)狀，見(jiàn)圖f。

圖e 根粉末顯微特征1 圖f 根粉末顯微特征2

3.2 根橫切面顯微特征 根皮部含有較多紅棕色團(tuán)塊，見(jiàn)圖f；木質(zhì)部細(xì)胞類圓形，放射狀排列，髓部不明顯，見(jiàn)圖g。

圖g 根橫切面顯微特征

3.3 莖粉末顯微特征 纖維成束，繩狀，纖維束上嵌有密集的草酸鈣方晶，形成晶纖維，見(jiàn)圖h；石細(xì)胞成群，壁厚，胞腔細(xì)小，紋孔明顯，見(jiàn)圖i。

圖h 莖粉末顯微特征1 圖i 莖粉末顯微特征2

4 薄層鑒別

取本品粉末2 g，加甲醇60 mL，40 ℃加熱回流45 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?.5 mol/L硫酸溶液10 mL，水浴加熱30 min，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次10 mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，即得供試品溶液。分別取大黃素對(duì)照品、大黃素甲醚對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL各含 1mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(通則0502)[3]試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液5 μL、大黃素對(duì)照品和大黃素甲醚對(duì)照品溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～6 0℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下觀察，結(jié)果見(jiàn)圖j。另置于氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色，結(jié)果見(jiàn)圖k。

圖j 薄層鑒別結(jié)果1 圖k 薄層鑒別結(jié)果2

5 含量測(cè)定

5.1 色譜條件 與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)為流動(dòng)相，流速：l mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；柱溫：30 ℃。

5.2 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取大黃素10.63 mg，加甲醇溶解，使配成每1 mL含大黃素20 μg的對(duì)照品溶液，即得。

5.3 供試品溶液的制備 精密稱取3批粉碎過(guò)40目藥典篩的黎辣根粉末各2 g，分別加入甲醇20 mL，40 ℃水浴加熱回流提取45 min，過(guò)濾，濾液蒸干，用甲醇適量使溶解，移至10 mL容量瓶，過(guò)0.45 μL微孔濾膜，即得。

5.4 線性關(guān)系 考察分別精密吸取同一對(duì)照品溶液8.504 μg/mL、17.008 μg/mL、25.512 μg/mL、34.016 μg/mL、42.520 μg/mL，注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積。以大黃素對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y=3.7079X，r=0.999(n=5)。表明大黃素對(duì)照品線性關(guān)系良好，結(jié)果見(jiàn)表2、圖L。

表2 進(jìn)樣濃度與峰面積表

圖L 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

5.5 精密度試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μL,測(cè)定大黃素峰面積，測(cè)定結(jié)果RSD=0.62%，表明該方法精密度良好，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 精密度試驗(yàn)表

5.6 重復(fù)性試 驗(yàn)取同一批號(hào)供試品，按供試品溶液制備方法制備6份供試液。按照正文含量測(cè)定方法，測(cè)定每份樣品中大黃素的含量，結(jié)果RSD=1.71%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)表

取精密度試驗(yàn)的對(duì)照品測(cè)得的結(jié)果參與重復(fù)性試驗(yàn)的計(jì)算,結(jié)果見(jiàn)表5。

表5

5.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 以選定濃度(mg/mL)為準(zhǔn)的供試溶液, 分別在0、1、2、4、6 h時(shí)間段內(nèi)測(cè)定峰面積。

5.8 加樣回收率 試驗(yàn)取已知含量為0.64 mg/g的黎辣根，打成細(xì)粉(過(guò)3號(hào)篩)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共6份，再分別精密加入大黃素對(duì)照品溶液(溶劑為甲醇溶液，濃度為0.6505 mg/mL)2.5 mL，稱定重量，然后按正文含量測(cè)定方法供試品溶液制備項(xiàng)下的方法操作測(cè)定，記錄色譜圖，考察本方法的加樣回收率，加樣回收率為97.9%，RSD為0.31%，表明該方法回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 加樣回收率試驗(yàn)表

5.9 樣品含量測(cè)定

5.9.1 測(cè)定 分別吸取3批供試品溶液和大黃素對(duì)照品溶液各5 μL，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定，計(jì)算，即得。

5.9.2 結(jié)果 3批黎辣根大黃素的含量分別為0.4216mg/g、0.4290 mg/g、0.4285mg/g。

6 討 論

薄層色譜斑點(diǎn)清晰、分離度好；高效液相含量測(cè)定專屬性強(qiáng)，分離度和重復(fù)性好。通過(guò)試驗(yàn)研究，確定以甲醇為溶劑，40 ℃水浴加熱回流提取45 min為含量測(cè)定中最優(yōu)的樣品提取方法。本研究方法準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，創(chuàng)新性強(qiáng)，可用于黎辣根的質(zhì)量控制。