深圳市某院病毒性腹瀉患兒病原分布及季節流行特征

梁翠瓊，湯美玲，謝治華

（深圳市龍華區中心醫院兒科，廣東 深圳 518110）

急性腸道感染是兒童常見的感染性疾病，50%～70%的兒童急性腸道感染是由病毒引起的[1]，兒童病毒性腹瀉患病率存在顯著地域和季節差異[2-4]。本研究調查深圳市龍華區中心醫院病毒性腹瀉患兒輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒和星狀病毒感染流行情況，以期為本地區兒童急性腸道感染的防治提供依據。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2015年2月1日—2017年3月31日深圳市龍華區中心醫院（深圳市病毒性腹瀉監測哨點醫院）1 050例急性腹瀉患兒，其中男726例、女324例，年齡1個月～5歲，臨床癥狀包括糞便量多而稀薄、發熱、嘔吐和脫水等。兒童病毒性腹瀉的診斷標準參照《中國腹瀉病診斷治療方案》，包括由胃腸炎癥狀引起的疾病急性發作、發病周期短，家庭接觸或兒童集體發病、季節性流行，且實驗室檢查結果顯示糞便中無細菌抗原、分子診斷檢測出腸道病毒核酸[5]。

1.2 樣本采集

收集患兒入院當日（不遲于疾病開始的第3天）糞便樣本，置于含冷凍保護劑和防腐劑等運輸介質的單個塑料容器中，-20 ℃冷凍保存待檢。為確保可重復分析，研究剩余樣本儲存于-70 ℃液氮中。每位入選患兒的父母均簽署知情同意書。

1.3 方法

1.3.1 病毒抗原檢測 取0.1 g糞便放入1.5 mL Eppendorf管中，加入900 μL樣本稀釋液。混勻后離心，取上清液用于病毒抗原檢測。采用酶聯免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒和星狀病毒抗原，試劑購自上海酶聯生物科技有限公司

1.3.2 病毒核酸檢測 采用多重聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）檢測輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒和星狀病毒核酸。采用Invitrogen MagMAX和Thermo Scientific KingFisher純化系統自動化核酸（磁珠法）抽提儀（北京博爾邁生物技術有限公司）提取核酸，提取的核酸置-20 ℃保存備用。采用隨機引物及SuperScriptⅡ反轉錄酶（北京博爾邁生物技術有限公司）將提取的RNA轉為互補DNA。

1.3.3 細菌分離和培養 將糞便樣本分別接種于SS瓊脂、麥康凱瓊脂培養基，35 ℃培養24 h，挑取可疑菌落涂片染色，進行氧化酶試驗、觸酶試驗、O-F試驗。參照《全國臨床檢驗操作規程》（第4版）要求進行菌種的鑒定。

1.4 統計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析。計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4種病毒檢出情況

1 050例患兒中，有483例（46.00%）病毒抗原陽性，有595例（56.67%）病毒核酸陽性。2種檢測方法的陽性符合率為75.86%，陰性符合率為74.70%。見表1。

表1 ELISA與多重PCR對4種病毒的檢出情況 例

2.2 患兒病原分布

以多重PCR檢測到病毒核酸陽性為標準，有595例樣本檢出病毒，以輪狀病毒最多（23.24%，244例），以下依次為諾如病毒（17.05%，179例）、腺病毒（9.62%，101例）、星狀病毒（6.76%，71例）；有84例樣本檢出細菌，其中53例（5.05%）檢出沙門菌、31例（2.95%）檢出志賀菌。有急性腹瀉臨床表現的情況下，371例（35.33 %）樣本采用ELISA未能確定病原體。

2.3 患兒單一感染及混合感染情況

在大多數病例中，473例（45.05%）患兒以單一感染形式發病，122例（11.62%）患兒為混合感染；輪狀病毒單一感染率為30.42%，顯著高于諾如病毒（24.87%）、腺病毒（13.78%）和星狀病毒（10.42%）（P＜0.05）。見表2。

2.4 不同性別、年齡患兒病毒檢出情況

726例男性患兒中，4種病毒核酸檢測陽性388例（56.20%）；324例女性患兒中，4種病毒核酸檢測陽性187例（57.72%）；不同性別患兒陽性檢出率比較，差異無統計學意義（χ2=0.210，P=0.647）。1 050例患兒中，＜3歲患兒688例，4種病毒核酸檢測陽性442例（64.25%），分別有186、145、67、44例檢出輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒、星狀病毒；3～5歲患兒362例，4種病毒核酸檢測陽性153例（42.27%），分別有58、34、34、27例檢出輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒、星狀病毒，不同年齡患兒陽性檢出率比較，差異有統計學意義（χ2=46.663，P=0.001）。

表2 患兒單一感染和混合感染頻率

2.5 4種病毒季節流行特點

4種病毒不同季節檢出率明顯不同：冬-春季（1—5月）為輪狀病毒感染高峰期；春-夏季（4—8月）為諾如病毒感染高峰期；秋-冬季（9—次年2月）腺病毒感染增幅最大，且在腺病毒感染患兒中同時檢測出星狀病毒，值得注意的是，二者的發病率均在10—12月有所上升。對所有研究月份的頻率進行比較分析，發現輪狀病毒頻率的波動率為0.50%～22.95%，諾如病毒為2.2 2%～2 2.4 5%，腺病毒為0.76%～23.48%，星狀病毒為1.24%～27.25%。輪狀病毒1月檢出率增多，3—4月達到最大值，6—10月檢出率最低。盡管輪狀病毒感染主要發生在寒冷季節，但夏天也可出現零星病例。諾如病毒感染全年均可檢出，但以夏季最多。腺病毒和星狀病毒感染均在9—次年2月呈上升態勢，9月星狀病毒檢出率為1.50%，10和11月快速升高，12月達到高峰，占全年的26.72%。不同季節病毒病原體檢出頻率見圖1。

圖1 病毒性腹瀉患兒病原感染時間分布

在冬季，最常見的感染性病原體是星狀病毒（49.14%），其次為腺病毒（45.62%）、輪狀病毒（29.51%）和諾如病毒（14.13%）；春季為輪狀病毒（59.36%）流行高峰季節，以下分別是諾如病毒（15.93%）、星狀病毒（13.85%）和腺病毒（7.50%）；夏季兒童病毒性腹瀉病例較少，但諾如病毒感染（51.66%）在此期間較常出現。在秋季，腺病毒（42.82%）是主要的感染性病原體。病毒性腹瀉是兒童腹瀉的重要原因之一，常見于單一感染，具有季節性流行特征，且主要在寒冷季節暴發。見圖2。

圖2 4種病毒性季節分布

3 討論

病毒性腹瀉的治療策略與細菌性急性腸道感染的治療策略有很大不同。抗菌療法對病毒性急性腸道感染沒有積極的治療效果，相反可能阻礙疾病臨床癥狀的消退，使患兒病情惡化，并誘發其他臨床癥狀[6]。臨床實踐已經證明，病毒性腹瀉的持續時間及治療效果取決于早期診斷和對癥治療。本研究調查了深圳市龍華區中心醫院5歲以下腹瀉患兒輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒、星狀病毒的分布及季節流行特征，結果表明，患兒以單一病毒感染形式發病多見（45.0%），混合感染僅占11.67%。有研究發現，40%以上的嬰兒胃腸炎是腸道病毒感染所致[7]，與本研究結果一致。本研究中，不同性別患兒病毒陽性檢出率無差異，但＜3歲患兒病毒陽性檢出率高于3～5歲患兒，與洪展桐等[8]的研究結果一致，可能是因為＜3歲嬰幼兒自身免疫系統發育不成熟，易受到病毒的侵襲，而3～5歲兒童自身免疫力逐漸增強，故感染率較低。

輪狀病毒主要感染6歲以下兒童，被認為是兒童腸胃炎的主要病原體[9]。本研究輪狀病毒陽性檢出率為23.24%，低于LASURE等[10]糞便樣本中輪狀病毒陽性檢出率為31%～67%的研究結果，可能是因為近年來深圳市嬰幼兒服用輪狀病毒糖丸進行疾病預防起到了較好效果。但本研究結果顯示，輪狀病毒陽性檢出率仍高于其他3種病毒，提示還需進一步加強對輪狀病毒的防控。

諾如病毒是兒童胃腸炎的第二常見病原[11]，在中、重度胃腸炎患兒中的檢出率為8%～15%[12-13]。印度的一項研究發現，糞便樣本中諾如病毒的檢出率為20%～55%[14]。LOPEZ等[15]通過糞便檢測與血清學檢測，發現烏拉圭＜5歲兒童中諾如病毒的陽性檢出率達55%，與輪狀病毒的陽性檢出率相似。本研究發現，諾如病毒在全年均可檢出，以夏季更常見，4—8月為諾如病毒感染高峰期，可能與春夏季的食物和水源供應有關。

世界范圍內星狀病毒和腺病毒的陽性檢出率為5%～18%，本研究腺病毒和星狀病毒的陽性檢出率分別為9.62%和6.76%，2種病毒季節性流行特征相似，均在9—次年2月呈上升態勢，與裴林夕等[16]的研究結果——深圳市2010—2012年腺病毒和星狀病毒主要分布在秋冬季，10月達到高峰一致。

綜上所述，輪狀病毒和諾如病毒是深圳市龍華區中心醫院5歲以下腹瀉患兒的主要致病因素，單一病毒性感染比混合感染更常發生。兒童病毒性腹瀉發病以季節性流行為特征，4月為輪狀病毒感染高峰期，7月為諾如病毒感染高峰期，腺病毒和星狀病毒感染在11、12月寒冷季節高發。醫療機構應采取有效措施，預防本地區兒童急性腸道感染的發生。