丹紅注射液對小鼠無氧運動抗疲勞的實驗研究*

侯志琨，東 淳

陜西中醫藥大學(咸陽 712046)

現代競技體育之所以吸引觀眾，是由于當中有大量的短時快速激烈的對抗，而無氧運動是運動員對抗中短時間、高強度運動主要能力的體現[1]。無氧運動能力是指肌肉在無氧供能代謝狀態下的身體工作能力，通常以最大無氧代謝狀態下的身體工作能力表示。表示為人體肌肉的無氧代謝供能系統提供ATP的極限能力[2]。隨著競技體育強度的增加，運動員的負荷也越來越重，再加上反興奮劑的力度越來越大[3]。如何科學合理的使用藥物既沒有違規又能增加運動員無氧運動能力，緩解其肌肉疲勞，使其更好地適應各類比賽項目引起了我們的思考與探索[4]。中藥制劑以其提高機體運動能力、降低運動損害效果明顯，不良作用小，安全穩定，近幾年在運動員治療之中的得到了廣泛的運用[5]。丹紅注射液具有活血化瘀、通脈舒絡功效，臨床常用于治療冠心病、心絞痛的治療[6]，近年來也用于內分泌等病癥的治療，具有廣泛的藥理作用。丹紅注射液主要含有丹參酮、丹參酸、丹參酚酸及紅花黃色素、紅花酚苷和兒茶酚等化學成分[7]。近年來丹參、紅花的抗疲勞研究已被多方面報道[8]。在參考相關文獻和丹紅注射液應用基礎上，本實驗以小鼠為對象，觀察對于糖酵解供能情況下訓練小鼠所致疲勞、急性缺氧的改善情況并加以記錄，以此為丹紅注射液抗疲勞提供試驗依據，并對運動員訓練比賽提供參考。

材料與方法

1 實驗材料

1.1 藥品:丹紅注射液，由山東丹紅制藥有限公司提供；紅景天膠囊，由陜西嘉禾植物化工有限責任公司提供；生理鹽水。

1.2 動物:昆明種小鼠，體重18～20 g雄性，由中國人民解放軍第四軍醫大學實驗動物中心提供。實驗前適應性飼養1周。

1.3 器械與儀器:腹腔注射器、玻璃游泳缸、解剖剪、電子分析天平、酶標儀，ELX808-IU酶聯免疫檢測儀、勻漿機、離心機、離心管、秒表等。

1.4 試劑:SOD試劑盒、MDA試劑盒、LD試劑盒、Hb 試劑盒、LDH 試劑盒、BUN 試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

2 實驗方法

2.1 分組與給藥:動物分籠飼養，自由飲食，自然光照，動物房室內溫度(20±2)℃，相對濕度40%～60%。空白組、訓練組、低劑量組、高劑量組、紅景天陽膠囊陽性對照組各15只。空白組腹腔注射等量蒸餾水，不運動。訓練組，腹腔注射等量蒸餾水，運動。低劑量組，腹腔注射低劑量0.05 ml/kg丹紅注射液，運動。高劑量組，腹腔注射高劑量0.1 ml/kg丹紅注射液，運動。紅景天膠囊陽性對照組，灌胃給藥0.674 g/kg紅景天膠囊，運動[9]。給藥30 d。

2.2 負荷游泳實驗：于給藥20 d后，小鼠實驗每日下水進行適應性訓練3 d，每天3 min以適應水刺激。3 d后開始為期6 d的游泳訓練。在水深30 cm水溫25 ℃的游泳池中進行無氧訓練。第1天不負重，適應性訓練5 min。從第1天起，每天訓練2 min×5次。間隔時間大于1 min。第1、2天負重13%體質量的鉛絲，第3、4天負重15%體質量的鉛絲，第5、6天負重18%體質量的鉛絲，保證游泳范圍充足，避免碰撞。并對小鼠運動能力進行觀察。在完成6 d無氧游泳運動后，第7天選擇空白組、訓練組、低劑量組、高劑量組、紅景天陽膠囊陽性對照組小鼠，采取尾部負重10%體質量的鉛絲進行一次性力竭游泳運動，并記錄小鼠沉到水下8 s不能返回水面的時間[10]。

2.3 體質量測試：在小鼠灌胃飼養前和末次灌胃后，分別稱量各組小鼠的體質量，然后計算灌胃前、后體質量差值，考察丹紅注射液對小鼠體質量的影響。

2.4 生化指標檢測：采集血液，游泳實驗結束后的小鼠立即處死，摘除眼球采集內眥血，參照LD試劑盒說明書測定血乳酸含量和全血中血紅蛋白含量，其余血液在4 ℃，3000 r/min離心15 min，取血清作為測定樣品。稱取0.1 g小鼠肝臟組織，加0.9 ml生理鹽水，冰水浴條件下，使用玻璃勻漿器手動勻漿，4000 r/min離心15 min，取上清，制成10%肝臟組織勻漿液。分別參照SOD試劑盒、MDA試劑盒、LDH試劑盒、BUN試劑盒測定肝組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和血清中乳酸脫氫酶(LDH)、血尿素氮(BUN)的含量。

3 統計學方法 采用SPSS 19.0統計學軟件對所有數據進行單因素方差分析和多重比較，試驗各種數據均用均數±標準差表示。采用獨立樣本t檢驗和方差檢驗判斷均數差異。以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 各組小鼠體質量變化 見表1。給藥前各組小鼠體質量比較差異無統計學意義，實驗期間小鼠體重均自然增長。游泳訓練結束后各組小鼠的體重均逐漸增長，但空白組小鼠體質量增長幅度較給藥組緩慢，但差異無統計學意義。

2 各組小鼠游泳時間變化 見表1。給藥組小鼠在訓練期間的游泳時長普遍高于對照組。 給藥組小鼠游泳時體力狀況較訓練組好，能很好地完成每日規定的15次訓練任務，低劑量、高劑量組和陽性組小鼠游泳時間明顯長于空白組與訓練組小鼠。在完成6 d無氧游泳運動后，第7天小鼠游泳力竭時間，低劑量組、高劑量組和陽性組力竭游泳時間較空白組顯著延長，較訓練組差異有統計學意義 (P<0.05)。

表1 丹紅注射液對小鼠體質量及游泳時間的影響

3 小鼠運動后抗氧化指標的變化 見表2。各給藥組的小鼠的抗氧化指標普遍優于空白組和訓練組，SOD活性明顯高于空白組和訓練組(P<0.05)，MDA含量明顯低于空白組和訓練組(P<0.05)。

表2 丹紅注射液對小鼠運動后抗氧化指標的影響

4 小鼠運動后抗疲勞指標的變化 見表3。 各給藥組小鼠Hb含量和LDH活力高于空白組和訓練組，差異有統計學意義(P<0.05)；LD含量和BUN含量比空白組和訓練組明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)。

表3 丹紅注射液對小鼠運動后抗疲勞指標的影響

討 論

本試驗以雄性小鼠為實驗對象，先進行適應性水刺激訓練，確定用相當于小鼠自身重量的負重來達到模擬無氧運動的目的。通過大強度訓練可使機體處于極度缺氧狀態，導致運動耐力下降，而中醫認為這種疲勞為氣耗血滯所致。丹紅注射液的主要成分為丹參、紅花。丹參味苦，微寒，具有活血祛瘀，通經止痛，清心除煩，涼血消癰之功效；紅花辛，溫，活血通經，散瘀止痛，兩者合一具有活血化瘀、通脈舒絡功效，故對無氧運動引起的疲勞有一定作用。而現代醫學認為無氧運動可引起體內代謝物——乳酸大量堆積，這是因為無氧運動期間動物主要以糖酵解方式供能[11]，乳酸是糖無氧氧化的產物。而以糖酵解為主的無氧訓練所致的疲勞是因為乳酸堆積過多，阻礙肌糖原和葡萄糖的分解，影響ATP再合成的緣故，降低乳酸含量可以起到緩解疲勞的作用。生物機體還有抵抗自由基損傷的防御系統，有國外臨床研究發現，對成年男子進行21周的耐力訓練后，成年男子體內SOD、過氧化氫酶(CAT)等抗氧化酶的活性增強[12]，提高體內SOD、CAT等抗氧化酶的活性，進而提高機體消除自由基能力，增強機體對運動疲勞的耐受性。本實驗通過對實驗鼠肝勻漿SOD、MAD；血漿中LD、Hb以及血清中LDH、BUN的影響[13]來驗證丹紅注射液對實驗鼠無氧運動具有抗疲勞作用。

本實驗發現，給藥小鼠LD和BUN濃度較對照組顯著降低、Hb含量有顯著升高，說丹紅注射液具有的活血養血補血和較強的耐缺氧功效，能穩定紅細胞膜的結構和功能，促進Hb生成，有效改善機體缺氧狀況，提高小鼠無氧運動能力。在實驗中我們發現用藥組小鼠游泳時長普遍多于對照組，而在氣血指標中也可看出LDH活性也高于對照組。所以可以證明丹紅注射液對于負荷的適應性和抗疲勞有很大幫助。血清BUN為運動時蛋白質的代謝產物，是反映蛋白質分解代謝的主要指標[14]，機體血清BUN含量隨著運動負荷的增加而增加，機體對負荷的適應能力越差，血清BUN的增加就越明顯。而實驗結果也表明丹紅注射液明顯降低血清中BUN的含量可以延緩疲勞的發生。我們還觀察到，用藥組小鼠在質量的增加幅度上略高于對照組。理論上機體產生的自由基可以通過損害RNA來抑制蛋白質合成來阻礙生長發育[15]。但SOD活性的升高，小鼠體重的增加也可以說明丹紅注射液對小鼠無氧運動能力的保持具有一定作用。

綜上所述，丹紅注射液能顯著提高無氧運動疲勞小鼠的耐力，明顯降低疲勞小鼠體內血清尿素和血乳酸的含量，提高疲勞小鼠體內SOD和MDA活性，抗疲勞作用顯著。丹紅注射液抗疲勞的作用和機制值得進一步研究。