白癜風患者外周血Th17/Treg細胞與相關細胞因子水平變化及臨床意義

王修勇，常 遠，高 明，張 帆

白癜風是臨床常見的色素脫失性皮膚病之一，主要表現為局限性或廣泛性黑素細胞功能障礙。近期有研究指出，白癜風是一種多基因遺傳的自身免疫性疾病，它的發生與自身免疫因素密切相關［1］。Th17/Treg細胞是近年來新發現的T細胞亞群，兩者通過其相對應的細胞因子在自身免疫性疾病中發揮重要作用［2］。筆者通過對98例白癜風患者外周血Th17/Treg細胞及相關細胞因子含量進行檢測，以探討Th17/Treg細胞及相關細胞因子在白癜風中的作用和意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象收集2016年8月—2018年7月在筆者所在醫院皮膚科就診并被確診為白癜風的患者98例，納入研究組，其中男65例，女33例；年齡15～65歲，平均（32.6±13.2）歲；穩定期56例，進展期42例。排除標準：伴有甲狀腺功能亢進等自身免疫性疾病，近1個月曾接受免疫調節劑治療者。另外選取相同時期在醫院門診進行健康體檢的志愿者40例，其中男26例，女14例；年齡7～65歲，平均（34.6±10.8）歲。兩組間性別、年齡、疾病分期對比差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 方 法

1.2.1 主要試劑盒和檢測儀器Uranus AE酶免儀（深圳市愛康生物科技有限公司）、CytoNova流式細胞儀（北京博奧晶典生物技術有限公司），試劑：Th17流式檢測試劑盒（上海江萊生物科技有限公司）：包括抗人CD3-FITC和抗人CD4-PE，抗人IL-17A-PE及匹配的鼠IgG1同型對照。CD4+CD25+Foxp3+Treg一步法流式檢測試劑盒（Biolegend公司）：抗人CD4-FITC、抗人CD25，FOXP3及匹配的鼠IgG1同型對照。IL-17、IL-23、IL-6和TGF-β ELSIA試劑盒均由Biosource公司提供。

1.2.2 檢測方法 采集兩組每位研究對象的靜脈血6 ml分裝2個試管，各3 ml，1個試管用于流式細胞術檢測Th17/Treg細胞，另1個試管用ELSIA法對IL-17、IL-23、IL-6和TGF-β含量檢測。各項檢測嚴格按照說明書進行。

1.3 統計學方法采用SPSS 18.0軟件進行統計學分析，計量資料以（x±s）表示，正態性檢驗和方差齊性檢驗后，進行兩獨立樣本t檢驗，相關分析用Pearson相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者Th17/Treg細胞及相關細胞因子表達情況研究組外周血Th17細胞、Th17/Treg、IL-17、IL-23、IL-6水平明顯高于對照組（P＜0.05），Treg細胞、TGF-β水平均明顯低于對照組（P＜0.05），見表1。

2.2 不同分期患者血Th17/Treg細胞及相關細胞因子表達情況進展期外周血Th17細胞、Th17/Treg、IL-17、IL-23、IL-6水平明顯高于穩定期（P＜0.05），Treg細胞、TGF-β水平均明顯低于穩定期（P＜0.05），見表2。

2.3 白癜風患者外周血Th17/Treg細胞與相關細胞因子的關系白癜風患者外周血Th17細胞與IL-17、IL-23、IL-6水平呈明顯正相關（P＜0.05），與TGF-β無明顯相關性（P＞0.05），Treg細胞與IL-17、IL-23水平呈明顯負相關（P＞0.05），與TGF-β呈明顯正相關（P＜0.05），與IL-6無明顯相關性（P＞0.05），見表3。

表1兩組患血Th17/Treg細胞及相關細胞因子表達情況（x±s）

表2不同分期患者血Th17/Treg細胞及相關細胞因子表達情況（x±s）

表3白癜風患者外周血Th17/Treg細胞與相關細胞因子的關系

3 討論

Th17細胞是近年新發現的一種免疫細胞，具有強大的促炎作用［3］。Th17細胞與Treg細胞間存在密切關系，兩者功能互相拮抗，但分化時密切相關，正常生理狀態下，Th17細胞和Treg細胞處于相對平衡狀態，當其中一種細胞或兩種細胞的數量及功能發生異常，則可引起疾病的發生發展［4］。

該研究發現，白癜風患者Th17細胞占比較正常明顯升高，而Treg細胞占比明顯低于正常，而且Th17/Treg比值較正常對照組明顯升高，提示白癜風患者機體存在Th17/Treg細胞的免疫失衡，這種免疫失衡可能參與了白癜風的發生和進展過程。

Th17細胞是一種介導炎癥反應和自身免疫的細胞，其在自身免疫性疾病病理過程中發揮重要作用，它主要分泌IL-17A、IL-17F、IL-6和TNF-α等炎性因子［5］。Treg是一種有負性調節作用的T細胞，它可特異性表達轉錄因子Foxp3，可分泌IL-10、TGF-β等抑制性因子，從而起到抗炎和維持自身免疫耐受的作用［6］。Th17細胞與Treg細胞均由CD4+T細胞分化而來，二者相互聯系，但又相互制約。該研究發現，白癜風進展期患者的Th17細胞占比較穩定期患者明顯升高，Treg細胞占比在明顯下降，可能就是Th17/Treg細胞免疫失衡在白癜風發生進展中發揮重要作用。

IL-23由炎癥中被抗原激活的巨噬細胞和樹突狀細胞分泌，是Th17細胞分化的重要因子，盡管不是Th17細胞分化的始動因子，但它在Th17細胞分化過程中發揮重要作用［7］。Th17細胞合成IL-17后可與上皮細胞、內皮細胞等間質細胞表面上的IL-17受體結合，使MAP激酶和NF-KB活化而發揮多種生物學作用，進而刺激此類細胞產生多種細胞因子，使白細胞向病灶遷移并促進其成熟和活化，白細胞活化后可產生溶酶體酶等物質，進而引起組織和細胞損傷，使炎癥加?。?］。IL-17主要源于Th17細胞，可使巨噬細胞向炎癥病灶聚集，并被細菌和細菌毒素激活，激活后的巨噬細胞則通過分泌IL-6、IL-23、TNF-α等炎性因子，加重局部炎癥反應。而IL-23則會加速T細胞向Th17細胞分化，使Th17細胞占比進一步升高，而Th17細胞占比升高又會分泌更多的IL-17，使IL-17濃度升高，加劇炎癥反應［9］。

該研究結果顯示，白癜風患者外周血IL-17水平與Th17細胞呈明顯正相關，提示IL-17是由Th17細胞合成和釋放。IL-17、IL-23與IL-17細胞呈正相關，與Treg細胞呈負相關，提示IL-17、IL-23可能對Treg細胞有抑制作用。Ye Xin等［10］研究指出，IL-17、IL-23對Treg細胞有抑制作用。

IL-6也是Th17細胞分泌的細胞因子之一，在白癜風患者中其水平明顯升高［11］。該研究相關性分析顯示，白癜風患者IL-6水平與Th17細胞占比有明顯的正相關，但與Treg細胞關系不明顯。TGF-β是Treg細胞分泌的細胞因子。該研究結果顯示，白癜風患者TGF-β與Th17細胞無明顯相關性，但與Treg細胞密切相關，且白癜風患者TGF-β水平明顯低于正常對照組，提示TGF-β源于Treg細胞。

研究證實，IL-6在Th17細胞和Treg細胞間發揮著紐帶作用，在無IL-6存在情況下，TGF-β刺激使活化的T細胞向Treg細胞分化，當IL-6、TGF-β同時存在時，則會刺激活化T細胞向Th17細胞分化［12］?？梢姡装Y局部因IL-6水平升高與一定含量的TGF-β共存，進而引起Th17細胞數量增多，加劇炎癥反應。

總之，Th17和Treg細胞的免疫失衡在白癜風患者的病變中發揮重要作用，炎癥局部大量表達IL-17、IL-6、IL-23會使Th17細胞數量進一步增加，而增多的Th17細胞有進一步增加炎性因子的分泌量，加劇局部炎癥，可見，Th17/Treg失衡及其相應細胞因子在白癜風的免疫病理損害中發揮重要作用，這可能為白癜風的靶向治療提供理論依據。