淺談腐敗梭菌病診斷及防治措施

賈鋒軍

（山東省臨朐縣農業農村局柳山畜牧獸醫站 262616）

腐敗梭菌（Clostridium septicum）舊稱為腐敗桿菌（Bacillus septicus）、腐敗弧菌（Vibrio septicus），是引起動物和人惡性水腫（Malignant edematis maligni）的主要病原菌，故也曾稱為惡性水腫桿菌（Bacillus edema）[2]。是巴斯德在1877年培養的第一個厭氧致病微生物[1]。腐敗梭菌是第一個分離到的致病性厭氧菌，是人和動物氣性壞疽的主要病原之一[3]。在家畜中由本菌感染引起的牛的惡性水腫和羊的快疫占有重要地位[3]。

1 腐敗梭菌在我國的流行情況

1953 年我國正式確診羊快疫的存在[3]，自此之后腐敗梭菌給我國畜牧業帶來了巨大的經濟損失。2005 年10 月山東省某規模養殖場死亡育成波爾山羊50 余只[4]，2008 年海晏縣三角城鎮三角城村9 戶牧民飼養的2430 只綿羊中死亡羊330 只[5]，2009～2010 年石河子某規模化奶牛場先后死亡11 頭高產奶牛[6]，2011 年4 月甘肅省永靖縣三塬鎮出現巴氏桿菌和腐敗梭菌混合感染病例[7]，同年11 月青海省大通縣某牛場放牧牦牛群死亡牦牛9 頭[8]，2012 年2 月山東省即墨市腐敗梭菌感染發病山羊12 只綿羊20 只[9]，青島市城陽區死亡小羊4 只大羊1只[10]，2013 年重慶大足區石馬鎮某羊場出現巴氏桿菌與腐敗梭菌混合感染死亡大足黑山羊22 只[11]，2013 年11 月涇源縣涇河源鎮北營村赫某飼養的20 只羊死亡羔羊4 只[12]，2014 年3 月新疆伊吾縣鹽池鄉王某飼養的250 只綿羊死亡羊6 只[13]，同年4 月廣西壯族自治區資源縣資源鎮謝某飼養的山羊死亡30余只[14]，8 月山東省東營市某養殖戶發生羊腐敗梭菌病[15]，2014 年9 月甘肅省武威市涼州區腐敗梭菌與鏈球菌混合感染死亡藏系羊5 只[16]，同年10 月廣西壯族自治區興賓區良江鎮山羊養殖戶石某山羊死亡17 只[17]，2015 年1 月廣西宜州市龍頭鄉德惠村上水屯某養殖戶山羊死亡6 只[18]，同期青海省海北州祁連縣默勒鎮扎隆鄉死亡羊40 只[19]，2015 年4 月甘肅省臨洮縣某養殖場綿羊死亡13 只[20]，同期河北省遷安市彭店子鄉某養殖戶小尾寒羊死亡6 只[21]，2016 年3 月內蒙古赤峰市克什克騰旗達來諾日鎮某養殖戶綿羊死亡11 只[22]，同期湖南省新晃縣原方家屯鄉方家屯蔡某山羊死亡8 只[23]，2016 年10 月武漢市黃陂區某養殖場育成羊死亡11 只[24]，2017 年內蒙古科右前旗俄體鎮三合村陳牧仁家綿羊死亡1 只[25]。近10 年的報道表明，腐敗梭菌在我國各地都有暴發，給我國養殖業帶來了巨大危害。

2 腐敗梭菌概況

2.1 腐敗梭菌主要生物學特性

腐敗梭菌為革蘭氏陽性厭氧菌，可產生芽孢[26]，有鞭毛，無莢膜，芽孢卵圓，位于中央或偏端，芽孢橫徑較菌體寬[27]。本菌專性厭氧，葡萄糖鮮血瓊脂平板37℃厭氧培養48h 形成灰白色或半透明、邊緣不整微微隆起的菌落形態，可以發酵葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、麥芽糖、水楊素、甘露糖，不發酵蔗糖，可液化明膠[28]。Robertson，Handerson，Moussa，Shirasaka 等報道本菌存在不同血清型，楊學禮也證實我國分離株也存在不同血清型。本菌有O 抗原和H 抗原，Handerson 和楊學禮等報道不同型的“O”抗原菌株之間缺乏有效交叉免疫，可以看出，對于本菌的分型，尤其是按“O”抗原進行分型，具有重要意義[3]。本菌用一般消毒藥物短時間可以殺死繁殖體，芽孢在腐敗尸體中可以存活3 個月，土壤中存活20～25年，煮沸2～10min 或0.2%氯化汞，1.05%～1.2%甲醛處理10min，能將本菌芽孢殺死[27]。

2.2 腐敗梭菌致病性

腐敗梭菌可以產生α、β、γ、δ 4 種外毒素，其中α 為主要致死性毒力因子[29,30]，具有壞死、溶血和致死作用[31]。α 毒素分子量大小為46～48kDa，在其C 末端經水解后形成活化形式，大小為41～44kDa[32,33]，β 毒素為脫氧核糖核酸酶，可殺白細胞，γ 和δ 毒素分別具有透明質酸酶和溶血素活性。這些毒素可增強血管通透性，引發肌肉壞死[34]。

致病范圍包括人、馬、牛、綿羊、豬、犬、貓、雞等。實驗動物以豚鼠和小鼠最易感。經創傷感染可致人的氣性壞疽，馬、牛、羊、豬等家畜的惡性水腫及雞氣性水腫。消化道內源性感染致牛、綿羊及山羊快疫[2]。

2.3 腐敗梭菌感染臨床癥狀及剖檢癥狀

腐敗梭菌引起的疾病傳播速度快、發病急，死亡率高。以突然發病死亡、食欲減退、體溫升高為特征，并伴有傷口或者腹部膨大、磨牙、疝痛、口鼻等部位流出泡沫樣血色液體，最為典型的病理變化為局部膨大水腫甚至糜爛壞死、腹腔積液、有氣泡及出血點[34]。

綿羊山羊常常表現出突然發病，不治而亡，病程稍長者表現出離群獨臥，不愿走動，運動失調等癥狀。病羊出現腹部膨大，胃腸臌氣，有疼痛感，有時還會出現磨牙，口鼻流出血泡沫狀液體，排糞困難等癥狀。體溫升高，最高可達39～40℃，數小時之內死亡[35,36]。

剖檢病死綿羊可見多數羊肝臟腫大破裂，腹腔和心包積液，有凝血塊，皺胃、十二指腸及幽門出血并伴有壞死灶，膽囊腫脹，心肌變性，左內膜會有點狀出血[34]。剖檢山羊可見病死羊腹部腫脹，可視黏膜發紺，眼球外突，肛門外翻。胸腔和心包積液，心內膜有出血點，肝腫大質脆并伴有出血點，腎臟也有點狀出血，氣管出血并伴有泡沫。肺淤血呈現暗紅色。皺胃充血腫脹并伴有出血，小腸臌氣，黏膜充血出血、脫落、壞死，呈現“紅腸樣”[37]。

3 腐敗梭菌的實驗室診斷

病畜死后由腸道侵入其他部位，注意區別診斷。對惡性水腫，水腫液或組織直接涂片鏡檢無多大診斷意義；對羊快疫，肝臟被膜觸片染色鏡檢，若發現長絲狀細菌，則具有診斷價值，確診需要做細菌的分離鑒定[2]。

3.1 腐敗梭菌的分離培養、鏡檢與生化鑒定

無菌操作取心、血、肝、脾、腸系膜淋巴結等臟器接種于厭氣肉肝湯，37℃培養24h，厭氣肉肝湯中可產生氣體[38]；將病料接種于葡萄糖鮮血瓊脂平板，37℃厭氧培養48h，形成灰白色或半透明、邊緣不整微微隆起的菌落形態[28]，革蘭氏染色鏡檢可見革蘭氏陽性，兩端鈍圓，單在或者2～3 個相連的粗大桿菌同時還可發現無關節長絲狀菌體[39,40]。生化鑒定可以發酵葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、麥芽糖、水楊素、甘露糖，不發酵蔗糖，可液化明膠[28]。

3.2 腐敗梭菌觸片檢查

無菌取病畜肝臟，用病畜肝臟制作被膜觸片，除見到兩端鈍圓、單個或短鏈狀的粗大菌體外，還可以觀察到無關節的長絲狀菌體鏈，其他臟器也可以觀察到病原[41]。

3.3 腐敗梭菌的PCR 鑒定

腐敗梭菌的α 毒素（溶血素）基因，有270bp 片段在24種細菌溶血素中無同源性（包括親緣關系很近的氣腫疽梭菌和其他梭菌），可以用PCR 快速做出準確診斷，這是腐敗梭菌于氣腫疽梭菌鑒別診斷的唯一鑒別方法[2]，所以獲得病料模板進行PCR 擴增α 毒素的特異性序列可以快速診斷和鑒定腐敗梭菌[42]。李生慶等人建立了一種基于α 毒素的PCR 診斷[43]；彭小兵等人成功建立二重PCR 方法鑒別氣腫疽梭菌和腐敗梭菌[44]。

3.4 腐敗梭菌動物實驗

將分離病原菌對豚鼠進行肌肉感染可見注射部位肌肉呈現鮮紅色，有大量血色水腫液并產生許多氣泡。參見附圖。

4 腐敗梭菌的防治

4.1 腐敗梭菌病的預防

（1）落實好疫苗接種工作[45]。免疫接種是預防該病的最為有效方法之一，目前國內主要是用羊快疫、黑疫二聯滅活苗、羊快疫、猝疽、羊腸毒血癥三聯滅活疫苗、羊梭菌病多聯干粉滅活苗等[46]，或者羊快疫、羊猝狙、羊腸毒血癥、羔羊痢疾、黑疫五聯苗[45]。

（2）加強飼養管理[47,48]。禁喂冰冷食物，減少胃腸刺激引發此病[48]。適時添加精料，提高機體免疫力。加強環境衛生清掃，按時消毒殺菌[49]。

（3）發現病死羊時及時無害化處理病死羊，嚴禁剝皮利用，對健康動物進行隔離[50,51]。監測羊群體溫并及時隔離體溫異常羊只[52]。

（4）注意易感羊群的緊急防控。同群中的易感羊只要做好緊急接種疫苗[53]。

4.2 腐敗梭菌病的治療

（1）抗菌。對病程稍長的病羊可以進行抗生素治療[48]。可選用磺胺類、青霉素、頭孢類抗生素（頭孢唑啉、頭孢呋辛鈉、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢拉定和頭孢哌酮）等藥物進行治療[49]。

（2）補充體液。強心、補液、補堿，緩解代謝性酸中毒。可選用糖鹽水和5%碳酸氫鈉混合靜脈注射，20%石灰乳內服[54]。

（3）血清治療。可選用羊速清、頭孢和干擾素3 者混用[48]。

（4）中藥預防。金銀花20g，連翹20g，淡豆豉15g，桔梗15g，荊芥15g，竹葉20g，薄荷10g，牛蒡子15g，蘆根30g，甘草5g，水煎取汁，內服[51]。

5 小結和展望

腐敗梭菌病屬于常發性疾病，危害較大，常造成家畜死亡，嚴重危害養殖戶的經濟利益。本文統計了國內近10 多年的發病報道，就腐敗梭菌的生物學特性、致病性、臨床癥狀及剖檢癥狀，實驗室診斷方法及防治等方面進行淺析，對腐敗梭菌病有了一個較為系統的認識。目前國內大多使用聯苗，所用培養基復雜，中國獸藥監察所所制培養基可以簡化工藝成本，取得較好效果，而在國外已經有α 類毒素疫苗出現[54]。針對腐敗梭菌的研究，國內還未得到應有的重視，青海畜牧獸醫研究所對腐敗梭菌的PCR 鑒定、培養、產毒等方面進行了研究，中國獸醫藥品監察所對腐敗梭菌在PCR 鑒定、血清學分型、疫苗及α 毒素分子克隆等方面進行了較為深入的研究，河北師范大學對腐敗梭菌α 毒素基因克隆及表達也有研究[55-60]。但針對腐敗梭菌病檢測的快速檢測方法尚未開發，ELISA 試劑盒及膠體金試劑條等快速檢測診斷方法也急需建立。