液相-質譜串聯法檢測安神補心丸中H1抗組胺藥與鎮靜催眠藥分析

河南省駐馬店

市食品藥品檢驗所（463000）葉英劍 李啟彬 劉園園

安神補心丸是對心血不足、虛火內擾所引發的頭暈耳鳴、心悸失眠進行治療的常用中成藥丸劑，其可發揮有效的養心安神作用。有不法分子為獲取高額利潤，開始應用第一代H1受體拮抗劑非法加入到安神補心丸中，由于氯苯那敏的購買成本低，因此成為主要的加入藥物[1]。馬來酸氯苯那敏也被稱之為撲爾敏，其不僅可拮抗H1受體從而達到抗過敏功效，同時還可對中樞神經起到一定抑制作用，由此會導致困倦等不良反應[2]。本次研究應用快速液相-質譜串聯儀開展一級質譜掃描，取高響應色譜峰經由氣相-質譜庫開展檢索，對其包含的成分進行確認，與對照品溶液與供試品溶液進行比較，探討液相-質譜串聯法檢測安神補心丸中H1抗組胺藥與鎮靜催眠藥的效果。

1 材料與方法

1.1 研究材料 研究所應用的儀器設備包括Super Sminon5830 Tmpsen快速液相色譜-質譜串聯儀，Super Sminon8255N氣相色譜-質譜儀，上海諾威科設備有限公司生產的DHK單槽式超聲波清洗儀，廣州愛華精密儀器有限公司生產的分析天平。研究所應用的試劑包括去離子水、乙腈（色譜純），其余試劑為分析純，生產廠家為江蘇諾美化學試劑廠。由中國藥品生物制品檢定所取得地西泮對照品（批號172157-2 0 1 8 6 4）、艾司唑侖對照品（批號186059-201820）、氯硝西泮對照品（批號172281-201836）以及馬來酸氯苯那敏對照品（批號193346-201844）。安神補心丸分別購自六個廠家，分別為蘭州佛慈制藥股份有限公司（批號：H2006847）、上海和黃藥業（批號：H20036541）、廣州藍天制藥有限責任公司（批號：H20096651）、江蘇美林制藥集團（批號：H20084785）、山西安繼堂制藥有限公司（批號：H20125645）、北京天倫制藥（批號：H20080032）。全部藥物均從藥店隨機購買。

1.2 研究方法 快速液相色譜所應用的色譜柱為ZORBAX MED-C18色譜柱，選用乙酸銨溶液與乙腈混合液作為流動相，二者之間的比例為50∶50，體積流量控制為每分鐘0.3mL，進樣量控制為10μL，柱溫為室溫。串聯質譜所應用的干燥氣流量控制為每分鐘10L，溫度控制為325℃；霧化氣壓力控制為20psi，鞘流氣流量控制為每分鐘10L，溫度控制為400℃，毛細管電壓為4000v。一級質譜實施50～1000m/z范圍全掃描。具體掃描條件如附表。

在進行混合對照品溶液配制時，分別選取地西泮、艾司唑侖、氯硝西泮對照品，加入流動相，將其進行溶解搖勻，然后使其濃度保持為5ng/mL。在對供試品溶液進行配制時，采用不同廠家生產的安神補心丸各3丸，將藥物放入研磨中碾碎，然后放入到量瓶中，量瓶容積為100mL，加入60mL流動相，放置在渦旋機上開展5min渦旋，渦旋完成后放入到超聲機中進行5min超聲處理，冷卻后采用流動相加入至刻度，搖勻后過濾。

干擾試驗的開展方法，通過將對照品溶液、供試品溶液進行混合后，各進樣10μL，供試品色譜中全部未出現和混合對照品中所具備的對照品色譜保留時間一致的色譜峰。但有一批號的供試品溶液在接受一級質譜掃描時，掃描圖像中有未知成分色譜峰出現，且其具備較高的響應度，如附圖。通過在氣相色譜-質譜庫中進行檢索，同時應用標準物質開展確證，結果顯示最高峰物質為氯苯那敏。

附表 串聯質譜工作條件

附圖 出現高響應度未知成分色譜峰的供試品溶液的快速液相-質譜總離子流圖

氣相色譜-質譜檢查：所選用的毛細管柱型號為DHK-5kk型，長度為28m，內徑為0.25mm，固定液膜厚度確定為0.22μm，體積流量控制為每分鐘1.0mL。將進樣口的溫度進行調整，使其保持在280℃，接口的溫度保持在250℃。離子源、四級桿的溫度分別為245℃以及170℃，電子能量控制在80eV；在開展檢查的過程中，初始溫度設置為45℃，然后每分鐘將溫度升高10℃，直至其達到225℃，維持時間總共為16min，進樣量控制在1μL。

在對供試品溶液進行配置時，配置方法為采集液相色譜-串聯質譜檢測出的未知成分峰樣品3丸，將藥物放入研磨中碾碎，然后放入到量瓶中，量瓶容積為100mL，加入60mL甲醇，放置在渦旋機上開展5min渦旋，渦旋完成后放入到超聲機中進行5min超聲處理，冷卻后采用流動相加入至刻度，搖勻后過濾。在對對照品溶液進行配置時，采用馬來酸氯苯那敏對照品，放入到量瓶中，然后向量瓶中加入甲醇使馬來酸氯苯那敏對照品被溶解，將其配置成濃度為60μg/mL的溶液。

2 結果和討論

有資料報道稱，中成藥成分和輔料的種類較多，因此為了將其他成分和輔料對待檢測物質檢測結果造成的干擾降低，就需要應用有機溶劑開展多步萃取提取[3]。但對于部分制劑而言，其所具備的成分已經十分復雜，同時質譜串聯儀所具備的敏感性極高，因此若開展多步萃取提取，則會導致出現數量眾多的有機溶劑峰，從而干擾檢測工作的順利開展，使儀器的損耗程度加重，導致實驗的過程變得更為繁瑣，需耗費更長的試驗時間[4]。而對儀器檢測是否能夠成功造成影響的主要因素為前處理工作是否有效，本研究通過將液質串聯掃描和氣質聯合應用，從而有效確定目標可測物，降低了供試品溶液的配置難度。

通過本次的研究可知，部分廠家生產的安神補心丸中出現了非法摻偽的情況，通過對NIST譜庫開展檢索，結果顯示所摻雜的物質為氯苯那敏。通過對對照品溶液中氯苯那敏峰和供試品溶液中相應峰的碎片所具備的質量數和豐度開展比較，結果顯示供試品溶液中馬來酸氯苯那敏具備較高的含量，通過開展計算可知，每丸藥物中的馬來酸氯苯那敏含量達到1.92mg。此外，通過本次研究結果可知，在部分中成藥物中，有H1抗組胺類藥物被摻雜其中，同時摻雜量較高，其屬于不法分子為獲取利益而為之。因此為保障用藥安全，就需要對中成藥物中化學藥品的添加情況開展更大力度的檢測工作，從而使中成藥物中的違法添加化學藥品被有效檢出。建議《中國藥典》等相關規章制度中，需要對中成藥物中化學藥品的添加種類、添加量進行明確規定和限制，由此保障中成藥物在發揮應有藥用價值的同時，用藥安全性也可得到保證。

綜上所述，液相-質譜串聯法可有效檢測安神補心丸中H1抗組胺藥與鎮靜催眠藥加入量。