填飼方法和性別對(duì)填飼后朗德鵝血清生化指標(biāo)的影響

楊云周,王惠影,王 翠,劉 毅,龔紹明,程國(guó)華,何大乾?

(1 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,上海201106;2 江西省撫州市南豐縣畜牧獸醫(yī)局,撫州344500)

養(yǎng)鵝生產(chǎn)中通常采用填飼方法生產(chǎn)鵝肥肝,在填飼過程中,朗德鵝肝臟脂肪代謝活動(dòng)顯著增加[1],血液生化指標(biāo)發(fā)生劇烈的變化,如血脂等含量急劇增加[2-3],而肝臟本身卻極少發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷[4]。 由于填飼期間血液生化指標(biāo)變化模式與人類脂肪肝具有相似性,家鵝也被視為一種潛在的研究人類脂肪肝的動(dòng)物模型。 脂肪肝及相關(guān)疾病已經(jīng)成為人類健康的一個(gè)重大威脅[5],研究鵝肝超強(qiáng)的脂肪變性耐受能力機(jī)制,特別是肝重(脂肪沉積程度)與易檢血液生化指標(biāo)的關(guān)系,可以為人類脂肪肝研究提供啟示。 血液生化指標(biāo)的變化可以反應(yīng)肝臟生理狀態(tài)或病變程度,同時(shí)也是研究肝臟抵抗重度脂肪變性能力的重要間接指標(biāo),在人類醫(yī)學(xué)中通過測(cè)定某些血液生化指標(biāo)反應(yīng)肝臟功能早已成為常規(guī)診療手段。 目前,影響填飼后朗德鵝血清生化指標(biāo)的因素還未見報(bào)道。 本試驗(yàn)研究填飼方法和性別對(duì)其血清生化指標(biāo)的影響,以期找到合適的血清生化指標(biāo)用于朗德鵝種群的肥肝生產(chǎn)性能選育。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選擇260 只70 日齡朗德鵝進(jìn)行填飼試驗(yàn),所有鵝只隨機(jī)分為機(jī)械組和手動(dòng)組,每組兩名工人,各填飼130 只鵝。 機(jī)械組采用氣泵機(jī)填飼,根據(jù)鵝體重設(shè)定填飼料量;手動(dòng)組采用傳統(tǒng)螺旋進(jìn)料機(jī),由熟練工人在填飼過程中自行決定填飼料量。 填飼料主要成分為煮熟的玉米,同時(shí)添加油脂、食鹽、益生菌等添加劑。 機(jī)械組填飼粉碎玉米,而手動(dòng)組填飼整粒玉米。 填飼前3 d 為預(yù)飼期,所有鵝只可自由飲水和采食,填飼期間根據(jù)鵝只健康狀態(tài)和體重增長(zhǎng)等因素調(diào)整填飼料量和填飼周期,填飼結(jié)束后所有個(gè)體集中屠宰并收集血液制備血清,血清置于-25 ℃冰箱保存。 胴體冷卻后取出完整肝臟,測(cè)定肝質(zhì)量(下稱肝重),剔除血肝個(gè)體。

1.2 性別鑒定

利用性染色體基因CHD1 的長(zhǎng)度特異性進(jìn)行性別鑒定,引物(Forward:5’-TGCAGAAGCAATATTACAAGT-3’,Reverse:5’-AATTCATTATCATCTGGTGG-3’)在家鵝Z 染色體上的擴(kuò)增長(zhǎng)度為466 bp,而在W 染色體上擴(kuò)增長(zhǎng)度為326 bp,因此公鵝(ZZ)擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖膠電泳圖上只顯示一條帶,而母鵝(ZW)同時(shí)顯示兩條帶[6],可據(jù)此判斷公母。

1.3 血清生化指標(biāo)測(cè)定方法

AST(天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶)、ALT(丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶)、TBIL(總膽紅素)、DBIL(直接膽紅素)和TBA(總膽酸)等指標(biāo)采用比色法測(cè)定,GLU(血液葡萄糖)和VLDL(極低密度脂蛋白)含量采用放免法測(cè)定。 比色法所用試劑盒和儀器型廠商分別為中生北控股份有限公司及深圳邁瑞B(yǎng)S-420 全自動(dòng)生化儀,放免法所用儀器為西安核儀器廠XH-6020 全自動(dòng)放免儀,測(cè)定工作均在北京華英生物技術(shù)研究所完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用R 語言中t檢驗(yàn)函數(shù)分析不同分組組間表型差異及顯著性水平,采用psych 包中corr.test 函數(shù)計(jì)算Pearson 相關(guān)系數(shù)及顯著性水平以分析血清生化指標(biāo)與肥肝重的相關(guān)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 填飼方法對(duì)填飼后朗德鵝血清生化指標(biāo)的影響

填飼試驗(yàn)結(jié)束后淘汰體重過低及死亡的個(gè)體,手動(dòng)組91 只和機(jī)械組118 只朗德鵝可以用于后續(xù)數(shù)據(jù)分析。 由表1 可見,不同填飼方法的朗德鵝血清生化指標(biāo)間存在顯著差異。 機(jī)械組的朗德鵝肝重、AST、ALT、TBIL、DBIL、VLDL 顯著或極顯著高于手動(dòng)組,TBA 極顯著低于手動(dòng)組。 GLU 含量在組間無顯著差異,機(jī)械組稍高于手動(dòng)組。

表1 填飼方法對(duì)朗德鵝血清生化指標(biāo)的影響Table 1 Effects of overfeeding methods on serum biochemical indexes of Lande geese

2.2 性別對(duì)朗德鵝血清生化指標(biāo)的影響

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別鑒定結(jié)果顯示,手動(dòng)組31 只母鵝、60 只公鵝,機(jī)械組60 只公鵝、58 只母鵝。 由表2 可見,手動(dòng)組內(nèi)僅VLDL 在性別間存在顯著差異,表現(xiàn)為母鵝顯著高于公鵝,其他指標(biāo)無顯著差異;機(jī)械組內(nèi)性別間所有測(cè)定指標(biāo)均無顯著差異。

表2 性別對(duì)朗德鵝血清生化指標(biāo)的影響Table 2 Effects of gender on serum biochemical indexes of Lande geese

2.3 朗德鵝血清生化指標(biāo)與肝重的相關(guān)性分析

所測(cè)定的7 項(xiàng)指標(biāo)中有4 項(xiàng)(AST、ALT、GLU 和VLDL)已見諸報(bào)道[2-3],因此,本研究?jī)H分析新測(cè)定的膽紅素(BIL)和總膽酸(TBA)與肝重的相關(guān)性。 由表3 可見,雖然填飼方法不同,但TBIL、DBIL 以及TBA均與填飼后鵝肥肝重呈顯著正相關(guān),其中DBIL 與鵝肥肝重相關(guān)系數(shù)最高,在手動(dòng)組及機(jī)械組中分別達(dá)到0.46 和0.36。

表3 朗德鵝血清生化指標(biāo)與鵝肥肝重的相關(guān)性Table 3 Correlation between fatty liver weight and serum biochemical indexes of Lande geese

3 討論

朗德鵝從國(guó)外引進(jìn)后同樣面臨“引種-退化-再引種-再退化”的窘境[7],倘若能夠利用分子或生化標(biāo)記開展選育工作,可以延緩引進(jìn)種群的性能退化,為企業(yè)增加效益。 血清生化指標(biāo)作為反應(yīng)肝臟功能的間接指標(biāo),其自身也是一項(xiàng)十分重要的表型性狀,研究影響血清生化指標(biāo)的因素,及其與鵝肥肝重的相關(guān)性,能為后續(xù)開展鵝肥肝生產(chǎn)及朗德鵝選育工作提供幫助。 本試驗(yàn)測(cè)定了TBIL、DBIL 和TBA 等多項(xiàng)生化指標(biāo),并分析了填飼方法和性別對(duì)這些指標(biāo)的影響,及其與鵝肥肝重的相關(guān)性。

隨著國(guó)內(nèi)鵝肥肝產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展,填飼方法也在不斷改進(jìn)。 相較于傳統(tǒng)填飼方法,自動(dòng)化填飼使用粉碎玉米,理論上更有助于鵝消化日糧,吸收更多能量,從而產(chǎn)生更大的鵝肥肝。 本試驗(yàn)表明,機(jī)械組平均鵝肥肝重顯著高于手動(dòng)組,且機(jī)械組VLDL 水平極顯著高于手動(dòng)組,相應(yīng)地,機(jī)械組中具有抗氧化作用的膽紅素和轉(zhuǎn)氨酶水平也顯著高于手動(dòng)組,膽紅素和轉(zhuǎn)氨酶水平的升高意味著鵝肝臟損傷在急劇增加,同時(shí)也表明鵝肝臟在蓄積大量脂肪的同時(shí)啟動(dòng)了自我保護(hù)機(jī)制以抵抗肝損傷。 較早的研究表明,性別對(duì)填飼后鵝肝重沒有顯著影響,公鵝僅稍高于母鵝,原因之一是公母鵝體重差別并不顯著[8],而體重是影響鵝肥肝重最重要的表型指標(biāo)。 在本試驗(yàn)中,性別對(duì)肝重亦無顯著影響,但手動(dòng)組中母鵝VLDL 水平極顯著高于公鵝,表明填飼期內(nèi)母鵝肝臟分泌轉(zhuǎn)運(yùn)出更多脂肪,這可能是手動(dòng)組中母鵝肝重低于公鵝的一個(gè)原因。 相反,在機(jī)械組中,公鵝VLDL 水平更高,其平均鵝肥肝重則低于母鵝,這也再次表明群體內(nèi)對(duì)于合成脂肪的分布模式是影響鵝肥肝重的一個(gè)重要原因[9]。

研究填飼后鵝血清生化指標(biāo)的重要意義之一是希望找到與鵝肥肝重具有顯著相關(guān)的指標(biāo),并將其作為一個(gè)表型性狀用于鵝肥肝高產(chǎn)個(gè)體的選擇[2]。 本試驗(yàn)中新測(cè)定的膽紅素和總膽酸均與鵝肥肝呈顯著正相關(guān),都是潛在的可用于選種工作的生化標(biāo)記。

綜上,填飼方法是影響鵝肥肝重及血清生化指標(biāo)的重要因素,血清生化指標(biāo)中的直接和間接膽紅素以及總膽酸等3 項(xiàng)生化指標(biāo)可以作為生化標(biāo)記用于肥肝高產(chǎn)個(gè)體的選擇。