rhGH對肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護及修復(fù)作用

黃恒

【摘 要】目的：探討重組人生長激素（rhGH）對肝臟缺血再灌注損傷的保護和修復(fù)作用。方法：SD大鼠分為空白對照組50只，實驗組50只和對照組50只。實驗組皮下注射rhGH，對照組給予等量生理鹽水。Pringie‘s法建立100種肝臟缺血再灌注損傷模型，檢測不同時間點各組AST、ALT、TNF-α水平。結(jié)果：兩組在每個時間點的ALT和AST均逐漸升高（P<0.05），但在rhGH組，同期的ALT和AST指標較對照組明顯降低（P<0.05）。rhGH組在6h和3/4h之間的TNF-a水平具有顯著差異。對照組6h，3/4h和1h之間的TNF-a水平比較具有差異性。結(jié)論：rhGH對肝缺血再灌注損傷具有保護和修復(fù)作用，可促進肝缺血再灌注損傷，促進線粒體功能恢復(fù)，改善肝細胞能量代謝。rhGH可通過降低細胞因子TNF-α的水平來保護肝臟缺血/再灌注損傷。

【關(guān)鍵詞】重組人生長激素;大鼠;缺血再灌注損傷

【中圖分類號】R575【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）10-30--02

1 材料與方法

1.1 實驗動物

雄性健康SD大鼠，重200-250g，術(shù)前禁食12h但不禁水。

1.2 實驗試劑

重組人生長激素（rhGH）、腫瘤壞死因子（TNF）、人白細胞介素-1（IL-1）、酒精等。

1.3 方法

1.3.1 建立SD大鼠模型

實驗動物在手術(shù)前禁食12小時，自由飲水，麻醉后腹膜內(nèi)注射戊巴比妥鈉（30mg/Kg），上腹部中切開，并切開腹壁各層暴露第一肝門部，暴露肝十二指腸韌帶。用Pringl‘s法用精細無損傷血管夾肝蒂，阻斷門靜脈、肝動脈和膽總管，使肝臟缺血，30分鐘后取下血管鉗以恢復(fù)肝臟血液供應(yīng)，然后關(guān)閉腹部。

1.3.2 實驗設(shè)計

1.3.2.1 動物分組

建立150只SD大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型，實驗組50只，對照組50只。另50只作空白對照。

1.3.2.2 注藥

模型建成當天實驗組按0.2uI/100g給予rhGH皮下注射，共7天，對照組分別給予等量的生理鹽水作安慰試劑。

1.3.2.3 取材

分別于術(shù)后第1天、第7天、第14天、第28天四個時點，取腹腔靜脈血檢驗，同時每只SD大鼠肝組織分3份，1份用10%福爾馬林固定;1份用2.5%戊二醛固定;1份用錫箔紙包裹置于液氮中保存。每一時點如有死亡動物，均給予補齊。

1.3.2.4 石蠟標本處理

常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，如4微米厚切片、HE染色、常規(guī)封片，在顯微鏡下經(jīng)病理醫(yī)師觀察。

1.3.3 血清檢測

各組大鼠分別于肝臟再灌注后第l天、第7天、第14天、第28天經(jīng)下腔靜脈抽血5ml，血樣離心，取上清液置于-70℃冰箱保存待后備測。

1.3.3.1 肝功酶學(xué)

用全自動生化分析儀測ALT、AST。

1.3.3.2 TNF-a

該測試使用雙抗體夾心ABC-EUSA方法。酶標板上涂有抗人TNF-a單克隆抗體，將標準品和樣品TNF-a與單克隆抗體結(jié)合，加入生物素華抗人TNF-a形成與板連接的免疫復(fù)合物，辣根過氧化物酶標記將鏈霉親和素與生物素結(jié)合，添加酶底物OPD，出現(xiàn)黃色，添加終止溶液硫酸，顏色變深，在492nm處測得OD值，TNF-α濃度與OD值成正比，并且可以畫一條標準曲線來找出標本中TNF-a的濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均值±標準偏差（x±s）。使用t檢驗進行組間平均值的成對比較，使用q檢驗進行組內(nèi)平均值的成對比較。所有數(shù)據(jù)均使用SPSS13.0軟件在計算機上完成。取P<0.05，表示差異具有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 肝功酶學(xué)

用自動生化分析儀測量ALT和AST。隨著SD大鼠再灌注時間的延長（ld，7d，14d，28d），rhGH組和對照組的ALT和AST逐漸降低。與該組各時間點比較，差異有顯著性（P<0.05），說明SD大鼠肝再灌注早期發(fā)生肝細胞損傷，隨再灌注時間減少。ld和28d在不同時間段，rhGH組和對照組在同一時期之間無顯著差異（P>0.05），而在7d和14d之間有顯著差異（P<0.05）。見表1表2.

2.2 腫瘤壞死因子TNF-a水平

正常SD大鼠血清TNF-a水平為11.39±3.54IU/L。從實驗中可看出，無論是rhGH組還是對照組，SD大鼠血清TNF-a在此時均明顯升高。肝臟再灌注1d，并隨著再灌注時間持續(xù)減少。兩組在不同時間點的比較：手術(shù)后ld，14d，28d，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;術(shù)后7d差異最大（P<0.01）。不管rhGH組還是對照組術(shù)后14d和28d，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。其余時間點有顯著差異（P<0.05）。術(shù)后14d、28d大鼠血清TNF水平已接近正常無進一步下降，見表3.

3 討論

研究表明，hGH對肝臟具有保護作用，rhGH主要具有間接促進生長和直接促進代謝的兩種生理功能。rhGH促進肝細胞增殖的確切機制尚不完全清楚，可以通過以下機制完成：（1）rhGH促進HGF信使核糖核酸（mRNA）合成及表達，而HGF是己知最強烈的促肝細胞分裂原;（2）促進胰島素樣生長因子I（IGF-I）合成。rhGH與肝細胞膜上受體結(jié)合后促進肝臟合成IGF-I，rhGH大部分生理作用均由IGF-I介導(dǎo)，稱rhGH-IGF軸，IGF能促進肝HGFmRNA及肝細胞DNA合成;（3）rhGH能促進胰島素樣生長因一子結(jié)合蛋白一3（IGFBP-3）合成，后者與結(jié)合后能延長在血漿中的半衰期，進一步提高促增殖活性。

參考文獻

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