G蛋白耦聯雌激素受體GPER在肝臟缺血再灌注損傷中的表達及調控機制研究

秦勇 王超君 徐勝前 潘德標 王世

【摘 要】目的：探究G蛋白耦聯雌激素受體GPER在肝臟缺血再灌注損傷中的表達及調控機制研究。方法：選取2-3月齡成年雄性SD大鼠30只（體重約350±20g）構建大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型，分為假手術組（PO組）、肝缺血再灌注組（IR組）及雌激素預處理+肝缺血再灌注組（IRE組）各10只。采用按體重經腹腔給予17-β雌二醇4mg/kg于造模前1小時處理大鼠，造模36h后，比較分析在肝臟缺血再灌注損傷中，G蛋白耦聯雌激素受體GPER的表達和調控機制。結果：與對照組相比，術后轉氨酶明顯較低，差異有統計學意義（P<0.05）、炎癥因子TNF-α及IL-6水平下調，此外，GPER的表達在模型組中顯著下調，雌激素預處理上調GPER的表達水平。結論：在肝臟缺血再灌注損傷中采用雌激素預處理改善大鼠肝功能，提高G蛋白耦聯雌激素受體GPER的表達，降低TNF-α及IL-10水平，減輕肝臟缺血再灌注損傷，安全有效，具有臨床應用價值。

【關鍵詞】肝臟缺血再灌注損傷;調控機制;G蛋白耦聯雌激素受體GPER

【中圖分類號】R843【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）10-30--02

在大腦中雌激素發揮關鍵性作用，能夠調節痛覺和情緒，以及突觸可塑性和認知功能，大多經雌激素核受體ERβ和ERα介導調控[1]，雌激素也能經膜結合雌激素受體，如出現慢性疼痛和情緒障礙等，大腦的神經系統功能受G蛋白耦聯雌激素受體（GPR30）介導[2]。另外，也有研究表明雌激素在腸缺血[3]、腦缺血[4]以及腎臟缺血[5]的過程中具有顯著的保護作用。然而，雌激素在缺血再灌注損傷中發揮的作用及受體相關機制仍不清楚。在本研究中，我們構建了大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型并使用雌激素預處理，檢測了轉氨酶活性及炎癥因子TNF-α及IL-6水平，并探討了GPER的表達變化。旨在闡明G蛋白耦聯雌激素受體GPER在肝臟缺血再灌注損傷中的表達及調控機制。

1 資料與方法

1.1 選取2-3月齡性成熟的成年雄性SD大鼠30只（體重約350±20g），分為假手術組（PO組）、肝缺血再灌注組（IR組）及雌激素預處理+肝缺血再灌注組（IRE組）各10只。各組缺血再灌注后36h后各隨機選取5只存活大鼠，經心臟穿刺采血檢測血清ALT、LDH、TNF-α及IL-6水平，并于肝中葉的相同部位取肝組織樣本檢測GPER的mRNA表達。

1.2 方法

術前12h禁食，腹腔內注射1%戊巴比妥鈉溶液30mg/kg麻醉，上腹部正中切口開腹，斷離肝周韌帶后分離肝門部脈管，以無創傷小血管夾夾閉左外及中葉的肝動脈、門靜脈造成70%肝臟缺血，45min后重新開放血供并切除未阻斷血供的30%肝葉，造成肝切除肝缺血再灌注模型。雌激素處理組于造模前1小時按體重經腹腔給予17-β雌二醇4mg/kg，其余兩組則于術前1小時經腹腔給予同等容積的生理鹽水。術后36 h收集血液及組織樣本進行相關檢測。

1.3 觀察指標：采用生化檢測試劑盒 （南京建成）檢測AST及ALT活性，ELISA試劑盒（南京建成）檢測NF-α及IL-6水平。采用熒光定量PCR檢測GPER的表達;根據GPER在基因數據庫的序列信息，設計合成PCR引物：GPER-F：TCTAAACTGCGGTCAGATGTGGCT; GPER-R：TTTCCTGGTCGACGGTGTCAGAAA。抽提總RNA，采用Takara公司的cDNA Reverse Transcription Kit 逆轉錄合成cDNA。采用Takara公司SYBR Green PCR MIX試劑盒及ABI 7300 Real time PCR系統擴增檢測。計算用內參標準化的CT值并進行mRNA表達分析。

1.4 統計學處理：選擇SPSS 23.0統計學軟件實施數據分析，用均數±標準差（M±SD）代表計量資料，選擇t檢驗檢測兩組間情況，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

雌二醇處理組與未處理組術后肝功能比較：采用按體重經腹腔給予17-β雌二醇4mg/kg于造模前1小時處理大鼠，與對照組相比，術后轉氨酶明顯較低，差異有統計學意義（P<0.05）。此外，炎癥因子TNF-α及IL-6的表達水平在模型組中顯著上調，并被雌激素預處理顯著抑制（P<0.05），見表1。另外，GPER的mRNA表達在模型組中顯著下調（36.67%，相較于P0組），但被雌激素預處理顯著上調（78.49%，相較于P0組）（P<0.05）。

3 討論

此次研究中，采用按體重于造模前1小時經腹腔給予17-β雌二醇4mg/kg處理大鼠，與假手術組相比，術后轉氨酶活性及炎癥因子的表達明顯較低。同時qRT-PCR的結果發現，GPER的表達在模型組中顯著下調，然而這一現象被雌激素預處理顯著改善。綜上所述，在肝臟缺血再灌注損傷中采用雌激素處理，能夠顯著改善大鼠的肝功能、降低炎癥因子TNF-α及IL-6水平、刺激雌激素受體表達，減輕肝臟缺血再灌注損傷，安全有效，具有臨床應用價值。

參考文獻

胡軍， 馮華. 雌激素腦保護研究進展[C].中華醫學會神經外科學分會學術會議. 2010.

張雪姣， 季暉， 唐蘇蘇，等. 雌激素受體在中樞神經系統疾病中的作用[J]. 藥學研究， 2018， 37（04）：39-43.

柴世權. G蛋白偶聯雌激素受體（GPER）在小腸缺血再灌注損傷中的保護作用及其機制[D]. 2018.

韓子偉， 朱立倉， 常越辰，等. 雌激素受體GPER通過抑制內質網應激減輕腦缺血再灌注損傷[J]. 生理學報， 2019， 071（004）：527-536.