DJ-1在前列腺癌中的表達(dá)及其與新輔助內(nèi)分泌治療療效的關(guān)系分析

韋高猛， 唐毓金 ， 黃勇平

(右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科， 廣西 百色 533000)

前列腺癌是男性最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率較高，嚴(yán)重威脅男性生命健康及生活質(zhì)量。既往研究顯示[1]，前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展與眾多因素相關(guān)，如遺傳因素、性活動(dòng)、飲食結(jié)構(gòu)等。一般而言，前列腺癌在早期無明顯典型癥狀體征，此后隨著腫瘤的不斷發(fā)展，前列腺癌主要表現(xiàn)為尿流緩慢、排尿不盡且費(fèi)力、尿頻尿急甚至尿失禁等。自新輔助內(nèi)分泌治療方法問世以來，前列腺癌的治療從既往單一治療手段發(fā)展成了目前多種治療方式相結(jié)合的治療策略[2]。近些年，新輔助內(nèi)分泌治療方式對于降低腫瘤切緣陽性率及前列腺特異抗原(prostate specific antigen，PSA)水平的作用得到了醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可[3]。因此，尋找輔助臨床診斷的分子標(biāo)志物，對監(jiān)測患者病情、制定合理的治療方案及改善預(yù)后顯得至關(guān)重要。近年來越來越多的學(xué)者報(bào)道，DJ-1在多種腫瘤中高表達(dá)，且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[4]。基于此，本研究探討了DJ-1在前列腺癌中的表達(dá)及其與新輔助內(nèi)分泌治療療效的關(guān)系，旨在探討DJ-1在前列腺癌中的表達(dá)規(guī)律及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1研究對象:收集本院2015年1月至2016年4月穿刺確診為前列腺癌患者的癌組織、同例患者的癌旁3cm新鮮組織對應(yīng)蠟塊98例，其中新輔助內(nèi)分泌治療前后的標(biāo)本全部來自于穿刺活檢組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者入組前未接受其他癌癥相關(guān)治療；臨床和病理資料清晰、完整；排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重心、肝、肺功能不全或其他惡性腫瘤患者；伴自身免疫性疾病者。本組病例年齡51～70歲，平均年齡(63.57±10.15)歲，腫瘤TNM分期為Ⅱ期63例，Ⅲ期35例。另選取同期50～70歲的98例病理檢查為良性的前列腺增生患者的前列腺增生組織對應(yīng)蠟塊。所有患者已簽署知情同意書，本研究經(jīng)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方 法

1.2.1免疫組化技術(shù)檢測DJ-1:蠟塊組織以4μm為標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)切片，烤片、脫蠟、梯度酒精水化，3% H2O2(10min)去除內(nèi)源性過氧化物酶，微波抗原修復(fù)，PBS沖洗后加DJ-1一抗，室溫孵育3h，沖洗后加入增強(qiáng)液反應(yīng)20min，PBS沖洗，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫孵育30min，沖洗后DAB顯色，蘇木素復(fù)染，PBS液返藍(lán)，梯度酒精脫水后吹干，中性樹膠封片。以PBS液代替一抗作為陰性對照。DJ-1兔抗人單克隆抗體購于英國abcam公司。

1.2.2新輔助內(nèi)分泌治療方法:前列腺癌患者均在根治術(shù)前行3個(gè)月標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)分泌治療：諾雷得(英國AstraZeneca UK Limited，國藥準(zhǔn)字J20160052，3.6mg/支)，腹前壁皮下注射，3.6mg/次，每28d注射1次。康士得(德國CORDEN PHARMA GMBH，國藥準(zhǔn)字J20150050，50mg*28片)，口服，50mg/次，每天1次。連續(xù)治療3個(gè)月。

1.3免疫組化結(jié)果判定:染色結(jié)果采用半定量積分法分析[5]：DJ-1蛋白的表達(dá)主要位于細(xì)胞漿，少部分位于胞核，陽性染色的標(biāo)準(zhǔn)為胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。染色強(qiáng)度計(jì)分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞百分比計(jì)分：0～10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。髙倍鏡下，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野至少含有200個(gè)細(xì)胞，以染色強(qiáng)度與平均陽性細(xì)胞百分比之乘積作為最后得分：0分為陰性(-)，1～3分為弱陽性(+)，4～6分為中度陽性(++)，7分及以上為強(qiáng)陽性(+++)。

1.4臨床療效判定標(biāo)準(zhǔn):參照實(shí)體瘤療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評定前列腺癌患者經(jīng)新輔助內(nèi)分泌治療后3個(gè)月的臨床療效，將臨床療效劃分為4個(gè)等級：①完全緩解，腫瘤持續(xù)1個(gè)月完全消失；②部分緩解，腫瘤持續(xù)1個(gè)月體積縮小50%及以上，且無其他病變擴(kuò)展；③穩(wěn)定，腫瘤體積縮小不足50%，增大不超過25%；④進(jìn)展，腫瘤體積增大超過25%。治療有效率=(完全緩解+部分緩解)例數(shù)/總例數(shù)×100%；疾病控制率=(完全緩解+部分緩解+穩(wěn)定)例數(shù)/總例數(shù)×100%[8]。

1.5隨訪:采用門診方式隨訪，隨訪期為3年，統(tǒng)計(jì)患者生化復(fù)發(fā)時(shí)間。生化復(fù)發(fā)時(shí)間定義：從手術(shù)日期到連續(xù)兩次檢測出血清PSA水平>0.2μg/L的時(shí)間間隔。

2 結(jié) 果

2.1DJ-1在不同組織中的免疫組化染色結(jié)果:采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn)等級檢驗(yàn)比較前列腺增生組織與前列腺癌組織及前列腺癌旁組織中DJ-1蛋白表達(dá)量差異，結(jié)果顯示，前列腺增生組織的DJ-1蛋白表達(dá)量明顯低于及前列腺癌組織(Z=53.950，P=0.000)，而與癌旁組織組對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=3.012，P=0.083)；采用Willcoxon符號秩和檢驗(yàn)比較前列腺增生組織與前列腺癌組織中DJ-1蛋白表達(dá)量差異，結(jié)果顯示，癌旁組織DJ-1蛋白表達(dá)量明顯低于前列腺癌組織(Z=10.220，P=0.001)，見表1。前列腺癌、癌旁與前列腺增生組織免疫組化圖片見圖1。

表1 DJ-1蛋白在不同組織中的免疫組化染色結(jié)果(n)

圖1 前列腺癌、癌旁與前列腺增生組織免疫組化

2.2DJ-1在新輔助內(nèi)分泌治療前后的免疫組化染色結(jié)果:采用Willcoxon符號秩和檢驗(yàn)進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，DJ-1在新輔助內(nèi)分泌治療后整體陽性表達(dá)情況下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=9.115，P=0.001)。見表2。

2.3DJ-1與前列腺癌臨床病理參數(shù)及新輔助內(nèi)分泌治療療效的關(guān)系:經(jīng)比較，DJ-1陽性患者和陰性患者在年齡(χ2=0.251，P=0.616)、腫瘤直徑大小(χ2=1.274，P=0.259)等方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在Gleason分期(χ2=3.857，P=0.049)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=8.632，P=0.003)、TNM分期(χ2=10.917，P=0.001)及臨床療效(Z=6.185，P=0.013)方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表2 DJ-1蛋白在不同組織中的免疫組化染色結(jié)果(n)

表3 DJ-1與前列腺癌臨床病理參數(shù)及新輔助內(nèi)分泌治療療效的關(guān)系(n)

2.4DJ-1與前列腺癌無生化復(fù)發(fā)生存率的關(guān)系:強(qiáng)陽性(+++)組有3例患者失訪，隨訪率為96.94%。生存曲線結(jié)果顯示，DJ-1陰性(-)、弱陽性(+)、中度陽性(++)、強(qiáng)陽性(+++)組3年無生化復(fù)發(fā)生存率分別為93.33%、87.50%、74.07%、70.27%，經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，四組的3年無生化復(fù)發(fā)生存率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.426，P=0.036)。見圖2。

圖2 DJ-1與前列腺癌無生化復(fù)發(fā)生存率的關(guān)系

3 討 論

前列腺癌是指發(fā)生在前列腺的上皮性惡性腫瘤，臨床上較為常見，其發(fā)病率隨年紀(jì)增長而上升，高峰年齡是70～80歲[6]。前列腺癌不僅會給患者帶來排尿費(fèi)力，尿等待、排便困難等生理方面不適，還會給患者造成嚴(yán)重的心理負(fù)擔(dān)，影響日常的生活工作[7]。因此，尋找可用于監(jiān)測患者病情的分子標(biāo)記物，對于治療前列腺癌具有重要的積極意義[8]。有研究顯示[9]，DJ-1基因在多種腫瘤中的表達(dá)異常，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系。DJ-1基因位于染色體1P36.2-1P36.3 PARK7點(diǎn)，故又名park7基因，全長24 kb。DJ-1蛋白屬于DJ-1蛋白/ThiJ/PfpI蛋白超家族，含有189個(gè)氨基酸殘基。在有關(guān)腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究中，DJ-1被發(fā)現(xiàn)是一種致癌基因，且有證據(jù)顯示，DJ-1蛋白能夠通過負(fù)調(diào)控PTEN的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長增殖[10]。本研究對比了前列腺癌、癌旁組織及前列腺增生組織中DJ-1的表達(dá)水平后發(fā)現(xiàn)，DJ-1高表達(dá)于癌組織中，顯著高于癌旁組織及前列腺增生組織(P<0.05)；在癌旁組織及前列腺增生組織中DJ-1多呈不表達(dá)或陰性表達(dá)。上述結(jié)果提示DJ-1在前列腺癌中表達(dá)異常，可能可以作為一種標(biāo)記物用于鑒別前列腺癌。

本研究通過免疫組化的方法分析DJ-1在前列腺癌新輔助內(nèi)分泌治療前后組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示，經(jīng)新輔助內(nèi)分泌治療后，DJ-1陽性表達(dá)情況明顯下降(P<0.05)。諾雷得是一種合成的、促黃體生成素釋放激素的類似物，能夠抑制腦垂體促黃體生成素的分泌，使得男性血淸睪丸酮水平降低；康士得是一種非甾體類抗雄激素藥物，能夠與雄激素受體競爭性結(jié)合，而不激活基因表達(dá)，從而抑制雄激素的刺激，二者聯(lián)合使用，有效抑制了腫瘤生長。治療后，DJ-1在癌組織中表達(dá)下調(diào)，證實(shí)了新輔助內(nèi)分泌治對前列腺癌組織的作用，且進(jìn)一步探討DJ-1與新輔助內(nèi)分泌治療療效的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，DJ-1陽性患者和陰性患者的臨床療效情況差異顯著(P<0.05)，提示DJ-1與臨床療效相關(guān)，其可能成為反映前列腺癌病情變化的一種潛在標(biāo)志物。此外，本研究結(jié)果顯示，DJ-1陽性患者和陰性患者在腫瘤分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期方面差異顯著(P<0.05)，腫瘤分化程度越高、TNM分期越晚或有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，DJ-1的陽性表達(dá)越高。提示DJ-1可能參與了前列腺癌的發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移等環(huán)節(jié)的調(diào)控，其表達(dá)情況與前列腺癌患者的腫瘤進(jìn)展程度呈正相關(guān)關(guān)系。對比DJ-1陰性(-)、弱陽性(+)、中度陽性(++)及強(qiáng)陽性(+++)組3年無生化復(fù)發(fā)生存率發(fā)現(xiàn)，隨著DJ-1表達(dá)的增強(qiáng)，其3年無生化復(fù)發(fā)生存率隨之降低，提示DJ-1可以用來預(yù)測前列腺癌生化復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，前列腺癌組織中DJ-1的表達(dá)明顯高于癌旁組織及前列腺增生組織，且與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及3年無生化復(fù)發(fā)生存率相關(guān)，經(jīng)新輔助內(nèi)分泌治療后，DJ-1的表達(dá)明顯下調(diào)，提示DJ-1對于患者預(yù)后有一定預(yù)測價(jià)值。然而本組研究例數(shù)較少，隨訪時(shí)間較短，僅探討了兩組無生化復(fù)發(fā)生存率之間的差異，關(guān)于DJ-1能否作為患者預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)，尚需要更多的深入研究。