下調垂體瘤轉化基因1對膠質瘤細胞SHG44血管生成擬態及細胞周期的影響

崔立山 林 婷 張健莉 馮三平 曹 洋 曹 穎 吳德龍 蘇 砍 劉金鳳

1.廈門市第五醫院神經外科，福建廈門 361101；2.廈門大學醫學院基礎醫學部，福建廈門 361102；3.廈門市第五醫院神經內科，福建廈門 361101；4.廈門市中醫院藥劑科，福建廈門 361101

神經膠質細胞瘤約占原發性腦腫瘤的70%，且惡性腫瘤居多[1-3]。垂體瘤轉化基因1（pituitary tumor-transforming gene，PTTG1）是一種常見致癌基因在多種腫瘤細胞中高表達，如結腸癌SW480，肝癌HepG2、Huh7，乳腺癌MCF-7以及卵巢癌SKOV3等[4-9]，然而其對膠質瘤以及膠質瘤細胞血管生成擬態和細胞周期的影響未見報道。

本研究使用PTTG1 siRNA轉染SHG44細胞沉默PTTG1基因，研究PTTG1表達降低對惡性膠質瘤細胞血管生成擬態和細胞周期的影響，同時探究PTTG1調控細胞周期的可能機制，從而為膠質瘤的臨床治療提供新的思路。

1 材料及方法

1.1 一般材料

SHG44細胞株（廈門大學眼科所饋贈）；胰蛋白酶、胎牛血清、DMEM高（美國賽默飛世爾公司）；PTTG1 siRNA、陰性對照siRNA及轉染試劑（中國銳博生物科技有限公司）；逆轉錄試劑盒（瑞士羅氏公司）；Trizol（美國賽默飛世爾公司）；SYBR Premix Ex TaqII（寶日醫生物技術有限公司）；BCA蛋白定量試劑盒（美國賽默飛世爾公司）；PVDF膜（美國賽默飛世爾公司）；羊抗鼠二抗、羊抗兔二抗（杭州聯科生物技術股份有限公司）；過硫酸銨（AP）、30%聚丙烯酰胺凝膠、牛血清清蛋白（BSA，中國索萊寶公司）；蛋白抗體（美國賽默飛世爾公司）；ECL化學發光法檢測試劑盒（中國索萊寶公司）；基質膠基底膜基質（美國康寧公司）；PI細胞周期檢測試劑盒（美國西格瑪公司）。

1.2 儀器

T-Gradient梯 度 PCR 儀（德 國 Biometra公司）；7300型熒光實時定量PCR儀（美國ABI公司）；PowerPac Bio-rad電 泳 系 統（美 國 伯 樂 公司）；……