光激化學發光與電化學發光分析法測定兒童TSH相關性評價

周敬靜 張 倩 樊 茂

（昆明醫科大學附屬兒童醫院，云南昆明 650228）

光激化學發光測定技術（LiCA）是以納米級高分子微粒為基礎的新一代化學發光技術[1-2]。其優勢為快捷及充分地實施免疫反應；反應期間不需要清理及分離未有集合的樣本與試劑，減小反應的系統誤差，提高免疫系統的魯棒性；過程實現相對穩定，不會由于周圍環境中的酸堿度及環境溫度變化、離子強度等影響而發生轉變。電化學發光（ECL）是一種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，由電啟動發光反應循環多次發光技術[3]。兩者均達到國際第3代促甲狀腺激素（TSH）的檢測水準。甲狀腺疾病是兒童內分泌疾病中最常見的一類，而TSH是診斷亞臨床甲狀腺功能亢進和甲狀腺功能減退、臨床甲狀腺功能亢進和原發性甲狀腺功能減退首選指標。美國臨床生化學院（NACB）提出以TSH檢測為中心的策略評估甲狀腺功能。本研究以昆明市兒童醫院內分泌科就診的122例甲狀腺功能紊亂患兒為研究對象，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取昆明市兒童醫院2017年1月至12月內分泌科就診的甲狀腺功能紊亂（包括甲狀腺功能減退癥和甲狀腺功能亢進癥）的患兒122例作為研究對象。甲狀腺功能減退癥診斷標準為：血清四碘甲狀腺后氨酸（T4）、三碘甲狀腺原氨酸（T3）水平降低，TSH＞20 mU/L；甲狀腺功能亢進癥診斷標準為：血清T4、T3水平升高，TSH＜0.02 mU/L。根據TSH檢測結果分為低值組12例（0.004～0.410 mU/L），中 值 組62例（含 參 考 區 間0.410～7.000 mU/L），高值組48例（7.000～60.000 mU/L）。低值組中男性患兒4例，女性患兒8例；年齡2～14歲，平均年齡（7.4±1.3）歲。中值組中男性患兒29例，女性患兒33例；年齡3～13歲，平均年齡（7.0±1.2）歲。高值組中男性患兒27例，女性患兒21例；年齡2～15歲，平均年齡（7.5±1.4）歲。三組患兒一般資料比較差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經昆明市兒童醫院醫學倫理委員會批準。納入標準：①所有患兒均符合《中國甲狀腺疾病診治指南》[4]中的診斷標準；②患兒存在多汗、體重下降、焦慮及注意力不集中等癥狀；③實驗室檢查顯示，血清T4、T3水平降低，TSH＞20 mU/L或血清T4、T3水平升高，TSH＜0.02 mU/L等；④所有患兒及其家長均對本研究知情，并簽署知情同意書。排除標準：①服用激素類藥物者；②有持續應激性反應者；③手術注射造影劑者。

1.2 方法

清晨空腹采集肝素抗凝血樣3 mL，確保采血程序規范，無溶血、脂血、血凝塊樣本。分析儀器采用Roche Cobas E602全自動電化學發光免疫分析儀（瑞士羅氏公司，型號：Roche Cobas E602），配套封閉試劑（檢測試劑、校準品、質控品），科美生物ChemclinLiCA500自動光激化學發光檢測儀，配套試劑分別進行TSH檢測。樣本分析全過程嚴格按照SOP進行。

1.3 統計學分析

采用統計學SPSS 20.0軟件進行數據處理分析。計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，相關性分析采用Kappa檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患兒不同TSH濃度區間兩種方法（LiCA、ECL）比較

兩種檢測方法在低值組、中值組和高值組間比較差異均無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患兒不同TSH濃度區間兩種方法（LiCA、ECL）比較（±s，mU/L）

表1 兩組患兒不同TSH濃度區間兩種方法（LiCA、ECL）比較（±s，mU/L）

組別 n Roche E602 ChemclinLiCA500 P低值組 12 0.153±0.130 0.148±0.150 0.323中值組 62 3.000±1.470 3.400±1.510 0.076高值組 48 24.490±11.680 25.620±12.910 0.167

2.2 兩種方法（LiCA、ECL）間TSH檢測一致性評價

低值組符合率為83.33%（10/12），中值組符合率為92.59%（50/54），高值組符合率為82.14%（46/56），總符合率為86.89%（106/122，Kappa=0.783），見表2。

表2 兩種方法（LiCA、ECL）間TSH檢測一致性評價

3 討論

TSH是兒童甲狀腺疾病診斷的核心指標，其指標的高低對甲狀腺疾病的確診、分型及后續的用藥方案均有決定性的影響，因此，TSH在甲狀腺功能檢測中具有特殊價值。但不同的甲狀腺相關疾病TSH檢測數值呈現的大幅級差的特性，對TSH檢測方法的線性范圍和低值、高值的檢測準確度提出很高的要求[5]。本研究結果顯示，LiCA和ECL 兩種檢測方法按不同濃度區間（低值、中值、高值）進行比較，差異均無統計學意義，且具有良好的一致性，說明LiCA的TSH檢測性能與ECL相當。

光激化學技術最早由20世紀末美國公司提出，國內最開始的光激化學發光免疫檢測技術是由上海博陽企業完成。LiCA技術采用納米顆粒，增加生物分子包被面積，并借助于鏈霉親和素—生物素放大系統，提高檢測靈敏度、減少樣本和試劑用量，實現自動化操作。納米結合顆粒穩定的懸浮于檢測體系，具有均相、結合效率高、反應速度快、檢測速度快[6]等優點。

甲狀腺素對于兒童的生長及發育尤為關鍵，其可以促使細胞及組織等的成長與發育，并進一步推動鈣、磷等物質合成轉變為骨骼，促進軟骨等的生長，以及維系肌肉、消化系統以及循環系統等的正常運行。兒童甲狀腺一旦出現問題，必然會影響兒童的生長發育。對甲狀腺疾病的治療秉持早發現、早治療的原則，尤其先天性甲狀腺分泌不足的患兒，需要終身服藥，并對患兒進行周期性跟蹤隨訪。新生兒一旦發現甲狀腺不足情況，應當立即開展T4治療干預，并盡可能的恢復其甲狀腺功能。整個干預的時間及治療，取決于個體的神經系統后遺癥情況。暫時性甲狀腺分泌不足患兒，通常在堅持1～2年的科學治療后，即可得到一定的恢復。目前常用的治療藥物為左甲狀腺素（LT4）。但治療過程中需注意以下幾點：①切忌食用大豆等鐵含量高的食物；②干預治療7 d后需要對FT4水平進行核查，以保證血清內游離甲狀腺素（FT4）上升速率控制在合理范圍內；③干預14 d后，需要對T4水平進行再次核查，保證連續30 d的TSH含量均處于合理范圍內；④實際使用的LT4用量應當結合血清內的FT4、TSH臨床數據及表癥等進行適當的調整。干預治療的前72 h，血清實際T4及FT4應當處于正常區間的較高水平上；神經垂體素的作用會進一步延緩血清的TSH恢復能力，從而使得患兒血清中的T4水平始終位于正常及偏高的狀態，而TSH位于增高情況。針對該類型患兒，實際給藥劑量應當結合其血清內的T4水平來判斷。治療期間需要進一步加強對藥物的管控，短時間內可能存在甲狀腺功能亢進情況，90～180 d后可能存在骨質疏松、顱縫提早閉合及骨齡超前等情況。為確保患兒健康成長，需要適當補充營養、鈣劑等。

ECL因其獨特的技術、完善的反應體系、封閉的試劑結構及較高的軟硬件技術支持，在內分泌激素檢測領域獨樹一幟，并在醫學檢驗領域取得良好的口碑[7]。但其缺點是價格高、設備貴、運營壓力大。而LiCA已經完成技術轉化，儀器和試劑均已國產化并應用到多種生物分子的測定，包括酶活性、抗原分子、蛋白質、多肽、糖類等[8]。其在保證兒童TSH檢測的準確性同時，還具備檢測成本低、項目運營壓力小的特點。

綜上所述，國產LiCA兒童TSH檢測結果與進口ECL檢測性能相近，檢測結果符合率高，有很好的相關性，且LiCA有均相、免清洗、測定速度快和試劑成本較低等優點，適合應用于兒童TSH的檢測中。