乙肝五項血清標志物、PreS1抗原和HBV-DNA聯合檢測在老年乙型肝炎患者診療中的應用價值研究

馮變瑩，穆迪，黃平，周浩，羅菲，姚祖德，滿秋紅

同濟大學附屬上海市第四人民醫院檢驗科，上海200081

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）具有高感染率和高攜帶率，而HBV 所致的乙型肝炎已經成為全球公共衛生難題[1]。流行病學調查資料顯示，我國作為乙肝大國，人群感染率約為60%～70%，病毒攜帶者將近1.3 億，且每年因乙型肝炎相關疾病死亡的人數接近30 萬，而我國目前人口老齡化進程逐步加快，老年肝炎患者的絕對數也呈逐步增多的趨勢，老年肝炎患者中81.48%為病毒性肝炎，其中乙型肝炎患者約占58.36%[2-4]。HBV 是引起重型肝炎和肝癌的常見誘因[5]，病毒的持續復制又是其致病的根本原因。老年乙型肝炎患者由于自身免疫功能低下，基礎疾病較多，轉變成重癥肝炎和肝癌的危險性會更大[6-7]。因此，對老年乙型肝炎進行及時的診斷、治療和預防工作勢在必行。

乙肝五項血清標志物（HBV-M）的檢測技術已經成為診斷乙肝的經典方法，但其對于HBV 的復制、轉歸及預后評估卻有一定的局限性。近年來，由于熒光定量PCR 技術的迅猛發展，HBV-DNA 檢測能準確反映HBV 在體內病毒復制量的變化，是反映HBV 病毒復制最直接和最可靠的指標，在臨床診療及預后評估中發揮著不可忽視的作用[8]。另有研究表明[9]，Pre-S1 抗原檢測能夠更早地反映乙型肝炎病毒的感染及復制情況，是評估HBV 感染、復制及治療和預后的新型標志物。本文回顧性的分析不同年齡段老年乙型肝炎患者的Pre-S1 抗原定量檢測、HBV-DNA 檢測及乙肝五項血清標志物檢測結果之間的相關性，旨在尋求乙型肝炎臨床診治的最佳聯合檢測方案，為老年乙型肝炎的早診早治提供依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017年8月—2019年12月于上海市第四人民醫院門診及住院治療的210 例老年乙型肝炎患者的臨床資料。其中男性112 例，女性98例，年齡為60～95 歲，平均年齡為（74.3±8.9）歲。

1.2 分組 將乙肝五項血清標志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 和HBcAb 分別采用①、②、③、④和⑤表示。210 例老年乙型肝炎患者分為5 組：①＋③＋⑤陽性組（n=50）；①＋④＋⑤陽性組（=116）116例；①＋③陽性組（=15）；①＋④陽性組（=10）；①＋⑤陽性組（=19）。上述5 組老年患者均依照3 個年齡段（60～69 歲、70～79 歲、≥80 歲）進行不同年齡段分層研究。

1.3 評估指標（1）HBV-DNA 定量檢測與評估標準：HBV-DNA＜1×102IU/mL 時為陰性；HBV-DNA≥1×102IU/mL 時為陽性，濃度越高表明患者體內HBV病毒復制越活躍，傳染性越強。（2）PreS1 抗原定量檢測與評估標準：PreS1 抗原定量檢測值＜1.0S/CO時，視為HBV PreS1 抗原檢測陰性；PreS1 抗原定量檢測值≥1.0 S/CO 時，視為HBV PreS1 抗原檢測陽性。

1.4 檢測方法

1.4.1 樣本的收集和處理 患者入院后次日清晨抽取空腹外周靜脈血5 mL 于2 個促凝管中，4 000 r/min 離心5 min 后，吸取上層血清分別用于乙肝五項血清標志物檢測、PreS1 抗原定量檢測和HBV-DNA 定量檢測。

1.4.2 檢測方法（1）乙肝五項檢測：使用HISCL500全自動化學發光免疫分析儀，采用化學發光法，試劑由廈門萬泰凱瑞生物技術有限公司提供。（2）PreS1抗原定量檢測：使用Caris200 全自動化學發光免疫分析儀，采用化學發光法，試劑由廈門萬泰凱瑞生物技術有限公司提供。（3）HBV-DNA 定量檢測：使用ABI7500 熒光定量PCR 儀，采用熒光定量PCR 法，試劑由上海之江生物科技股份有限公司提供。由具有資質專業人員嚴格按照標準化操作規程文件進行操作，完成乙肝五項、PreS1 抗原和HBV-DNA 定量檢測。

1.5 統計學分析 數據采用統計學軟件SPSS25.0 進行統計學分析。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s），采用 檢驗；計數資料以例數和百分率表示，采用檢驗；采用線性相關分析，配對卡方檢驗進行相關性分析，相關系數用表示。＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乙肝五項血清標志物（HBV-M）不同組合模式下老年乙型肝炎患者Pre-S1 抗原定量分析情況 各組老年乙型肝炎患者PreS1 抗原定量檢測結果均與年齡呈負相關（R2=0.95、0.93、0.97、0.95、0.98）；各組相同年齡階層老年乙型肝炎患者Pre-S1 抗原定量比較，①＋③＋⑤陽性組Pre-S1 抗原定量結果要高于①＋④＋⑤陽性組、①＋④陽性組和①＋⑤陽性組（t=6.32、7.88、3.23、5.23、6.32、4.08、6.45、5.46、3.59，＜0.05）。①＋③＋⑤陽性組與①＋③陽性組Pre-S1 抗原定量結果相比較，結果差異無統計學意義（t=1.164、1.135、1.432，＞0.05）。見表1。

2.2 HBV-M 不同組合模式下老年乙型肝炎患者HBVDNA 陽性率和Pre-S1 抗原陽性率表達情況 各組相同年齡階層老年乙型肝炎患者HBV-DNA 的陽性率（=244.09、94.23、180.2，＜0.05）和Pre-S1 的陽性率（=250.475、128.9、207.4，＜0.05）比較，結果差異有統計學意義；各組不同年齡階層老年乙型肝炎患者HBV-DNA 和Pre-S1 的陽性率比較，①＋④陽性組HBV-DNA 和Pre-S1 的陽性率均無顯著性差異（=7.22、1.67，＞0.05），①＋③＋⑤陽性組、①＋④＋⑤陽性組、①＋③陽性組、①＋⑤陽性組中HBVDNA 的陽性率（=50.08、232、142.86、25.44，＜0.05）和Pre-S1 的陽性率（=100、175.64、142.86、14.6，＜0.05），結果差異有統計學意義。見表2。

2.3 HBeAg與Pre-S1 在老年乙型肝炎患者中相關性分析 相同年齡階層中老年乙型肝炎患者HBeAg 陽性組中Pre-S1 的陽性率顯著高于HBeAg陰性組（=23.05、11.13、12.12，＜0.05），相關系數r 依次為0.40、0.31、0.14，表明二者之間具有一定相關性。見表3。

2.4 HBV-DNA 檢測與Pre-S1 檢測在老年乙型肝炎患者中相關性分析 相同年齡階層中老年乙型肝炎患者HBV-DNA 核酸檢測陽性組中Pre-S1 的陽性率顯著高于HBV-DNA 陰性組（=9.38、11.13、23.05＜0.05），相關系數r 依次為0.32、0.14、0.15，表明二者之間具有一定相關性。見表4。

表1 HBV-M 不同組合模式下老年乙型肝炎患者Pre-S1 抗原定量分析

表2 HBV-M 不同組合模式下老年乙型肝炎患者HBV-DNA及Pre-S1 抗原陽性率表達情況

3 討論

乙型肝炎是由HBV 引起的一種常見的傳染性疾病，呈全球分布，慢化程度高，并且該類病毒會導致人群患有乙型肝炎、肝硬化以及肝細胞癌等一系列肝臟系統的疾病，嚴重威脅和干擾生命健康和生活質量[10-11]。臨床常規乙型肝炎五項血清標志物檢測，只能單純表明患者已被乙型肝炎病毒所感染，并不能反映出乙型肝炎病毒在患者體內的實際復制情況[12]。HBV-DNA 為HBV 脫氧核糖核酸，也是病毒核心的部分，為判斷病毒復制的金標準。HBV-DNA 包含了4 個開放讀碼區（S 區、X 區、C 區及P 區），S 區編碼HBsAg、PreS1 蛋白及PreS2 蛋白，三者共同構成HBV的外膜蛋白。PreS1 蛋白可介導病毒黏附肝細胞，與病毒組裝、分泌及傳染性關系密切[13]。HBV-DNA和PreS1 抗原聯合檢測已經成為評估HBV 感染、復制及臨床對乙型肝炎患者診斷、治療和預后的一項重要指標[14-16]。本文回顧性的分析了210 例老年乙型肝炎患者3 個不同年齡階段乙肝五項血清標志物、PreS1抗原定量檢測及HBV-DNA 的檢測情況及它們之間的相關性，旨在尋求最佳的聯合檢測方案為能臨床診療提供及時可靠的檢測數據。

本文通過對210 例不同年齡階段的老年肝炎患者PreS1 抗原定量檢測結果分析發現，隨著年齡的增長Pre-S1 抗原定量結果在減少。乙型肝炎老年患者乙肝五項不同組合模式中，HBeAg 陽性Pre-S1 抗原定量檢測結果明顯高于陰性組，這表明HBV 病毒復制活躍程度與年齡、HBeAg 抗原表達情況以及乙肝五項血清標志物不同組合模式有關。HBeAg 抗原的表達是評估HBV病毒在宿主體內復制和傳染程度的主要指標，結果陽性的患者說明乙肝病毒的復制程度及傳染性均較高，而HBeAb 抗體表達陽性時，可表明病毒復制及傳染性均降低[17]。本文中HBeAg 陽性時Pre-S1 抗原的陽性表達率高于HBeAg 陰性組，說明HBeAg 轉陰時或HBeAb 產生時，Pre-S1 抗原的表達水平也會下降，由此可見Pre-S1 抗原定量檢測結果與HBeAg表達情況具有一定的相關性，在一定程度上Pre-S1 能夠反映病毒復制情況。也有研究結果表明[18-19]，HBeAg與Pre-S1 抗原同時呈陽性表達時，HBV-DNA 核酸檢測呈高拷貝復制。本文的結果分析發現，HBV-DNA定量檢測陽性時Pre-S1 抗原的陽性率高于HBV-DNA陰性組，說明Pre-S1 與HBV-DNA 具有一定的相關性與文獻相符。Pre-S1 抗原定量檢測能夠彌補因其他原因如病毒檢查的準確率低而造成的假陰性結果，并且PreS1 抗原定量檢測往往出現在病毒感染的最早期，可以用于疾病的早期診斷和預后評估，極大地降低乙型肝炎的傳染性[20]。因此，乙肝五項血清標志物檢測能夠反映機體感染HBV 后的免疫狀態，但無法明確其感染的確切狀態，HBV-DNA 定量檢測，能夠精準地反映病毒復制情況，但因其需要特殊儀器及具備PCR 資質的實驗室方可開展，基層醫院難以普及。Pre-S1 抗原定量檢測既可反映HBV 復制的情況，又可彌補由于病毒變異等原因造成的HBeAg 無法被檢出而影響診斷的情況，但當其基因序列變異時，仍可造成假陰性的結果[1,18]。

綜上所述，乙肝五項血清標志物、HBV-DNA 定量檢測以及Pre-S1 抗原定量聯合檢測在不同年齡階段的老年乙型肝炎患者具有一定的相關性，因此，三者聯合檢測，能夠更早、更精準的反映機體HBV 病毒的感染水平，復制程度及傳染性，對老年乙型肝炎患者的臨床診療和預后評估具有一定的指導意義。

表3 HBeAg 與Pre-S1 在老年乙型肝炎患者中相關性分析

表4 HBV-DNA 檢測與Pre-S1 檢測在老年乙型肝炎患者中相關性分析