骨不連患者外周血miRNA 的表達及其臨床意義

孔超 陳石玉 羅建光 王煒 戚春潮

（寧波市鎮海區人民醫院骨科 浙江 寧波 315202）

隨著國內外生物信息學的迅猛發展，miRNA 作為分子生物與生物信息學領域中的新秀，被迅速應用在各類疾病的基礎研究、診治與新型藥品開發等領域[1]。多種miRNA 被證實與骨折愈合有密切關聯[2]。但目前國內外均將研究重點放在局部組織活檢，而無創的早期檢測手段仍然欠缺。因此，迫切需要一種無創快捷的檢測方法輔助診斷骨不連，提高患者的早期臨床干預率，減少骨不連的發生發展。基于此，本研究為了進一步分析骨不連患者外周血miRNA 的表達及其臨床意義，就寧波第七醫院各15 例健康人組、按期愈合組、骨不連組患者的病歷資料展開對比分析，報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

依據隨機對照雙盲實驗設計標準，收集我院2015 年6 月—2018 年1 月30 例骨折患者，按骨折愈合程度分為按期愈合組和骨不連組兩組，每組各15 例。選擇同期健康體檢人員15 名作為健康人組。健康人組：體檢中心采血標本，排除骨與軟組織損傷患者、器質性疾病患者、腫瘤及內分泌代謝疾病患者，其中男8 例，女7 例，年齡19 ～54 歲，平均（36.3±10.5）歲。按期愈合組：取骨科脛腓骨中下1/3 骨折，符合手術指征并經切開復位內固定手術治療，術后3 月X 線骨折按期愈合患者；排除腦外傷患者、骨延遲愈合患者（骨折愈合時間≥3 月且≤8 月）、合并器質性疾病或腫瘤、全身內分泌代謝疾病患者，其中男9 例，女6 例，年齡19 ～52 歲，平均（36.1±10.6）歲。骨不連組：取骨科脛腓骨中下1/3 骨折，符合手術指征并經切開復位內固定手術治療，而術后3 月患者骨折未愈合，且延長觀察期至8 個月仍未愈合患者；排除腦外傷患者、骨延遲愈合患者（骨折愈合時間≥3 月且≤8 月）、合并器質性疾病或腫瘤、全身內分泌代謝疾病患者，其中男8 例，女7例，年齡19 ～53 歲，平均（36.4±10.4）歲。按期愈合組、骨不連組患者均經X 線、CT 進行確診。三組受試者的性別、年齡對比，均P ＞0.05。三組受試者均對研究內容知曉，并簽署知情同意書。

1.2 方法

分別提取三組受試者的外周血sRNA 并進行RT-PCR 檢測。健康人組采體檢中心體檢血，按期愈合組、骨不連組患者采傷時血及術后3 天、10 天、1 月、3 月、5 月、8 月血。標本液氮冷藏轉運，及時Trizol 法提取總sRNA，RT-PCR 法檢測8 種目標miRNA 表達量，包括miR-140、-654-5p、-378、-29、-203、-221、-9、-30b。

1.3 觀察指標

對比三組受試者各時段的外周血miRNA 檢測結果。

1.4 統計學方法

2.結果

按期愈合組與骨不連組患者傷時的8 種目標miRNA 表達量與健康人組對比，均差異顯著（P ＜0.05）。按期愈合組與骨不連組傷時、術后3 天、10 天的8 種目標miRNA 表達量對比，均P ＞0.05。骨不連組患者術后1 月、3 月、5 月、8 月miR-140、-654-5p 表達量明顯高于同時段按期愈合組，均差異顯著（P ＜0.05）；而骨不連組患者術后1 月、3 月、5 月、8 月miR-378、-29、-203、-221、-9、30b 表達量顯著低于同時段按期愈合組（均P ＜0.05），見表1。

表1 三組受試者各時段的外周血miRNA 檢測結果對比

3.討論

骨不連是一種嚴重的骨折并發癥，在四肢長骨骨折中的發生率高達5%～10%[3]。骨不連一旦發生，常規保守治療通常無法治愈，多需通過再次手術結合內固定治療。骨不連臨床缺乏有效手段進行預測，其為社會帶來極大的經濟損失及醫療資源消耗。通過對骨不連早期預測進行研究，篩選早期觀測指標，開發早期監測產品，將有助于骨不連的早期診斷，使臨床治療具有更好的針對性及敏感性，預防骨不連的發生或持續進展，并進一步減少醫療資源浪費[4-5]。

本研究結果顯示，按期愈合組與骨不連組患者傷時的外周血miRNA 表達量與健康人組對比存在明顯差異，提示脛腓骨中下1/3 骨折會導致miRNA 的異常表達；研究結果還顯示，按期愈合組與骨不連患者術后1、3、5、8 個月的miRNA 表達量存在明顯差異，骨不連組miR-140、-654-5p 存在高表達，而miR-378、-29、-203、-221、-9、30b 呈現低表達，由此提示，骨不連會導致外周血多種miRNA 的異常表達，且術后1 月即可發現與正常骨折愈合患者的差異性表達，我們推斷這8 種目標miRNA 作為多種蛋白的上游調控因子，可抑制或促進骨折愈合的兩個重要過程：成骨及血管生成，從而影響骨折的愈合。

綜上所述，骨不連患者外周血miRNA 存在異常表達，臨床檢測外周血miRNA 分子標志物可為骨不連早期診斷提供參考依據，從而早期利用各種手段干預骨不連的進展，在提高骨折延遲愈合患者的預后方面具有重要意義。