不同枇杷花提取液抗氧化能力研究

（福建農林大學生命科學學院，福州市，350002） 盧慶錚

枇杷是薔薇科枇杷屬植物，主要分布在福建、江蘇、廣東、浙江等地區。枇杷的花期較長，每個花絮上的花較多，最多的花絮上的花超過200 朵[1]，為了減少過剩枇杷花對營養的消耗，提高枇杷的產量和質量，在生產過程中會對枇杷進行大量的疏花處理，枇杷花具有豐富的氨基酸、黃酮類、酚類、三萜類物質，具有清肺潤喉、提神養氣、化痰止咳等功效[2]。目前已有大量關于枇杷花的相關研究，主要集中在枇杷花生物活性成分[3]、功能性成分[4，5]和枇杷花的開發利用[6]等方面，關于枇杷花抗氧化活性方面的研究，閆永芳等[7]通過采用DPPH、FRAP ABTS 和福林酚（F-C）方法測定了枇杷花酚類化合物的抗氧化活性；蘆艷等[8]通過ABTS、硫酸鋁比色法、普魯士藍法、F-C法等對不同花期醇提物的抗氧化活性進行研究。目前尚未有枇杷花不同提取液抗氧化能力研究的相關報道，因此本研究利用水、70%乙醇、無水乙醇三種溶劑對枇杷花進行提取，采用DPPH 和ABTS 自由基清除能力法對提取液的抗氧化能力進行研究，以期為枇杷花的開發利用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

枇杷花，2019年10月采于福建漳州市。

1.2 試驗試劑和儀器

無水乙醇、維生素C（Vc）、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2，2-氨基-二（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）、過硫酸鉀。

電熱鼓風干燥箱（DHG-9240A，上海一恒科學儀器有限公司）；電子天平（Denver TP-214，丹佛儀器有限公司）；手提式粉碎機（HK-04A，廣州市旭朗機械設備有限公司）；紫外-可見分光光度計（T6 新世紀，北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 枇杷花提取液制備

將新鮮枇杷花置于60℃烘箱中烘干至恒重，用手提式粉碎機打成粉末（80 目），取5g 枇杷花細粉，按料液比1:10回流2h，選用水、70%乙醇、無水乙醇三種溶劑，抽濾后濃縮，加相應溶劑溶解定容至50mL（100mg/mL），用0.45um 的微孔濾膜過濾后保存于-20℃中。實驗時用相應溶劑稀釋成10mg/mL、1mg/mL、0.1mg/mL。

1.3.2 對照品溶液的制備

取Vc用水稀釋0.1mg/mL。

1.3.3 清除DPPH自由基試驗

（1）配制質量濃度為39.40μg/mL 的DPPH 自由基無水乙醇溶液；存放冰箱，30天內有效。

（2）取100uLDPPH 溶液和100uL 樣品混合，靜置30min后，于517nm波長檢測吸光度。

（3）公式：

式中：A0為DPPH自由基乙醇溶液與純水混合液的吸光度；Ai 分別表示DPPH 自由基乙醇溶液加等體積樣品測得的吸光度；每個樣品重復3次，取平均值。

表1 不同枇杷花提取液DPPH自由基清除能力

表2 不同枇杷花提取液ABTS+自由基清除能力

1.3.4 清除ABTS自由基試驗

（1）取76mgABTS和13mg過硫酸鉀，加20mL水溶解，常溫下暗室反應16h，將此溶液稀釋50 倍待用。

（2）將待測溶液和配置好的ABTS 自由基溶液等體積混合，靜置30min后，于734nm波長測其吸光度。

（3）公式：

式中：A0 為ABTS 自由基溶液與等體積純水等體積混合液的吸光度；Ai 分別表示ABTS 自由基溶液加等體積測試液；每個樣品重復3次，取平均值。

2 結果與分析

2.1 不同枇杷花提取液DPPH自由基清除能力

通過對不同枇杷花提取液的DPPH自由基清除能力進行測定，得到表1。由表1可以看出，枇杷花不同溶劑提取液均具有清除DPPH 自由基的能力。且在枇杷花提取液濃度為10mg/mL 和1mg/mL 時，清除DPPH自由基的能力為：無水乙醇提取液＞70%乙醇提取液＞水提取液；在枇杷花提取液濃度為0.1mg/mL時，清除DPPH自由基的能力為：70%乙醇提取液＞無水乙醇提取液＞水提取液。

2.2 不同枇杷花提取液ABTS自由基清除能力

通過對不同枇杷花提取液的ABTS自由基清除能力進行測定，得到表2。由表2可以看出，枇杷花不同溶劑提取液均具有清除ABTS 自由基的能力。且在枇杷花提取液濃度為10mg/mL 和1mg/mL 時，清除ABTS自由基的能力為：無水乙醇提取液＞70%乙醇提取液＞水提取液；在枇杷花提取液濃度為0.1mg/mL時，清除ABTS自由基的能力為：70%乙醇提取液＞無水乙醇提取液＞水提取液。

3 討論與結論

枇杷花中酚類、黃酮類物質都具有良好的抗氧化能力，酚類物質能夠預防癌癥、心血管疾病和神經性疾病等，黃酮類化合物具有保護血管、活化大腦、疏通微循環、預防動脈硬化等多種功能[9]，本研究的結果也表明不同枇杷花提取液均具有一定的抗氧化能力。

不同提取溶劑和不同濃度提取的枇杷花提取液抗氧化能力也不同，閆永芳等[7]的研究結果表明枇杷花提取物抗氧化能力測試中DPPH 法和ABTS法測得的實驗結果總體趨勢非常相似，這與本研究得出的結果一致。本研究結果表明在枇杷花提取濃度為 10mg/mL 和 1mg/mL 時，清除 DPPH 和 ABTS自由基的能力為：無水乙醇提取液＞70%乙醇提取液＞水提取液；在枇杷花提取液濃度為0.1mg/mL時，清除DPPH和ABTS自由基的能力為：70%乙醇提取液＞無水乙醇提取液＞水提取液。

因此，可以根據枇杷花提取物的功效作用開發出特色產品，比如枇杷花茶、枇杷花酒等等，充分利用生產中剩余的枇杷花，創造附加價值。本研究為枇杷花的開發利用提供理論依據。