液相色譜——質譜法對蔬菜水果中農藥殘留克百威進行檢測的方法探討

韓吉祥

克百威（carbofuran）別名呋喃丹，是一種氨基甲酸酯類殺蟲劑和殺線蟲劑，可用于多種作物防治土壤內及地面上的300多種害蟲和線蟲，并有縮短作物生長期、促進作物生長發(fā)育從而有效提高作物產量的作用。按中國農藥毒性分級標準，呋喃丹是高毒農藥，不能用在蔬菜和果樹上，按照國家標準，對于氨基甲酸酯類農藥殘留的測定是用液相色譜儀（配有柱后衍生裝置和熒光檢測器）進行檢測，本文采用液相色譜質譜法對克百威進行測定，對原方法進行了改良。

1. 實驗部分

1.1 主要儀器和試劑

液相色譜—串聯質譜儀：A B SCIEX 5500型旋轉蒸發(fā)儀；氨基柱：（6mL，500mg）濾膜，0.2μm；乙腈、二氯甲烷、甲醇：色譜純；甲酸：質譜純；氯化鈉：分析純。

1.2 標準品配制

標準儲備液（100μg/mL）：準確稱取標準品10mg于100mL容量瓶中，用甲醇溶解、定容。標準中間液（1μg/ mL）：移取儲備液1mL于100mL容量瓶中，用乙腈+水（3+2）溶解、定容。標準工作液：根據需要，準確吸取適量標準儲備液，用乙腈+水溶液（3+2）稀釋得到0.5ng/mL、1ng/mL、2g/mL、5ng/ mL、10ng/mL 的系列標準工作液。

1.3 樣品處理

1. 試樣制備：抽取蔬菜、水果樣品，取可食用部分切碎后放入高速攪拌機中充分打碎，制成待測樣，放入分裝袋中備用。2. 提?。喝?0g樣品與50mL乙腈混合，10000rpm下勻質2min后，濾紙過濾，濾液轉入具塞量筒中，加入5g氯化鈉，蓋上蓋子劇烈振蕩，靜置分層。準確移取10 mL上層的乙腈提取液（相當于4g樣品）于雞心瓶中，在40℃下減壓濃縮至近干，雞心瓶中殘渣待凈化。3. 凈化：（1）活化：向氨基柱中加入5mL甲醇+二氯甲烷（1+99）混合液，流出液棄去，待溶劑到達填料上層，關閉考克閥。（2）上樣：用6mL甲醇+二氯甲烷（1+99）混合液分三次洗滌待凈化的雞心瓶，洗滌液加入氨基柱，收集流出液。（3）淋洗：5mL甲醇+二氯甲烷（1+99）混合液淋洗氨基柱，流出液并入上一步的接收瓶。（4）重新溶解：35℃下將凈化液減壓濃縮至近干，用乙腈+水溶液（3+2）溶解并定容至2mL，高速渦旋后濾膜過濾上機分析。

1.4 儀器條件

色譜柱：C18柱3.5μm，100mm 2.1mm（內徑）。流動相及梯度洗脫條件見表（1）。

柱溫：40℃；進樣量：10μL；電離源模式：電噴霧離子化；正離子掃描；霧化氣：氮氣；

碰撞氣 ：9psi； 氣簾氣（Curtain Gas）：25psi；離子噴霧電壓： 5500V；干燥氣溫度：550℃DP：去簇電壓：101V；EP：入口電壓：10V。

2. 結果及討論

2.1 質譜方法的選擇

克百威以正離子掃描的方式建立質譜方法，先在Q1進行全掃描，尋找到母離子222.1，然后Q2碎裂，在Q3進行子離子全掃描以確定各組分的主要碎片離子，將靈敏度最高的兩個離子組成離子對（165.1/122.8），其中定量離子為222.1 / 165.1，定性離子為222.1 / 122.8，最后優(yōu)化CE值。CE是碰撞能，是摸索完母離子以后，子離子必須優(yōu)化的參數。找到子離子響應最好相對應的碰撞能。222.1/165.1的CE值為19；222.1/122.8的CE值為29。

2.2 色譜方法的建立

將處理好的樣品上機，以0.1%的甲酸水溶液和乙腈作為流動相，采用梯度洗脫的方式進行色譜的分離，從色譜柱流出后再進入質譜儀中進行檢測。標準品工作液用乙腈水溶液進行配制，降低了溶劑效應，避免出現雜峰，峰型也不會拖尾。同時，克百威在酸性條件下比較穩(wěn)定，所以，加入少量甲酸就保證了化合物的穩(wěn)定性。經過試驗發(fā)現，該方法的譜圖保留時間和靈敏度都比較理想。見下圖。

2.3 樣品的提取

克百威屬于氨基甲酸酯類農藥，試樣用乙腈提取，提取液經過濾、振蕩、減壓濃縮后，采用固相萃取技術，用氨基柱進行分離、凈化（樣品流出氨基柱的過程就是樣品凈化的過程，氨基柱選擇性吸附干擾雜質，而讓被測物質流出。經過凈化后的樣品更干凈），淋洗液經旋蒸減壓濃縮（使用減壓濃縮的方法，最大限度地降低被測物質的損失，保證了樣品的回收率）后復溶，復溶液過濾膜后使用液相色譜-串聯質譜儀進行檢測。外標法定量。

2.4 標準曲線及線性范圍

按照工作曲線方法配制5種不同濃度的標準溶液，按照儀器條件進行測試，結果表明，克百威的濃度在0.5-10ng/mL的范圍內呈線性關系，線性回歸方程及相關系數見下表（圖）。

2.5 重現性及回收率

分別稱取同一空白試樣（豇豆），按本方法加標測定，加標回收率為102.2%，結果見表（2）。

2.6 方法的比較

按照國家標準NY/T 761-2008，檢測氨基甲酸酯類農藥所有的方法是用液相色譜儀（配有柱后衍生裝置和熒光檢測器）進行檢測。與本方法相比，液相熒光柱后衍生需要雙路衍生，同時要用到鄰苯二甲醛和巰基乙醇等多種試劑做為衍生劑，而液相色譜質譜法所用到的只有甲醇、乙腈、二氯甲烷等實驗室常備溶劑。相對檢測器而言，質譜檢測屬于痕量分析，既能定性，又能定量，與熒光色譜檢測相比，靈敏度更高。

3. 結論

農業(yè)產業(yè)化的發(fā)展使農產品的生產越來越依賴于農藥、抗生素等外源物質。我國農產品的農藥用量居高不下，而這些物質的不合理使用必將導致農產品中的農藥殘留超標，影響消費者食用安全。目前，農藥殘留快速檢測方法種類繁多，其中液相色譜-質譜聯用是利用內噴射式和粒子流式接口技術將液相色譜和質譜聯接起來的方法。LC在分離方面非常有效，而MS允許分析物在痕量水平上進行確認。LCMS對簡單樣品具有幾乎通用的多殘留分析能力，檢測靈敏度高、選擇性好、定性定量可同時進行、結果可靠，主要用于分析熱不穩(wěn)定、分子量較大、難于用氣相色譜分析的樣品，是農藥殘留分析中很有力的一種方法，已成為對果蔬中氨基甲酸酯類農藥殘留進行檢測的主流技術之一，得到了越來越廣泛的應用。