烏拉特前旗地區沙芥總黃酮提取方法對比研究

烏仁格格 高子舒 余靖冉(河套學院，內蒙古 巴彥淖爾 015000)

0 引言

沙芥又名沙蘿卜、沙蓋，蒙名額樂森·老邦，是沙區人民喜愛的野菜之一，其根、莖、葉均可食用，風味獨特，營養保健價值高，有“沙漠人參”之稱[1]。此外沙芥也是天然的中藥、蒙藥，主要含有礦物質、糖類、維生素、氨基酸、黃酮、生物堿等化學成分[2]。沙芥的莖和幼葉富含水，幼苗時的沙芥、沙芥籽含有大量油脂，可飼養生活在沙區的野生動物，牛羊等畜類也喜食，可作為牛羊等動物春冬兩季的好飼料，同時對維護沙區生態平衡也起到了不可磨滅的作用[3]。本實驗是對巴彥淖爾市烏拉特前旗地區沙芥總黃酮的提取方法進行對比研究，確定適于提取烏前旗沙芥總黃酮的可行性方法，為烏前旗沙芥開發利用提供理論依據。

1 材料與儀器

將已清洗并自然風干的野生沙芥全草放入粉碎機至2/3 處粉碎；再過60 目篩得試樣。樣品于2017 年8 月從內蒙古巴彥淖爾市烏拉特前旗沙地采集得。電子分析天平(FA10048 型上海市安亭電子儀器廠)、旋轉蒸發儀(上海亞榮儀器有限公司)、數顯恒溫水域鍋(HH-2 國華電器有限公司)、紫外分光光度計(SP-1920UV 型上海光譜儀器有限公司)、循環水式多用真空泵(SHB-III 型鄭州長城科工貿有限公司)、各類玻璃儀器。蘆丁(合肥博美藥劑有限公司)為生化試劑，其他試劑為分析純。

2 實驗方法

2.1 標準曲線的繪制

稱取蘆丁標樣10.00mg 加入80%乙醇溶液溶解，并定容至50mL。分別精確移取0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL標準溶液于25mL 容量瓶，加入1.0mL5% NaNO2溶液，搖勻靜置8min；再加入1.0mL10% Al(NO3)3溶液，搖勻靜置8min；最后加4.0mL 2mol/L NaOH 溶液，用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中，搖勻靜置15min，備用。通過紫外分光光度計測得蘆丁標準溶液在510nm 處有最大吸收峰，將上述六份溶液于510nm下測OD 值，繪制標準曲線，得回歸方程[4]。

2.2 精密度測定試驗

精確移取蘆丁標準溶液2mL，平行六份，測其吸光度，按標準曲線方法測定蘆丁含量[4]。

2.3 加樣回收率測定試驗

準確稱取沙芥全草粉末0.5g，平行三份，分別加入適量蘆丁對照品，按2.1 中方法處理，測其OD 值，計算回收率[4]。

2.4 提取方法

2.4.1 堿提酸沉法

準確稱取1.000 g 沙芥全草粗粉加100mL 蒸餾水煮沸。邊攪拌邊緩慢加入石灰石水溶液將體系pH 調節至8～9，微沸20～30min，趁熱過濾。收集濾渣于250mL 錐形瓶中，重復上述操作，趁熱過濾。合并兩次濾液于250mL 錐形瓶中在60～70℃下用HCl 溶液調節pH 至5.0，靜置24h，抽濾。沉淀物連同濾紙放在燒杯中，加入30mL 80%乙醇溶液放置3h[5]。抽濾后將濾液濃縮，用80%乙醇定容至25mL 容量瓶中，得提取液。

2.4.2 乙醇熱回流法

準確稱取1.000g 沙芥全草粗粉加80%的乙醇30mL，在80℃溫度條件下回流提取1h，抽濾。重復本操作3 次，合并濾液蒸餾濃縮，用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中，得提取液。

2.4.3 甲醇熱回流法

操作同乙醇熱回流法，溶劑為80%的甲醇。

2.4.4 超聲波提取法

準確稱取沙芥全草粗粉1.000g 加30mL 80%的甲醇；在超聲波震蕩器中震蕩1h，抽濾[6]。濾渣重復上述步驟2 次，合并濾液，蒸餾濃縮，用80%乙醇定容至25mL 容量瓶中，得提取液。

2.4.5 熱水浸提法

準確稱取沙芥全草粗粉1.000g 于250mL 錐形瓶中，加100mL蒸餾水，在95℃溫度條件下用恒溫水浴鍋保溫浸提6h，然后加熱蒸餾濃縮，用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中，得提取液[5]。

2.5 總黃酮提取含量測定

每個方法平行提取四組，分別精密移取1mL 提取液，按照2.1 方法顯色測定OD 值，根據標準曲線計算總黃酮提取含量。

式中：C 為待測樣內總黃酮濃度(mg/mL)；V 為總體積(mL)；m 為沙芥原料質量(g)。

3 結果與分析

3.1 標準曲線繪制

以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，在波長510nm 下測定吸光度，繪制標準曲線，得線性回歸方程為：A=10.5685C-0.0024，R 值為0.9994。

3.2 精密度和加樣回收率測定試驗

精密度測定結果如表1 所示，計算得RSD 為0.79%，說明精密度良好、重復性良好。加樣回收率測定結果見表2，計算得平均回收率為98.4%，RSD 為1.11%，說明準確度良好，方法可靠。

表1 精密度測定試驗結果

表2 加樣回收率測定試驗結果

3.3 不同提取方法對沙芥全草總黃酮提取含量的影響

采用甲醇熱回流法、乙醇熱回流法、堿提酸沉法、超聲波提取法、熱水浸提法等5 種方法對沙芥全草中總黃酮進行了提取，提取效果如表3 所示。

表3 不同提取方法得沙芥全草總黃酮提取含量

由表3 中數據可知，不同提取方法提取沙芥全草總黃酮含量排序為：堿提酸沉法＞乙醇熱回流法＞超聲波提取法＞甲醇熱回流法＞熱水浸提法；且RSD 值表明重復性均良好。

五種方法中堿提酸沉法提取含量最高，能有效的提取沙芥中總黃酮，但其實驗步驟較為復雜，試劑藥品消耗量大，實驗條件苛刻且用到的溶劑具有強烈腐蝕性，實驗重復偏差相對較高，因此不適宜作為最佳提取方法。熱水浸提法具有操作簡單，溶劑易得的優點；但實驗溫度要求高，平均提取含量為3.29mg/g，與堿提酸沉法比提取含量低了16.9%，且實驗所需時間長，一般不常用于總黃酮的提取。超聲波提取法、甲醇熱回流法和乙醇熱回流法相對于堿提酸沉法來說操作簡單，實驗重復性良好；其中超聲波提取法提取時間最短，但對儀器有要求，實驗成本高；甲醇熱回流法操作與乙醇熱回流法相同，但其提取劑甲醇有一定毒性；而乙醇熱回流法提取含量較高，且還具有實驗原理易懂，使用后的乙醇可回收再利用等優點。因此提取沙芥全草總黃酮可將乙醇熱回流法作為最佳提取方法。

4 結語

結果表明：在烏拉特前旗地區沙芥總黃酮的提取方法對比實驗中，乙醇熱回流法是最佳提取方法，平均提取含量為3.58mg/g。該方法具有操作簡單，原理易懂，提取含量高，儀器簡易，用時較短，溶劑乙醇無毒無害，方便回收等優點。賈彥峰等[6]測定沙芥葉片總黃酮含量的研究得結果為；堿提酸沉法＞超聲波提取法＞乙醇(甲醇)回流提取法＞熱水浸提法，其結果與本研究有較大差異，原因可能是試樣產地、采集時間不同，賈彥峰[6]等采用的是沙芥葉片，本研究采用沙芥全草為試樣。

通過本研究可知，巴彥淖爾市烏拉特前旗地區沙芥全草中總黃酮含量較可觀，建議在今后研究中對本地區沙芥總黃酮乙醇回流提取法作進一步工藝優化以提高總黃酮的提取含量；為進一步分離、鑒定黃酮單體成分和其生物活性成分提供最優提取方案。總體來看，沙芥是一種值得去開發利用的藥用和食用植物資源。