豬血液樣品的采集技術(shù)淺談

曹立輝，朱維高，石金樸，戎英魁，張曉云，李彩虹

（1.正定縣動物疫病預(yù)防控制中心石家莊 050800；2.正定縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所石家莊 050800；3.正定縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局石家莊 050800；4.河北征宇制藥有限公司石家莊 051430；5.河北省動物專用免疫增強(qiáng)劑技術(shù)創(chuàng)新中心石家莊 051430）

養(yǎng)豬業(yè)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要的地位，目前規(guī)模養(yǎng)殖場數(shù)量在養(yǎng)豬業(yè)中的權(quán)重越來越大，養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展不僅使養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)收入增加，對人民生活的改善起到了很大作用。然而豬的疫病仍然是養(yǎng)豬業(yè)所面臨的重大挑戰(zhàn)，舊的傳染病、寄生蟲病仍然在發(fā)生流行的同時，還不斷有新的疫病產(chǎn)生和流行。為了科學(xué)有效防控豬的疫病和了解掌握疫苗抗體滴度變化，通過對動物血液樣本的采集對其進(jìn)行檢測是重要的方法。采血技術(shù)高低、采血時機(jī)、樣品制作、無菌操作等直接或間接決定了檢測結(jié)果的真實(shí)性、可靠性。血液樣品檢測不僅為下次免疫時間提供了科學(xué)依據(jù)，而且還能為病原學(xué)的檢測確診疫病提供依據(jù)。因此，需要求工作人員熟練掌握采樣工作程序和采樣操作技術(shù)。

1 采集豬血液樣品的目的

根據(jù)檢測疫病的目的不同，所需檢測血液樣本的種類也不同，常分為全血、血漿、血清三種。采集豬的血液，凝固后分離血清，可以用于豬瘟、藍(lán)耳、圓環(huán)、偽狂犬、口蹄疫等疫苗項(xiàng)目免疫后的抗體檢測。或者使用加入抗凝劑的采血管，使之成為抗凝血，用于一些豬發(fā)病后病毒性疫病、細(xì)菌病、原蟲等抗原檢測。血漿可以對非洲豬瘟進(jìn)行檢測。

2 采血方法

豬的前腔靜脈位置在兩側(cè)第一肋骨與胸骨結(jié)合處的前方凹陷處（胸前窩最低處），中大豬可選擇最低凹陷處進(jìn)針采血，豬只越小，前腔靜脈越細(xì)，采血部位應(yīng)稍微靠近胸前。

豬的采血方法通常有三種，分別是前腔靜脈采血、豬耳緣靜脈采血、豬尾根動脈采血。大中豬或者仔豬通常采用前腔靜脈采血，成年豬也可采用耳緣靜脈采血，而豬的尾根動脈采血在臨床上較少應(yīng)用。

任何采血方法的過程中保持無菌操作，避免血液樣品污染，否則影響豬的疫病和抗體檢測結(jié)果，造成誤判誤診，免疫抗體檢測不準(zhǔn)確不利于數(shù)據(jù)的分析，影響下次免疫時間的確定。

3 采血所需器械

3.1 采血管

根據(jù)采血檢測的目的不同，來決定使用什么樣的采血器材，可選用5mL、10mL 規(guī)格的一次性注射器或采血器（用于免疫、生化類檢測），需要抗凝血的可以使用加有EDTA-K2 的真空管（用于血常規(guī)、病原檢測），不加任何試劑的普通真空采血管和加有促凝劑的真空采血管（用于免疫、生化類）檢測。

3.2 采血針頭的選擇

由于豬的大小不同，前腔靜脈的深淺不同，根據(jù)豬只的大小選擇合適長短的針頭。針頭太短，達(dá)不到前腔靜脈，如果針頭太長，可能刺破前腔靜脈，都會采不到血液。成年大豬：選用配有16×50mm 針頭獸用一次性采血器；30kg 以上的中大豬，選用配有12×38mm 針頭獸用一次性采血器；10～30kg 小豬，可選用配有9×25mm 針頭獸用一次性采血器；10kg 以下乳豬，應(yīng)選擇配有9×20mm 針頭（2.5～5mL 一次性采血器所配的一種規(guī)格的針頭）。

耳緣靜脈采血：通常選用一次性使用靜脈血樣采集針（俗稱頭皮針）和真空采血管。

3.3 其他器械

豬的金屬保定器、75%酒精棉球、3%碘酒、記號筆、保溫箱、冰袋（冰凍礦泉水）等。

3.4 人員防護(hù)用品

一次性防護(hù)服、雨鞋、手套，口罩、護(hù)目鏡等。

4 豬血液樣品的采集

4.1 成年豬的采血

4.1.1 保定豬的保定是采血成功的關(guān)鍵，保定方法有很多種，成年大豬通常采用站立式的保定方法，助手在大豬正前方用豬保定器將豬上頜吊起，向前方上方用力，把豬保定器牢牢固定在豬的柵欄上以免滑脫，以豬前肢剛剛著地為標(biāo)準(zhǔn)，使豬的頭頸與水平面呈30～45°為佳，并充分暴露兩側(cè)胸前窩（圖1）。

圖1 中豬的保定

4.1.2 采血保定完成后先用碘酊由里向外對右胸前窩進(jìn)針部位進(jìn)行消毒，再用70%酒精棉球消毒，采血人員右手持一次性采血器（選用16×50mm 針頭），另一只手把右腿向外挪動，采血器針頭朝右側(cè)胸前窩最低且垂直凹底部方向進(jìn)針（圖2），一邊進(jìn)針一邊稍用力回抽注射器，采血人員覺有負(fù)壓感，直到前腔靜脈血液流入注射器，則標(biāo)志已刺入血管，然后輕輕抽動注射器內(nèi)芯，一般采集5mL 血液即可。取出注射器，按壓止血，用碘酒消毒后，去掉豬保定器，解除保定。

圖2 中豬的采血部位

4.2 中大豬的采血

4.2.1 保定中大豬采血可采用站立式保定，方法同大豬保定方法相同。也可采用仰臥式保定，但是需要多人保定，費(fèi)力費(fèi)時，不易采用。

4.2.2 采血消毒和采血方法同大豬相同，采血人員使用一次性采血器（選擇12×38mm 針頭）。

4.3 仔豬和小豬的采血

4.3.1 保定一般仔豬（30kg 以下）采取仰臥保定方式。其中一助手盡量抓握兩后肢向后牽引，另一助手下壓下頜骨使頭部貼地，做到兩前肢與體中線基本垂直。此時，兩側(cè)第一對肋骨與胸骨結(jié)合處的前側(cè)方會出現(xiàn)兩個明顯的凹陷窩。

4.3.2 采血保定完成后先用碘酊有里向外對右胸前窩進(jìn)針部位進(jìn)行消毒，70%酒精棉球消毒進(jìn)針部位，采血人員手持裝有正確針頭（9 號針頭）的一次性注射器（10～30kg 小豬，通常選用針頭9×25mm，進(jìn)針2～2.5cm；10kg 以下乳豬，通常選用針頭9×20mm，進(jìn)針1～2cm），向一側(cè)凹陷窩（首選右側(cè)）處，微偏向中央及胸腔方向，有回血即可采血，通常2～3mL 即可。采血完畢，迅速拔出采血針管，另一手拿干棉球緊壓針孔處，防止出血，等不出血后應(yīng)涂擦碘酒消毒。

4.4 豬耳緣靜脈采血（適用于大豬）

4.4.1 保定大豬通常采用站立式保定，飼養(yǎng)員用保定繩在大豬正前方將其上頜吊起，向前方用力，以豬前肢剛剛著地不能踏地為準(zhǔn)，要求盡可能吊得高一點(diǎn)，使豬的頭頸與水平面呈30～40°為宜。

圖3 小豬的仰臥采血

4.4.2 采血助手用手指捏壓耳根部靜脈血管，用酒精棉球擦拭耳靜脈局部，使靜脈充盈、怒張。采血者用左手的食指和中指從耳根下將耳托起，拇指把注射點(diǎn)皮膚展平，右手持采血針（針頭與血管呈30～45°）刺入，當(dāng)針尖刺入血管，將采血針放平，根據(jù)血管走向深入，當(dāng)看到回血后，將采血針另一端插入真空采血管，采集3～5mL 血液。采集完畢后迅速拔出采血針，用干棉球按壓止血，并用碘酊消毒采血部位。

5 前腔靜脈采血技術(shù)要點(diǎn)

5.1 針頭選擇

根據(jù)豬的大小選用不同型號的針頭。

5.2 做好保定

根據(jù)豬體大小，采用不同保定方式。豬保定后應(yīng)相對穩(wěn)定，不能騷動、后縮及左右搖擺。

5.3 進(jìn)針部位

選擇準(zhǔn)確的進(jìn)針部位，由于左側(cè)靠近膈神經(jīng)，故多在右側(cè)進(jìn)行采血。

6 血液樣本的處理、保存及運(yùn)輸

6.1 血液樣本的處理

6.1.1 血漿的制備在采血器內(nèi)加入適量的抗凝劑，采血后，反復(fù)顛倒采血器，使抗凝劑與血液充分混勻，靜置或經(jīng)過離心使血細(xì)胞下沉后，上清液即為血漿。

6.1.2 血清的制備 首先將采集的血液樣本置室溫或4℃半小時。待血液凝固后2000～3000 轉(zhuǎn)/min 離心5～10min，上清液即為血清。收集血清，貼上標(biāo)簽備用。

6.2 血液樣本的保存與運(yùn)輸

將所采集的血液樣本對應(yīng)的豬耳號用標(biāo)簽紙/膠布條標(biāo)注于相應(yīng)的采血管上，吸入部分空氣，旋緊頂端針帽，底端活塞處用醫(yī)用膠布將兩端固定，約呈45°室溫或4℃斜放靜置半個小時，使血清析出。填寫送檢樣本登記表。將裝有血清樣本的注射器裝入原包裝袋中，將注射器和送檢樣本信息表一同裝入密封袋中，再將血清樣本傾斜放入帶有冰袋的樣本箱中，用膠帶密封樣本箱，準(zhǔn)備送檢。

7 相關(guān)注意事項(xiàng)

1）采集健康豬血樣時，不采集病豬血液，同時也要保證時隨機(jī)采樣，保證各個胎次都比較均衡。

2）采集血樣時盡量避免污染，采血部位用酒精棉球擦拭消毒，采血量至少2mL，才能保證析出足夠量血清用于檢測。

3）采集的血樣要標(biāo)記清楚，編號要有規(guī)律，樣本排列要有順序，便于檢測，統(tǒng)計結(jié)果。采集的樣本放入裝有冰袋的樣本箱，及時送到實(shí)驗(yàn)室，在運(yùn)輸過程中避免搖晃，以免溶血。

4）采集的樣本要有詳細(xì)的信息，包括：日齡、胎齡、豬群種類、健康狀況、最后免疫時間和疫苗來源等信息。█