注射用復(fù)方骨肽細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究

張曉宇，劉 柳

（保定三九濟(jì)世生物藥業(yè)有限公司，河北定興 072656）

注射用復(fù)方骨肽適用于風(fēng)濕、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、頸椎病等疾病的癥狀改善，同時用于骨折及骨科手術(shù)后愈合，可促進(jìn)骨愈合和骨新生，為我公司獲批生產(chǎn)的凍干粉針劑，其規(guī)格為30 mg的多肽物質(zhì)，熱原控制[1]采用家兔法。研究復(fù)方骨肽的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的可行性，分析如下：

1 儀器與試藥

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格：5 EU/支，批號：0903140，湛江博康海洋生物有限公司）；鱟試劑（TAL，規(guī)格：0.25 EU/ml，批號：0811040、0902202，湛江博康海洋生物有限公司與湛江安度斯生物有限公司）；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水，規(guī)格：5 ml/支，批號：090223，湛江博康海洋生物有限公司）；注射用復(fù)方骨肽（規(guī)格：30 mg，批號：091003、091108、091205，保定三九濟(jì)世生物藥業(yè)有限公司）；并按照2005年版《中國藥典》二部中方法所用試管、吸管等玻璃儀器準(zhǔn)備。

2 方法與結(jié)果

2.1 TAL靈敏度復(fù)核

采用BET水將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 等系列濃度進(jìn)行試驗(yàn)。方法根據(jù)《中國藥典》2005年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[2]進(jìn)行。結(jié)果：兩批鱟試劑靈敏度測定值λc均在0.5 λ～2.0 λ范圍內(nèi)，靈敏度符合規(guī)定。

2.2 細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）的確定

由公式L=K/M計算，說明書中為L=2 EU/mg，本實(shí)驗(yàn)最終限值定為1 EU/mg。

2.3 干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)

干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)是在進(jìn)行干擾試驗(yàn)之前要進(jìn)行的試驗(yàn)，主要目的是排除樣品中內(nèi)毒素的干擾。由同一批號鱟試劑，對不同稀釋級別做2支供試品管（NPC），2支供試品陽性對照（PPC），同時以BET水建立2支陰性對照（NC）和 2支陽性對照（PC）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果NC均為陰性，PC均為陽性，結(jié)果見表2，由結(jié)果可知，樣品最大不干擾濃度為30 mg/ml。

表1 干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)Tab.1 Pre-experimental interference test

2.4 正式干擾試驗(yàn)

選擇3批未檢測出熱原的供試品，以供試品溶液將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制備成 2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 系列濃度，同時最終供試品溶液的濃度為30 mg/ml，另外同時以BET水制備上述濃度系列的細(xì)菌內(nèi)毒素溶液。分別以上述供試品及BET水制備的內(nèi)毒素溶液與兩個廠家的鱟試劑混合進(jìn)行干擾試驗(yàn)，并建立兩管相應(yīng)的供試品及BET水陰性對照。結(jié)果見表3。由結(jié)果可知，Et均在0.5 ES～2.0 ES范圍內(nèi)，且 ES 在 0.5 λ～2.0 λ 范圍內(nèi)，故在 30 mg/ml濃度下，注射用復(fù)方骨肽不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素與鱟試劑的凝聚反應(yīng)。

3 討論

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法已經(jīng)被各國藥典正式收載，作為一種新技術(shù)與新方法，已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的優(yōu)點(diǎn)明顯優(yōu)于家兔法，《中國藥典》2000年版新增47種品種采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，其中生化藥品占13種。生化類藥品是繼抗生素類藥品之后需要進(jìn)行熱源檢查的第二大類需檢藥品，而本文針對不同批號的注射用復(fù)方骨肽進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢測，證明原液在30 mg/ml濃度的情況下，注射用復(fù)方骨肽對于細(xì)菌內(nèi)毒素與鱟試劑的凝聚反應(yīng)無干擾作用，足以說明對注射用復(fù)方骨肽采用細(xì)菌內(nèi)毒素法是可行的，具有重要的參考意義，建議《中國藥典》在鱟試劑的假陽性和特異性方面作一些修訂。筆者認(rèn)為，有必要加快對以上生化藥品的研究步伐，充分發(fā)揮藥學(xué)教育和科研部門的潛力和積極性。相信隨著用鱟試劑檢測藥品細(xì)菌內(nèi)毒素的研究深入，將會有更多品種采用此種方法。

表2 注射用復(fù)方骨肽（30 mg/ml）細(xì)菌內(nèi)毒素干擾試驗(yàn)Tab.2 Compound Ossotide Injection(30 mg/ml)bacterial endotoxin test

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