P16在宮頸癌及癌前病變脫落細胞中表達的臨床意義研究 *

李美波 晁 遠 宋安輝 黃志嫻 葉健威

廣東省惠州市第六人民醫院 316200

宮頸癌是威脅女性健康的世界性問題，90%以上病例由人乳頭瘤病毒(HPV)引起，長期持續高危型HPV感染會導致高級別鱗狀上皮內瘤變(HSIL)，進而發展為宮頸癌[1]。P16是一種腫瘤抑制基因，直接參與腫瘤的形成與進展[2]。一過性的HPV感染不會影響細胞周期調控，但HPV持續性感染則會導致細胞的16蛋白地過表達，因此16蛋白可以作為宮頸癌前病變的HPV型別獨立的生物標志物[3]。目前16蛋白已廣泛應用于宮頸組織病理檢查的鑒別診斷，但在細胞學中應用價值還未完全明確。因此，本課題探討16免疫細胞化學染色在診斷宮頸癌前病變及宮頸癌的中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019年5—10月同時在我科行宮頸脫落細胞P16免疫細胞化學染色及宮頸活檢的108例患者的病理資料。患者年齡25～65歲，平均年齡(46.53±4.27)歲；已婚受試者81例(75.00%)，未婚受試者27例(25.00%)；已育受試者75例(69.44%)，未育受試者33例(30.56%)；疾病類型：宮頸癌4例，HSIL 38例，LSIL 34例，宮頸炎32例。

1.2 P16蛋白的免疫細胞化學檢測及判讀 P16免疫細胞化學染色由廣州江元醫療科技有限公司提供的全自動免疫細胞化學染色系統完成，染色實驗過程嚴格按照廠家的試劑、儀器說明書執行操作。結果的判讀由2位高年資病理醫師雙盲復診閱片，診斷結果不一致時需重新閱片分析至最終做出一致的診斷。

1.3 P16蛋白陽性切片的判讀標準[4](1)P16陽性細胞判讀：任意強度的胞核或胞核與胞漿染成棕黃色的鱗狀細胞判讀為陽性細胞；局限性胞漿染色或與背景一致的弱染色判讀為陰性細胞。(2)細胞核改變的判讀：0分=P16染色全陰性；1分=P16陽性細胞+不伴有上述核異常改變的；2分= P16 陽性細胞+只伴有1項上述核異常改變的；3分=P16陽性細胞+核質比增加(50%)+任意1項上述核異常改變；4分= P16 陽性細胞+所有細胞核漿比增加+大于等于2項上述核異常改變。P16染色陽性的切片判定：核評分≥2分。

1.4 病理結果的判讀 以陰道鏡活檢后組織學結果為金標準。活檢結果的判斷：采用HE染色，由2名經驗豐富的病理醫師解讀。

1.5 統計學方法 數據采用SPSS18.0軟件系統處理分析，采用χ2檢驗比較不同組間P16免疫表達差異，分析P16免疫染色在宮頸細胞學病變中診斷價值。通過McNemar檢驗計算P16免疫染色診斷宮頸高級別及以上病變的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 四組不同宮頸病變的P16免疫細胞化學表達的陽性率 宮頸癌、HISL、LISL、宮頸炎組患者P16蛋白陽性率見表1，總體差異有統計學意義(P<0.05)；宮頸癌及HISL組P16蛋白陽性率顯著高于宮頸炎組、LISL，差異有統計學意義(均P<0.01)。提示P16蛋白隨著宮頸病變程度的加重，陽性率不斷增加。

表1 P16免疫細胞化學染色的陽性分布情況

2.2 P16免疫細胞化學染色的在宮頸癌及HISL病變中表達情況 以組織病理診斷結果為金標準，P16 蛋白檢測結果與組織病理診斷結果進行比較，P16免疫細胞化學染色在宮頸癌及HISL病變中表達的敏感度為95.24%(40/42)，特異度為80.30%(53/66)，陽性預測值為75.47%(40/53)，陰性預測值為96.36%(53/55)。提示P16蛋白細胞免疫具有對宮頸癌及HISL有較好的提示作用。如表2所示。

表2 P16免疫細胞化學染色的在宮頸癌及HISL病變中表達情況(n)

3 討論

大量的研究表明宮頸癌的發生可通過對癌前病變的檢查和處理得以有效控制。西方國家的經驗顯示，宮頸癌發生率在密切篩查的人群中明顯下降。我國對于宮頸癌及其癌變的篩查，采用的篩查方法主要是傳統細胞學，傳統的細胞學特異度較高，然而敏感性較低，導致檢出率低，漏診率較高，而另一種篩查方式——HPV檢查因費用昂貴而難以在基層醫院廣泛開展與普及。因此，有必要尋找一種適合我國國情的宮頸癌篩查方法，其敏感性和特異性都應高于我國當前廣泛開展的宮頸癌主要篩查手段——液基細胞學，同時篩查費用低、操作簡便，易于在各級醫院開展，且能最大限度地篩查出宮頸病變。P16基因是一種直接參與細胞周期調控的抑癌基因，多項研究表明，P16蛋白在反應性宮頸病變或正常宮頸細胞中呈陰性或微量表達，而在宮頸上皮內病變中異常表達[5]。目前，已有大量研究證實P16免疫組織化學染色可顯著提高宮頸組織學樣本中HSIL及宮頸癌診斷的準確性，并能增加觀察者之間的重復性，P16蛋白的免疫組織化學染色已廣泛應用于臨床實踐，協助病理醫師判斷宮頸病變級別。然而，P16蛋白的臨床應用目前僅限于組織學，在細胞涂片中表達及應用價值還未完全明確。

有部分研究開始應用P16免疫細胞化學染色來進行輔助檢查。孫麗艷等[6]研究發現P16免疫細胞染色不僅可以作為宮頸腫瘤細胞學診斷的輔助手段，而且有助于區分HSIL和LSIL。莊粵冰等[7-8]研究認為P16免疫細胞化學染色檢測顯著提高了診斷宮頸癌的靈敏度和特異度，同時降低了假陽性率和假陰性率。本研究結果顯示，在宮頸癌及其癌前病變患者的P16免疫細胞化學染色檢查中，P16在宮頸癌及HSIL中有較高的陽性表達率，在LSIL及宮頸炎中陽性表達率較低，總體差異具有統計學意義，說明了P16表達在宮頸癌及其癌前病變中存在一定的差異，且通過對宮頸癌、HSIL、 LSIL、宮頸炎等P16表達的分析來看，疾病越嚴重陽性表達率越高。進一步分析P16免疫細胞化學染色在宮頸癌及HISL病變中表達的敏感度、特異度、陽性預測值及陰性預測值，分別為95.24%、 80.30%、75.47%、96.36%，表明了該檢測方法對高級別及以上有著較高的敏感度和特異性，間接提示了P16可作為理想的診斷宮頸癌的標志物。

綜上所述，在宮頸脫落細胞中，P16在宮頸癌及高級別鱗狀上皮內病變中存在過度表達的現象，采用P16免疫細胞化學染色檢測法加強對P16表達情況的檢測，對宮頸癌的防治有著十分重要的意義。