環(huán)狀RNA 在中國人群肺癌中診斷效能的Meta分析

陳開舉，歐曉璇，謝家敏，何銀煥，肖瑤

廣州醫(yī)科大學(xué)1公共衛(wèi)生學(xué)院，2衛(wèi)生管理學(xué)院，廣州 511436

肺癌是嚴重危害人類健康的惡性腫瘤之一，多數(shù)患者確診時已處于中晚期，預(yù)后差，生存期短，生活質(zhì)量較差，開發(fā)新的腫瘤標(biāo)志物用于肺癌早期診斷十分必要。環(huán)狀RNA是一類新型的內(nèi)源性非編碼RNA，與線性RNA不同，環(huán)狀RNA是通過磷酸二酯鍵形成的不具有3'末端和5'末端的閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)[1]。Chen和Yang[2]的研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)狀RNA多存在于真核細胞中，且具有一定組織特異性和時序性。Shen等[3]發(fā)現(xiàn)，環(huán)狀RNA缺乏游離末端而不易被水解，穩(wěn)定性和保守性較好。環(huán)狀RNA可通過競爭性內(nèi)源性RNA（competitive endogenous RNA，ceRNA）[4]、調(diào)控可變剪切和轉(zhuǎn)錄[5]、蛋白翻譯[6]等機制調(diào)控腫瘤細胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等過程。研究表明，環(huán)狀RNA在多種腫瘤組織及癌旁組織的表達中有明顯差異，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如肺癌[7]、胃癌[8]和食管癌[9]等，表明環(huán)狀RNA的異常表達在惡性腫瘤的診斷中具有潛在的臨床應(yīng)用價值。本研究擬通過定量Meta分析，系統(tǒng)性評價環(huán)狀RNA在中國人群肺癌診斷中的綜合效能，為進一步探討環(huán)狀RNA是否可作為肺癌新型的生物標(biāo)志物提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 研究方法

1.1 檢索策略

系統(tǒng)性檢索 PubMed、Embase、Cochrane Library、Web of Science、CNKI、CBM、WanFang Data、VIP等數(shù)據(jù)庫，檢索2020年3月5日前發(fā)表的關(guān)于環(huán)狀RNA與肺癌診斷相關(guān)性的文獻。采用主題詞與自由詞相結(jié)合的方式進行檢索，中文檢索詞為“環(huán)狀RNA”“肺癌”“肺腫瘤”“非小細胞肺癌”“肺腺癌”“肺鱗癌”，英文檢索詞為“circular RNA”“circRNA”“l(fā)ung cancer”“l(fā)ung neoplasm”“l(fā)ung adenocarcinoma”“non-small-cell lung cancer”“NSCLC”“pulmonary cancer”“pulmonary neoplasm”。符合要求的文獻納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者通過金標(biāo)準(zhǔn)診斷；②評估環(huán)狀RNA在中國人群肺癌的診斷價值；③病例數(shù)明確，靈敏度和特異度可從文獻中獲取。排除標(biāo)準(zhǔn)：①研究的對照組類型界定不明確或?qū)φ绽龜?shù)未知；②提取的數(shù)據(jù)不能滿足建立2×2列聯(lián)表；③非診斷性研究，如動物實驗、基礎(chǔ)研究、綜述等；④樣本量少于20。

1.2 文獻篩選、數(shù)據(jù)提取和質(zhì)量評價

由兩名獨立的評審員按照文獻納入和排除標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻，提取數(shù)據(jù)資料，提取內(nèi)容包括：論文作者、發(fā)表年份、環(huán)狀RNA類型、樣本類型、環(huán)狀RNA表達水平、病例數(shù)、對照例數(shù)、檢測方法、靈敏度、特異度、曲線下面積（area under curve，AUC）、臨界值（cut-off值）等。通過診斷試驗質(zhì)量評價工具（quality assessment of diagnostic accuracy studies-2，QUADAS-2）對所納入的研究進行質(zhì)量評估，包括病例選擇、待評價試驗、金標(biāo)準(zhǔn)、病例流程和進展情況4個部分，由兩名研究員獨立進行質(zhì)量評價，如存在分歧則通過討論或第3名研究者評價。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采 用 Review Manager 5.3、Meta-Disc 1.4和STATA 16.0軟件進行Meta分析。使用Review Manager 5.3軟件評估已納入研究的質(zhì)量。采用Meta-Disc 1.4軟件通過Spearman相關(guān)系數(shù)分析是否存在閾值效應(yīng)。采用χ2檢驗和I2檢驗分析研究間的異質(zhì)性，若研究結(jié)果間無異質(zhì)性（I2＜50%，P＞0.05），采用固定效應(yīng)模型分析數(shù)據(jù)；若研究結(jié)果間存在異質(zhì)性（I2＞50%，P＜0.05），則采用隨機效應(yīng)模型分析數(shù)據(jù)。依據(jù)相應(yīng)的模型計算納入文獻靈敏度、特異度、陽性似然比、陰性似然比、診斷比值比（odds ratio，OR）、受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線、AUC及95%CI。進行亞組分析和Meta回歸分析以探討研究間異質(zhì)性產(chǎn)生的原因，通過敏感性分析檢驗Meta分析的穩(wěn)定性，使用Deek's定量漏斗圖評估研究間發(fā)表偏倚。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究選擇及其特征

通過初步檢索，本研究共篩選出911項相關(guān)文獻，剔除409項重復(fù)或與主題無關(guān)的文獻后剩余502篇，通過閱讀題目和摘要初篩得到24項文獻。進一步閱讀全文，根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)進一步剔除15項不符合要求的文獻，最終納入9項（共13個研究）[11-19]關(guān)于環(huán)狀RNA與肺癌的診斷性文獻，均發(fā)表于2017—2020年，包括686例肺癌患者和587例非肺癌對照者，納入研究的基本特征見表1。納入的研究均符合QUADAS-2的大部分標(biāo)準(zhǔn)，13個研究的評分均≥4分，納入研究的質(zhì)量相對較高。

2.2 閾值效應(yīng)分析

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，不存在閾值效應(yīng)（r=0.324，P=0.280）。

2.3 環(huán)狀RNA對肺癌的診斷效能

通過χ2檢驗和I2檢驗檢測各研究間的異質(zhì)性，結(jié)果顯示，合并靈敏度（I2=46.52，P=0.03）和合并特異度（I2=67.57，P＜0.01）間存在較明顯異質(zhì)性，采用隨機效應(yīng)模型對9項（共13個研究）[11-19]關(guān)于環(huán)狀RNA與肺癌的診斷性文獻進行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果顯示，環(huán)狀RNA診斷肺癌的合并靈敏度為0.74（95%CI：0.70～0.78）（ 圖 1）、特 異 度 為 0.79（95%CI：0.73～0.84）（圖 1）、陽性似然比為 3.50（95%CI：2.70～4.40）、陰性似然比為 0.33（95%CI：0.29～0.38）、診斷 OR 為 10.00（95%CI：8.00～14.00）和 AUC 為 0.81（95%CI：0.77～0.84），ROC 曲線見圖2。

圖1 環(huán)狀RNA 在肺癌診斷中的合并靈敏度及合并特異度

圖2 環(huán)狀RNA 診斷肺癌的綜合ROC曲線

2.4 環(huán)狀RNA 診斷肺癌的亞組分析和Meta回歸分析

根據(jù)樣本量大小、環(huán)狀RNA的差異表達和樣本類型進行亞組分析，結(jié)果顯示，以樣本量≤50為檢測基質(zhì)的環(huán)狀RNA診斷肺癌的OR和AUC均優(yōu)于樣本量＞50的亞組，以表達上調(diào)為檢測基質(zhì)的環(huán)狀RNA診斷肺癌的OR和AUC均優(yōu)于環(huán)狀RNA表達下調(diào)，以組織為檢測基質(zhì)的環(huán)狀RNA診斷肺癌的靈敏度、特異度、診斷OR和AUC均優(yōu)于血液（表2）。Meta回歸分析表明，樣本量大小（P=0.01）、環(huán)狀RNA的差異表達（P=0.01）和樣本類型（P=0.03）均是潛在的異質(zhì)來源（圖3）。

2.5 敏感性分析和發(fā)表偏倚

通過逐一剔除納入研究的方法進行敏感性分析，結(jié)果顯示，納入的各項研究對結(jié)果無顯著影響。Deek's定量漏斗圖顯示，納入研究間不存在潛在發(fā)表偏倚（P=0.18）（圖4）。

圖3 Meta回歸分析圖

圖4 Deek's定量漏斗圖

表2 環(huán)狀RNA診斷肺癌的亞組分析

3 討論

肺癌是人體最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率處于各類疾病的首位。肺癌具有發(fā)展迅速、轉(zhuǎn)移快、預(yù)后差的特點，因此，早期診斷治療是提高患者預(yù)后的重要手段之一。研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)狀RNA在腫瘤組織的表達異常與肺癌的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后密切相關(guān)，越來越多的證據(jù)表明，環(huán)狀RNA對于肺癌的診斷、治療及預(yù)后提供了可觀的發(fā)展前景。

本研究共納入13項研究，包括686例肺癌患者和587例非肺癌對照者，結(jié)果顯示，環(huán)狀RNA診斷肺癌的合并靈敏度、合并特異度、陽性似然比、陰性似然比、診斷比值比和AUC均較高，提示整體的診斷效能較高。異質(zhì)性的產(chǎn)生是所有Meta分析研究中不可避免的一個關(guān)鍵問題[10]。通過Spearman相關(guān)系數(shù)以檢驗閾值效應(yīng)，表明閾值效應(yīng)不是引起異質(zhì)性的原因（r=0.324，P=0.280）。此外，對樣本量大小、環(huán)狀RNA差異表達水平及樣本類型進行Meta回歸分析，結(jié)果表明，上述3個因素是產(chǎn)生異質(zhì)性的潛在因素。本研究的局限之處：①樣本量有限，需要進一步擴大樣本量以提高準(zhǔn)確度；②亞組分析可以得出一些新的結(jié)論，不過分組后樣本量減小，再次合并后可能增大某些偏倚。

綜上所述，環(huán)狀RNA對肺癌具有較高的診斷效能，有望成為中國人群肺癌診斷的新型生物標(biāo)志物。但在今后的研究中，還需要更多大樣本、高質(zhì)量的前瞻性研究來進一步證實其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。