規(guī)模化豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型感染的實(shí)驗(yàn)室診斷

徐春志 ，藺俐仲 ，鄧珊珊 ，張 海 ，景書(shū)灝 ，楊 源 ，劉 艷 ，袁 林 ，袁 標(biāo)

（1. 貴陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽(yáng) 550081；2. 貴陽(yáng)市草地站，貴州 貴陽(yáng) 550081；3. 清鎮(zhèn)市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 貴陽(yáng) 551400；4. 息烽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 貴陽(yáng) 550300）

豬圓環(huán)病毒（PCV）屬圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，為無(wú)囊膜單股環(huán)狀負(fù)鏈DNA病毒[1]，分為PCV1、PCV2和PCV3共3個(gè)血清型[2]。PCV1對(duì)豬只無(wú)致病性。PCV2是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）的主要病原，表現(xiàn)為斷奶后仔豬，特別是6～8周齡仔豬，以發(fā)熱、精神不振、被毛粗亂、消瘦、皮膚蒼白、咳嗽、呼吸困難為常見(jiàn)癥狀。PCV3是一種從豬體內(nèi)鑒定的新亞型，其臨床癥狀和致病機(jī)制尚不明確[3]。豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起豬以繁殖障礙為主的動(dòng)物傳染病，也被稱為“豬藍(lán)耳病”。偽狂犬?。≒R）是由偽狂犬病病毒（PRV）引起的多種家畜和野生動(dòng)物以發(fā)熱、奇癢（豬除外）及腦脊髓炎為主要癥狀的一種急性傳染病。

試驗(yàn)通過(guò)采用ELISA方法對(duì)貴州省某規(guī)?；i場(chǎng)送檢的懷孕母豬、產(chǎn)房母豬、后備母豬、種公豬、哺乳仔豬、保育仔豬6個(gè)豬群90份血清樣本進(jìn)行豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、偽狂犬病病毒gB蛋白、偽狂犬病病毒gE蛋白血清抗體檢測(cè)；采用熒光PCR方法對(duì)送檢的90份血清樣本和1份豬淋巴結(jié)組織進(jìn)行豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、偽狂犬病病毒和豬圓環(huán)病毒2型核酸檢測(cè)。旨在確診該規(guī)?；i場(chǎng)保育仔豬異常死亡原因，以期為該豬場(chǎng)防控策略的制定提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 檢測(cè)樣本

采集某規(guī)?；i場(chǎng)豬血清樣本90份（其中：懷孕母豬20份、產(chǎn)房母豬10份、后備母豬17份、種公豬3份、哺乳仔豬20份、保育仔豬20份），病死豬淋巴結(jié)組織樣本1份。經(jīng)調(diào)查，該豬場(chǎng)分別免疫過(guò)豬口蹄疫O型滅活疫苗、高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗、豬瘟傳代細(xì)胞苗和豬偽狂犬病gE基因缺失苗。具體免疫程序如下：FMD（每4個(gè)月免疫1次）；CSF（種公豬每年春、秋各免疫1次；種母豬配種前10 d免疫1次，產(chǎn)后10 d加強(qiáng)免疫1次，以后每次免疫應(yīng)于產(chǎn)后進(jìn)行，妊娠期不再免疫）；PRRS（種公豬每年春、秋各免疫1次；后備種豬配種前5～6周和2～3周各免疫1次；生產(chǎn)母豬配種前12 d免疫1次，以后每5個(gè)月免疫1次）和PR（種公豬每年春、秋各免疫1次；后備種豬配種前7 d免疫1次，以后每隔4個(gè)月免疫1次）。

1.2 檢測(cè)試劑盒

豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬病病毒gB蛋白、豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測(cè)試劑盒以及豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自無(wú)錫優(yōu)聯(lián)生物技術(shù)有限公司。

1.3 檢測(cè)方法及結(jié)果判定

采用ELISA抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)采集的90份血清樣本分別進(jìn)行豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬病病毒gB蛋白和豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體檢測(cè)；對(duì)送檢的血清樣本和病死豬淋巴結(jié)樣本采用豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬病病毒和豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR檢測(cè)試劑盒分別進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)方法和檢測(cè)結(jié)果判定參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同豬群豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

不同豬群采集的90份血清樣本經(jīng)豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可知，懷孕母豬、產(chǎn)房母豬、后備母豬、種公豬、哺乳仔豬、保育仔豬6個(gè)豬群豬瘟抗體平均陽(yáng)性率為87.78%，其中，懷孕母豬、產(chǎn)房母豬、哺乳仔豬群的抗體陽(yáng)性率均為100%，種公豬和保育仔豬群抗體陽(yáng)性率均低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的大于70%標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 不同豬群豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果

不同豬群采集的90份血清樣本經(jīng)豬藍(lán)耳病病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，懷孕母豬、產(chǎn)房母豬、后備母豬、種公豬、哺乳仔豬、保育仔豬6個(gè)豬群豬藍(lán)耳病抗體平均陽(yáng)性率為70.00%，其中，懷孕母豬、產(chǎn)房母豬群抗體陽(yáng)性率均為100%，種公豬、哺乳仔豬和保育仔豬群抗體陽(yáng)性率均低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的大于70%標(biāo)準(zhǔn)。

2.3 不同豬群豬偽狂犬病病毒gB蛋白抗體檢測(cè)結(jié)果

不同豬群采集的90份血清樣本經(jīng)豬偽狂犬病病毒gB蛋白ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可知，懷孕母豬、產(chǎn)房母豬、后備母豬、種公豬群的豬偽狂犬病病毒gB蛋白抗體陽(yáng)性率均為100%，所有豬群的抗體陽(yáng)性率均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的大于70%標(biāo)準(zhǔn)。

2.4 不同豬群豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體檢測(cè)結(jié)果

不同豬群采集的90份血清樣本經(jīng)豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表4。

由表4可知，6個(gè)豬群中懷孕母豬群檢測(cè)出4份豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體陽(yáng)性樣本，陽(yáng)性率為20.00%（4/20），其余豬群未檢測(cè)出陽(yáng)性。由于該豬場(chǎng)疫苗免疫使用的為豬偽狂犬病gE基因缺失苗，提示懷孕母豬群可能存在偽狂犬病野毒感染。

2.5 病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

對(duì)送檢的90份血清樣本和1份淋巴結(jié)組織采用熒光PCR檢測(cè)方法分別進(jìn)行豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、偽狂犬病病毒和豬圓環(huán)病毒2型核酸檢測(cè)，結(jié)果顯示：豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒和偽狂犬病病毒核酸檢測(cè)均為陰性，豬圓環(huán)病毒2型核酸檢測(cè)淋巴結(jié)組織顯示陽(yáng)性，說(shuō)明該豬場(chǎng)存在豬圓環(huán)病毒2型感染，結(jié)果見(jiàn)圖1。

3 討論

1）近年來(lái)，隨著集約化養(yǎng)殖的不斷擴(kuò)大，以PCV2為主的PCV感染已成為我國(guó)豬群的一種常見(jiàn)多發(fā)性疫病。自1991年P(guān)CV2在加拿大北部被發(fā)現(xiàn)以來(lái)[4]，世界各地相繼報(bào)道了PCV2的存在，我國(guó)大陸地區(qū)在2000年首次報(bào)道[5]。吳瑗等[6]對(duì)浙江省及周邊地區(qū)2007—2012年P(guān)CV2的感染情況進(jìn)行檢測(cè)，總陽(yáng)性率為41.4%；李玲等[7]報(bào)道2008—2011年中國(guó)部分地區(qū)PCV2的感染率高達(dá)78.3%；廖啟順等[8]報(bào)道2009—2011年云南部分豬場(chǎng)PCV2的感染率為91.3%；邵萌等[9]報(bào)道2010—2012年陜西地區(qū)PCV2的陽(yáng)性率為82.9%；鄧靜等[10]報(bào)道2010—2013年四川地區(qū)PCV2的陽(yáng)性率為70.7%；蔣新華等研究人員[11]報(bào)道2013—2017年江西省10個(gè)地區(qū)的1 082份疑似病料進(jìn)行的PCV2病原學(xué)檢測(cè)，總體陽(yáng)性率為56.4%。上述研究表明，我國(guó)豬群的PCV2陽(yáng)性率處于較高的趨勢(shì)，已成為威脅豬場(chǎng)生物安全的主要病原之一。

表1 不同豬群豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 不同豬群豬藍(lán)耳病病毒ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 不同豬群豬偽狂犬病病毒gB蛋白ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

表4 不同豬群豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

2）此次試驗(yàn)對(duì)貴州省某規(guī)?；i場(chǎng)6個(gè)豬群分別進(jìn)行了豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、偽狂犬病病毒gB蛋白免疫抗體和偽狂犬病病毒gE蛋白感染抗體調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、偽狂犬病病毒gB蛋白免疫抗體總體陽(yáng)性率分別為87.78%、70.00%和88.89%，偽狂犬病病毒gE蛋白感染抗體陽(yáng)性率為4.44%；對(duì)90份血清樣本和1份病死保育仔豬淋巴結(jié)組織進(jìn)行豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、偽狂犬病病毒和豬圓環(huán)病毒2型核酸檢測(cè)，結(jié)果顯示淋巴結(jié)組織豬圓環(huán)病毒2型核酸陽(yáng)性。試驗(yàn)結(jié)果表明，引起該養(yǎng)豬場(chǎng)保育仔豬死亡的原因?yàn)樨i圓環(huán)病毒2型感染。雖然該豬場(chǎng)6個(gè)豬群豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒和偽狂犬病病毒gB蛋白免疫抗體總體陽(yáng)性率達(dá)到了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的大于70%標(biāo)準(zhǔn)，但是仍然有部分豬群的免疫抗體陽(yáng)性率低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求，如種公豬和保育仔豬群的豬瘟病毒抗體陽(yáng)性率分別為66.67%和60.00%；種公豬、哺乳仔豬和保育仔豬群豬藍(lán)耳病病毒抗體陽(yáng)性率分別為66.67%、35.00%和40.00%。懷孕母豬群出現(xiàn)了偽狂犬病病毒gE蛋白抗體陽(yáng)性，提示該豬群可能存在偽狂犬病毒野毒感染。

3）豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒2型對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的影響非常大，尤其是在生豬養(yǎng)殖高度密集的規(guī)?；i場(chǎng)，豬只一旦發(fā)病后果極為嚴(yán)重。目前市面上均有商品化疫苗，養(yǎng)殖場(chǎng)要選擇與該地區(qū)流行的毒株核酸同源性較高的疫苗進(jìn)行免疫，以避免疫苗免疫效果不好或免疫失敗。同時(shí)要根據(jù)實(shí)際情況，制定適合自身的免疫程序，做好免疫抗體監(jiān)測(cè)，加強(qiáng)免疫抗體評(píng)估；對(duì)免疫抗體不合格的要及時(shí)分析原因進(jìn)行補(bǔ)免；對(duì)異常死亡的豬只要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分析，并嚴(yán)格落實(shí)消毒和無(wú)害化處理措施。養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)重視豬場(chǎng)生物安全防護(hù)措施，嚴(yán)格執(zhí)行生物安全規(guī)程，對(duì)于有條件的種場(chǎng)建議及時(shí)開(kāi)展動(dòng)物疫病凈化工作。