肝細胞癌64 排128 層螺旋CT 征象與環加氧酶-2和血管內皮生長因子表達及預后的相關性

鄧衛華，黃苑君，王敏，高路

江西省遂川縣人民醫院 （江西吉安 343900）

原發性肝癌是目前臨床上常見的惡性腫瘤，而肝細胞癌（liver cell carcinoma，LCC）是原發性肝癌中最為高發的類型[1]。據不完全統計，我國LCC 每年新發病例占全球范圍內新發病例的50%，該病嚴重威脅我國居民的健康與安全[2]。LCC 的發生受多種因素的影響，如遺傳、病毒性肝炎、肝硬化、中毒等，近年來的高發趨勢還與環境及飲食行為的改變等相關[3]。該病早期多缺乏特異性表現，但隨著我國預防醫學的發展與健康體檢的推廣，在一定程度提高了該病的早期發現率。多層螺旋CT（multislice spiral computed tomography，MSCT）是目前診斷與評估LCC 的主要影像學手段，能夠無創、直觀地反映腫瘤的形態特征，同時能夠明確腫瘤病灶血管情況、病灶侵襲轉移情況等生物學特性，為診療工作的開展提供依據。本研究主要結合臨床實際病例分析LCC 64排128層螺旋CT 征象與環加氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）、血管內皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）表達和預后的相關性，以期為LCC 的診斷、治療和預后評估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選 取2 0 1 9 年1—6 月 我 院 收 治 的8 0 例L C C 患 者 作為研究對象，其中男51例，女29例；年齡49～71歲，平均（57.92±4.48）歲；腫瘤直徑2.1～5.3 cm，平均（3.7±0.6）cm。

納入標準：接受手術切除并經由病理證實為LCC；術前開展螺旋CT 平掃與多期增強掃描檢查；未接受化學、介入等抗腫瘤治療；病歷資料完整。排除標準：合并自身免疫性疾病、感染性或傳染性疾病；患有其他類型惡性腫瘤；凝血機制異常。

1.2 方法

術中獲取患者的病理組織標本，術后所有標本均經10%中性緩沖甲醛固定，常規石蠟包埋，行連續切片，分別行病理分級、免疫組織化學染色等處理。

1.2.1 病理分級

采用Edmondson-Steiner 分級法將癌細胞分化程度分為Ⅰ～Ⅳ級，見表1。

表1 LCC 病理分級

1.2.2 免疫組織化學染色

利用免疫組化Elivison 二步法，開展常規免疫組化染色，具體如下：將標本制成切片，厚度3 μm，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；各切片加1滴3%過氧化氫溶液，于室溫環境下孵育25 min 后利用蒸餾水沖洗，置入枸櫞酸鹽乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）緩沖液中進行高壓抗原修復，時間為5～10 min，0.01M 磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗3 次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴一抗（HIF-1α/VEGF/CD31），室溫孵育2 h，0.01M PBS 沖洗3次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴聚合物增強劑，恒溫箱37 ℃孵育20 min，PBS 沖洗3次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴酶標抗鼠/兔聚合物，室溫孵育30 min，PBS 沖洗3次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴新鮮配置二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，利用顯微鏡進行顯色控制，自來水沖洗；利用蘇木素復染，返藍，脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片、鏡檢。

對照組設計：陽性對照以LCC 陽性切片（染色結果示陽性）；陰性對照以0.01 mol/L PBS 液（染色結果示陰性）。

1.2.3 螺旋CT 檢查

由影像科工作經驗豐富的醫師采用螺旋CT（GE 公司，型號：64排Optima660）進行檢查，患者檢查前6 h 禁食，檢查前30 min 經口飲用800 ml 溫水，檢查前再次飲用200 ml 溫水以充盈胃腸道，在此基礎上開展CT 檢查，具體如下。（1）平掃：掃描參數設置為120 kV、250～300 mA，層厚、層間隔為5～10 mm，其中層厚可結合患者具體情況調整，螺距為1.0，從膈下至髂嵴上緣進行掃描。（2）增強掃描：靜脈注射800～100 ml 的非離子碘對比劑碘海醇，速度控制在3.0～4.0 ml/s，于動脈期（25～30 s）、門脈期（50～60 s）和實質期（90～120 s）進行三期掃描。

1.3 臨床評價

（1）不同病理分級LCC 患者VEGF、COX-2表達情況分析。由實驗者及兩位經驗豐富的病理科醫師按統一標準完成，陽性染色即胞漿出現棕色顆粒，采用×400高倍鏡隨機選擇染色密集區的5個視野進行觀察，各視野計分為陽性細胞染色強度、陽性細胞率各得分之和。陽性細胞染色強度分值范圍0～3分，其中0分表示無染色，3分表示強染色；陽性細胞率分值范圍0～3分，0分為<5%，1分為5%～25%，2分為26%～50%，3分為>50%。最終評分為5個視野的均值，其中陰性為0～2分，陽性為3～6分（依據分值劃分輕度、中度、重度）。（2）LCC 患者CT 征象與總生存時間（overall survival，OS）及VEGF、COX-2表達情況分析。螺旋CT 檢查結果由兩名放射科醫師判定，兩人意見一致的情況下有效，主要就腫瘤直徑、假包膜情況、腫瘤侵襲轉移及強化類型等進行觀察，其中依據平掃基礎CT 值增加幅度進行強化程度評估，輕度為<20 HU，一般為20～40 HU，明顯為>40 HU，同時對所有患者進行臨床隨訪，明確OS，即確診至死亡或末次隨診時間，遺漏值為至末次隨訪時死亡患者或隨訪期間失訪者。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 不同病理分級LCC 患者VEGF、COX-2表達情況分析

80例LCC 患 者 中，VEGF 陽 性 表 達 患 者44例（55.00%），陽性表達的標本細胞漿中可見棕黃色顆粒；COX-2陽性表達患者58例（72.50%），陽性表達的標本胞核無著色，細胞漿呈現黃褐色斑片狀或顆粒狀。Ⅰ、Ⅱ級病理分級患者VEGF 及COX-2陽性率與Ⅲ、Ⅳ級比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 LCC 患者CT 征象與OS 及VEGF、COX-2表達情況分析

CT 掃描結果中腫瘤形態不規則、CT 增強掃描明顯強化、合并侵襲轉移及病理分級Ⅲ、Ⅳ級患者的COX-2及VEGF陽性率高于腫瘤形態規則、CT 增強掃描輕度/不均勻強化、無侵襲轉移及病理分期Ⅰ、Ⅱ級，且前者OS 短于后者，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

表1 不同病理分級LCC 患者VEGF、COX-2表達情況分析[例（%）]

表2 LCC 患者CT 征象與OS 及VEGF、COX-2表達情況分析

3 討論

近年來，LCC 的發病率逐漸升高，臨床上針對該病患者的治療以手術為主，輔以放化療、基因療法、生物療法等干預，通過開展符合患者個體化特征的綜合療法治療，以降低腫瘤復發轉移風險，改善預后，從而延長患者的生存期[4-5]。由于LCC 是實體腫瘤，內部血管豐富，而豐富的血管組織為腫瘤細胞的生成、增殖與轉移過程提供了基礎，所以LCC 具有較高的致死風險[6]。VEGF 為特異度、作用效果均最強的促血管生長因子，通過促進血管生長，為腫瘤細胞的增殖、轉移提供充足的血液供應，誘發惡性腫瘤的復發，是目前公認大部分惡性腫瘤的誘發因子[7]。COX主要參與機體炎性改變的調節，COX-2是其亞型之一，活躍度較高，會因生長因子、細胞因子等刺激作用呈現高表達，而COX-2及產物會通過VEGF 蛋白造成血管生成因子的高表達，繼而對腫瘤病灶的血管、淋巴管的生成發揮調節作用[8]。因此，部分專家認為COX-2、VEGF 的表達與LCC 的發展及預后直接相關。本研究結果顯示，Ⅰ、Ⅱ級病理分級患者VEGF 及COX-2陽性率與Ⅲ、Ⅳ級比較，差異有統計學意義（P<0.05）；CT 掃描結果中腫瘤形態不規則、CT 增強掃描明顯強化、合并侵襲轉移及病理分級Ⅲ、Ⅳ級患者的COX-2及VEGF 陽性率高于腫瘤形態規則、CT 增強掃描輕度/不均勻強化、無侵襲轉移及病理分期Ⅰ、Ⅱ級，且前者OS 短于后者，差異有統計學意義（P<0.05）。

綜上所述，MSCT 征象進行腫瘤形態、強化、侵襲轉移、病理分期的評估結果，與VEGF、COX-2表達情況及OS 時間存在顯著相關性，能夠為診療及預后評估提供可靠依據。