傳統(tǒng)口蹄疫滅活疫苗效力檢測方法對動(dòng)物替代方法應(yīng)用效果研究

張常鎖 張金鳳 呂魯杰 陳 君 聶培婷

（天康生物股份有限公司制藥事業(yè)部，新疆烏魯木齊 830032）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的傳染病，嚴(yán)重危害各國的畜牧業(yè)。防控口蹄疫疫病的方式，主要采取強(qiáng)制免疫口蹄疫滅活疫苗。我國在檢測口蹄疫滅活疫苗效力中規(guī)定為疫苗50%動(dòng)物保護(hù)劑量（PD50）。我國強(qiáng)制免疫口蹄疫疫病，保證防控的效果，需要大量的本動(dòng)物進(jìn)行效力檢驗(yàn)。檢驗(yàn)動(dòng)物的獲取比較困難，成本高，勞動(dòng)強(qiáng)度大，周期長。國內(nèi)外在口蹄疫滅活疫苗效力檢驗(yàn)研究中，積極探索可替代本動(dòng)物方法。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：從試驗(yàn)動(dòng)物廠獲取400只普通級豚鼠，300-400 g。從定點(diǎn)動(dòng)物基地，獲取136只健康非免疫牛，6-12月齡。

病毒：從公司中獲取FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細(xì)胞毒，F(xiàn)MDV Asia-1/JSL MF8乳鼠毒。

疫苗：選取6批牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗。

建立豚鼠發(fā)病模型：隨機(jī)選取8只豚鼠，平均分為兩組。一組FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細(xì)胞毒進(jìn)行攻毒。一組用FMDV Asia-1/JSL MF8乳鼠毒進(jìn)行攻毒。

豚鼠免疫劑量試驗(yàn)：選取四組豚鼠，每組15只。三組為免疫組，一組為空白對照組。分別選取0.5 ml、1 ml、1.5 ml的免疫劑量。四周后，四組豚鼠均接種FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細(xì)胞毒。

1.2 試驗(yàn)口蹄疫滅活疫苗效力

60只豚鼠隨機(jī)分為四組，每組15只。分別選取0.125 ml、0.25 ml、0.5 ml、1 ml的免疫劑量，檢測牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗。免疫四周后。全部FMDV Asia-1／JSL MF8BF2細(xì)胞毒攻毒。觀察10 d，計(jì)算疫苗的PD50。

選取健康非免疫牛18只，隨機(jī)分為三組，每組6只。牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗分別免疫0.22 ml、0.67 ml、2 ml。三周后，全部進(jìn)行FMDV Asia-1／JSL MF8BF2攻毒。觀察10 d，計(jì)算疫苗的PD50。

1.3 血清學(xué)試驗(yàn)

在免疫第一周、第二周、第三周、第四周，分別在每組隨機(jī)選取豚鼠，進(jìn)行心臟采血，檢測FMDV Asia-1型抗體效價(jià)。

2 結(jié)果與分析

細(xì)胞毒、乳鼠毒攻毒后，豚鼠均出現(xiàn)典型臨床癥狀，并且更明顯的是乳鼠毒，豚鼠四肢趾部有明顯的水泡。根據(jù)豚鼠的發(fā)病情況，計(jì)算豚鼠的半數(shù)感染量105.67/0.2ml。通過細(xì)胞毒感染，對照組、108發(fā)病率為0。107、106的發(fā)病率為25%。105的發(fā)病率為75%。103、104的發(fā)病率為100%。

豚鼠免疫后四周，進(jìn)行細(xì)胞毒攻毒。使用1.5 ml劑量組的豚鼠，保護(hù)率為100%。1 ml劑量組也為100%。0.25ml劑量組的為0。0.5ml劑量組的為70%。因此，最適免疫劑量為1 ml。

進(jìn)行PD50效力試驗(yàn)，結(jié)果如下。N010與N007實(shí)驗(yàn)結(jié)果多次重復(fù)沒有大的差距，具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。

表1 牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗效力檢驗(yàn)

對照組第四周后抗體陰性。在免疫第一周后，豚鼠出現(xiàn)抗體，在第二周后，0.25 ml劑量組、1 ml劑量組的抗體水平有所減少，隨后增加，到第四周后，達(dá)到最高的抗體水平。抗體水平與攻毒后保護(hù)率呈現(xiàn)正向關(guān)系。攻毒保護(hù)與抗體效價(jià)無明顯的臨界值。豚鼠PD50與牛PD50有明顯的線性關(guān)系。

圖1 豚鼠PD50預(yù)測牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗效力

3 總結(jié)

本次研究的試驗(yàn)動(dòng)物使用豚鼠，對口蹄疫滅活疫苗的效力進(jìn)行評價(jià)，替代本動(dòng)物牛，檢測牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗的效力。結(jié)果顯示牛PD50與豚鼠PD50檢測結(jié)果明顯相關(guān)，具有顯著的線性關(guān)系。免疫劑量不同，抗體效價(jià)也有不同，呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系。但也有幾乎檢測不到抗體的動(dòng)物，受到保護(hù)，有抗體效價(jià)高的，仍然發(fā)病，說明血清學(xué)方法檢測穩(wěn)定性較差，需要盡量增加試驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量。