血清鈣結(jié)合蛋白S100A12對(duì)肺炎支原體肺炎患兒嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)價(jià)值

周四芳，葛明蓋，張琴，胡楊濤，雷大偉，蔡麗

肺炎支原體肺炎（MPP）是兒童常見(jiàn)的肺部感染性疾病之一。近年來(lái)，MPP 引起重癥病例發(fā)生率逐漸增高［1］。重癥MPP（SMPP）可遺留肺不張、支氣管擴(kuò)張、閉塞性支氣管炎及閉塞性細(xì)支氣管炎等，嚴(yán)重影響兒童的身體健康。SMPP常合并肺外感染，病情進(jìn)展快速，如果能早期識(shí)別SMPP患兒，并給與相應(yīng)治療措施可明顯改善患兒的臨床癥狀和預(yù)后［2］。血清鈣結(jié)合蛋白S100A12是噬中性粒細(xì)胞表達(dá)的一類(lèi)小分子蛋白質(zhì)，主要參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)等［3-4］。目前有關(guān)S100A12 在預(yù)測(cè)MPP 嚴(yán)重程度的臨床價(jià)值方面的研究少見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)探討MPP 患兒S100A12 的臨床意義，旨在為MPP 的嚴(yán)重程度評(píng)估提供有價(jià)值的生物學(xué)指標(biāo)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2018 年1 月—2019 年6 月南昌市第三醫(yī)院兒科收治的100 例MPP 患兒，根據(jù)病情嚴(yán)重程度分為MPP組60例和SMPP組40例。MPP組男31例，女29例，年齡1～13歲，平均年齡（5.6±2.1）歲；SMPP組40例，男18例，女22例，年齡1～13 歲，平均年齡（6.1±2.3）歲；另選擇同期于我院進(jìn)行健康體檢的兒童20例作為對(duì)照組，男10例，女10例，年齡1～13 歲，平均年齡（5.5±2.4）歲；3 組性別（χ2=0.433）、年齡（F=0.758）比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn) MPP 依據(jù)《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第8 版的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］：患兒有體溫升高、咳嗽、呼吸困難等呼吸道表現(xiàn)，血清學(xué)檢查支原體IgM 抗體陽(yáng)性（急性期滴度≥1∶160），β內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素治療無(wú)效，同時(shí)排除其他病原體感染。SMPP 診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］：患者治療期間病情加重或出現(xiàn)肺部以外癥狀。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）既往有支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病史。（2）合并神經(jīng)系統(tǒng)感染、結(jié)締組織病、惡性腫瘤者。（3）已接受激素治療者。（4）臨床資料不完整者。本研究所有入選患兒及家屬對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.3 方法

1.3.1 血標(biāo)本采集 MPP組和SMPP組患兒于入院后以及恢復(fù)期空腹時(shí)采外周血3 mL，對(duì)照組兒童于體檢時(shí)采集外周血3 mL，所有血樣本經(jīng)3 000 r/min 離心15 min，留取血清保存于-80 ℃冰箱待測(cè)。

1.3.2 指標(biāo)檢測(cè) 采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)所有對(duì)象的白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、中性粒細(xì)胞比例（N）、淋巴細(xì)胞比例（L）、C反應(yīng)蛋白（CRP）水平。采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測(cè)血清S100A12水平，試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。依次在96 孔板中加入待測(cè)樣本的標(biāo)準(zhǔn)品，37 ℃反應(yīng)90 min 后加入生物素標(biāo)記抗體，于37 ℃反應(yīng)60 min；洗板后加入ABC 抗體，37 ℃反應(yīng)30 min，TMB 終止反應(yīng)后酶標(biāo)儀測(cè)定各孔450 nm的光密度（OD）值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)孔的OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各組的S100A12水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進(jìn)行處理。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Dunnett’T3檢驗(yàn)；2 組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，MPP 組和SMPP 組急性期和恢復(fù)期S100A12 水平比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)。受試者工作特征（ROC）曲線分析S100A12水平對(duì)重癥MPP 的預(yù)測(cè)價(jià)值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MPP組和SMPP組血常規(guī)指標(biāo)比較 與MPP組相比，SMPP組WBC和CRP升高（P＜0.01），N和L比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

Tab.1 Comparison of blood routine indexes between MPP group and SMPP group表1 MPP組和SMPP組間血常規(guī)指標(biāo)比較 （±s）

Tab.1 Comparison of blood routine indexes between MPP group and SMPP group表1 MPP組和SMPP組間血常規(guī)指標(biāo)比較 （±s）

＊＊P＜0.01

組別MPP組SMPP組t n N L 60 40 WBC（×109/L）8.38±1.88 11.06±3.32 5.134＊＊0.59±0.07 0.60±0.05 0.853 0.33±0.07 0.32±0.05 1.222 CRP（mg/L）22.53±10.05 33.85±16.19 9.841＊＊

2.2 3 組血清S100A12 水平比較 MPP 組和SMPP組急性期患兒血清S100A12 水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；且SMPP 組較MPP 組明顯升高（P＜0.05）；MPP 和SMPP 組恢復(fù)期與對(duì)照組比較，血清S100A12 水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)圖1。

Fig.1 Comparison of S100A12 levels in acute and convalescent stages between the three groups圖1 急性期和恢復(fù)期3組S100A12水平比較

2.3 血清S100A12 水平與MPP 患兒嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，S100A12 與MPP患兒嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（rs=0.824，P＜0.01）。

2.4 血清S100A12 和CRP 預(yù)測(cè)MPP 患兒嚴(yán)重程度的臨床價(jià)值 選取MPP組急性期和SMPP組急性期患兒的S100A12和CRP 進(jìn)行ROC 曲線分析，結(jié)果顯示，S100A12和CRP預(yù)測(cè)SMPP的曲線下面積分別為0.916（95%CI：0.843～0.962）和0.708（95%CI：0.608～0.794）。S100A12 的預(yù)測(cè)價(jià)值明顯優(yōu)于CRP，見(jiàn)圖2、表2。

Fig.2 ROC curves of serum S100A12 and CRP in predicting the severity of MPP in children圖2 血清S100A12和CRP預(yù)測(cè)MPP患兒嚴(yán)重程度的ROC曲線

Tab.2 The predictive value of serum S100A12 and CRP for the severity of SMPP in children表2 血清S100A12和CRP對(duì)SMPP患兒嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

MPP是常見(jiàn)的社區(qū)獲得性肺炎之一，好發(fā)于5～15歲兒童，該病一旦控制不佳，極易進(jìn)展為SMPP和難治性MPP，引發(fā)肺外其他臟器的合并感染，加重病情。目前主流觀點(diǎn)認(rèn)為MPP向SMPP的進(jìn)展可能涉及2種機(jī)制：（1）肺炎支原體（MP）感染機(jī)體后大量復(fù)制，引起機(jī)體分泌白細(xì)胞介素（IL）-1、IL-6、IL-8 等多種細(xì)胞因子，進(jìn)而造成肺內(nèi)和肺外器官的損傷［7］。（2）部分肺外器官（心、腦、腎等）組織含有MP相關(guān)抗原，感染后引發(fā)自身免疫反應(yīng)，進(jìn)而造成這些器官受累［8］。因此，如何早期識(shí)別SMPP 患兒，以便及時(shí)采取治療措施，對(duì)于MPP患兒的病情轉(zhuǎn)歸和延緩肺外并發(fā)癥的進(jìn)展具有重要意義。S100A12是S100蛋白家族成員，由1q21.3編碼，主要由中性粒細(xì)胞分泌和表達(dá)，其與晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）結(jié)合后通過(guò)多個(gè)細(xì)胞通路參與炎癥細(xì)胞活化，進(jìn)而激活先天性免疫應(yīng)答［9-10］。已有多項(xiàng)研究顯示，S100A12與多種肺部疾病有密切的關(guān)系。Hou等［11］發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性肺炎患者血清S100A12 表達(dá)水平升高，且其表達(dá)水平與WBC、CRP 等炎性指標(biāo)呈明顯正相關(guān)，可以作為預(yù)測(cè)細(xì)菌性肺炎的炎癥標(biāo)志物。Berrocal-Almanza 等［12］發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核病患者血清S100A12 水平較健康對(duì)照組明顯升高，可作為肺結(jié)核發(fā)生的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，在全程督導(dǎo)化學(xué)治療（DOTS）后，S100A12在4 個(gè)月后顯著下降，提示S100A12 有評(píng)估肺泡浸潤(rùn)程度的潛力。國(guó)內(nèi)張鵬等［13］發(fā)現(xiàn)S100A12與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（OSAHS）的嚴(yán)重程度相關(guān)，且血清S100A12與超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、Epworth 嗜睡量表評(píng)分（ESS）、睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組相比，MPP組和SMPP組急性期S100A12水平明顯升高，且隨著疾病的進(jìn)展，S100A12 呈進(jìn)行性升高，兩者呈正相關(guān)，與上述報(bào)道基本一致。

本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)，MPP 患者的CRP 水平也出現(xiàn)明顯升高，是機(jī)體感染狀態(tài)下的常見(jiàn)炎性指標(biāo)之一。多項(xiàng)研究均報(bào)道了其對(duì)于MPP的診斷價(jià)值，但最佳診斷值范圍變化較大（5～35 mg/L）［14-16］。本研究結(jié)果顯示，CRP 診斷MPP 的臨界值為27.00 mg/L，與上述結(jié)果有一定差異。推測(cè)其原因，一方面是檢測(cè)技術(shù)不同造成的影響；另一方面，納入對(duì)象的年齡差異也可能會(huì)影響結(jié)果。有研究報(bào)道在肺炎敗血癥患者血清S100A12高達(dá)780 μg/L［17］，而本研究結(jié)果顯示，SMPP急性期患者普遍維持在800 μg/L左右，與上述結(jié)果基本一致；而在診斷價(jià)值方面，S100A12 預(yù)測(cè)SMPP的敏感度和特異度均優(yōu)于CRP，提示S100A12可作為預(yù)測(cè)MPP嚴(yán)重程度的一個(gè)新指標(biāo)。

綜上所述，檢測(cè)血清中S100A12 有助于判斷MPP病情、預(yù)后及指導(dǎo)治療，但S100A12在MPP發(fā)病中的具體機(jī)制尚未明確，且目前相關(guān)的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)較少，仍有待于進(jìn)一步深入研究。