牛羊布魯氏菌病臨床樣品采集技術要點

胡世欣

（河南省伊川縣牙領鎮農業服務中心，河南 伊川 471300）

動物疫病監測是動物防疫的重要組成部分，它不僅涉及重大動物疫病的預防和控制、公共衛生安全和畜牧業的發展，還涉及消費者的健康。收集動物疾病材料是進行動物疾病監測的前提。動物病料的采樣方法、采樣點、采樣量和樣品保存質量直接決定了檢測結果的準確性和科學結論，對動物疾病診斷、流行病學調查、免疫監測、動物疫病防治等有重要影響。因此，動物疫病病料的收集和保存是基層防疫人員必須掌握的一項實用技術。

1 采樣前準備工作

1.1 采樣人員

抽樣人員應具備相關的專業知識和熟練的抽樣技能，并能正確使用采樣工具，準確掌握取樣目的，樣品類型和數量。

1.2 采樣物品與器具

一次性PE手套、乳膠手套、防護帽、護目鏡、防護口罩、防護服、橡膠靴等。10毫升一次性采血針、75%酒精棉球、碘棉、試管架、剃毛器等。10毫升滅菌試管或離心管，試管架、新潔爾滅消毒劑。采取流產胎兒和流產病料時，準備無菌鑷子、剪刀、手術刀、無菌盤、無菌棉簽、75%酒精和棉球、酒精燈等。準備采樣清單、簽字筆、記號筆、保溫箱或保溫瓶，易于密封的樣品袋、塑料包裝、膠帶、密封膜、密封圈、冰袋、貼紙等，將采樣物品裝備齊全，避免采樣時手忙腳亂。

2 病料采集原則

嚴禁對疑似炭疽病的動物進行尸檢。對于血液凝固不良和天然口出血的病（死）動物，應收集來自耳尖的血液，以確認動物是否盡患有炭疽，加以診斷。取樣時需要無菌操作，以免外源性污染和樣品交叉感染。在解剖取樣過程中，應首先從胸腔到腹腔收集實質器官，然后收集容易污染的組織和器官，如腔腸組織及其內容物。收集的牛羊布魯氏菌病料必須具有代表性。收集的動物器官和組織應該是有明顯病變的部位，應根據不同的疾病（或檢查目的）收集相應的血液樣本，新鮮組織、器官、腸內容物、分泌物、排泄物或其他物質。當無法確定發病原因時，應系統地收集相關病料數據。牛羊布魯氏菌病料的采集最好在使用治療藥物之前進行。藥物使用將影響樣品中病原微生物的檢測。死亡動物的內臟病變材料的收集應在死亡后立即進行，不遲于6小時。在采集血樣前，一般要求牛羊禁食8小時。應根據血液樣本采集血樣，確定血液采集方法和位置。取樣時應考慮采樣人員自身防護，環境消毒和病死牛羊無害化處理，以防止人畜共患感染。

3 不同樣品的采集

3.1 全血樣品的采集

從頸靜脈或尾靜脈收集血液。用無菌注射器抽取0.5～1毫升的5%枸櫞酸鈉溶液（0.1毫升檸檬酸鈉溶液可以抗1毫升血液凝結）并將其注入滅菌的離心管中。將5～10毫升無菌血液加入離心管中并充分混合，將離心管緊緊蓋住并貼上標簽。

3.2 血清樣品的采集

用頸部靜脈或尾靜脈無菌收集血液，用10毫升一次性注射器抽取3～5毫升。將無菌試管置于傾斜表面上，并在完全凝固后豎立血液。在血清完全分離或離心后，用無菌注射器吸取血清并注入無菌離心管中。

3.3 乳汁樣品的采集

采集前使用消毒劑徹底消毒雙手，同時，消毒劑消毒整體乳房及乳頭部位。首先，丟棄最初擠出的奶樣，然后，無菌采取10～20毫升奶樣，注入滅菌管或離心管中進行標記。奶樣品無須冷凍，加熱或劇烈搖動。

4 采樣單及標簽的填寫

逐項填寫取樣清單和樣品標簽，將取樣列表放入塑料袋中，然后將樣品送到獸醫實驗室。樣品采集后，樣品編號應標在包裝袋上，以免混淆不同的樣品。 客戶應認真準確地填寫“客戶樣品登記表”或“樣品檢驗表”。標明被檢查單位的信息，如農場名稱，被檢查人員姓名，動物種類，年齡和數量等，并明確動物的臨床表現，如發病率、死亡率、臨床表現、病理變化、免疫程序和藥物使用等。登記文件將與患病材料一起送到實驗室，進行檢測。