lncRNAAK093987 表達與胃癌淋巴結轉移及預后的相關性

田 偉，高愛紅

近年來，隨著胃癌診治水平逐步提高，早期胃癌篩查率日益增高。 外科手術是早期胃癌患者有效選擇，但術前較難判斷患者是否存在淋巴結轉移風險，影響患者預后預測［1］。 研究表明早期胃癌預后良好，5 年生存率高于90%，而存在淋巴結轉移患者生存率常低于70%［2］，因此早期準確判斷胃癌患者淋巴結轉移情況對改善患者預后至為重要。 近期國內外學者一致認為長鏈非編碼RNA（lncRNA）在腫瘤發生、轉移和凋亡中發揮重要作用［3?4］，其中ln?cRNAAK093987 目前廣泛應用于各類腫瘤研究中。研究證實lncRNAAK093987 在小細胞肺癌組織中呈高表達，且lncRNAAK093987 參與非小細胞肺癌的發生發展，有望成為肺癌患者預后評估的有效分子標志物［5］。 另有研究表明lncRNAAK093987 在結腸癌發病、病情進展中起重要作用［6］。 國內關于ln?cRNAAK093987 表達與胃癌發生和轉移的相關性研究尚處于初探階段，為此本研究收集78 例胃癌患者臨床資料，旨在探討lncRNAAK093987 與胃癌淋巴結轉移及預后的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2017 年1 月—2018 年1 月本院收治的78 例胃癌行手術治療患者臨床資料。 納入標準：經術后病理結果證實為胃癌；臨床資料完整；存在外科手術治療適應證；術前未接受放化療等輔助治療。 排除標準：合并其他類型惡性腫瘤；嚴重并發癥；合并高血壓病及重要臟器功能損傷；有器官移植史。 78 例均收集癌組織及癌旁（距癌灶邊緣≥5 cm）組織標本。 78 例中男46 例，女32 例；年齡49～75（60．09±6．11）歲；淋巴結轉移12 例；病程12～37（25．03±3．01）個月；病理類型：鱗癌53 例，腺癌25 例；分化程度：高分化13 例，中分化38 例，低分化27 例；TNM 分期：I 期12 例，Ⅱ期39 例，Ⅲ期15例，Ⅳ期12 例。1.2研究方法

1.2.1胃癌組織及癌旁組織中lncRNAAK093987表達量：采用實時定量聚合酶鏈式反應檢測ln?cRNAAK093987 表達，具體步驟：RNA 提取→逆轉錄合成cRNA→引物設計→三步法擴增→結果分析，以β?Actin 為內參基因，每個樣本測3 次取平均Ct 值（相差0．5 個Ct 值舍棄）。 lncRNAAK093987正向引物序列為5＇?ACG?GAGGAGAGAGAGAATGT?3＇，反 向 引 物 序 列 為5＇?TACATGGGGAGACAAG?GATT?3＇。 讀取目的基因和內參基因的Ct 值，采用2?△△CT 法 計 算 lncRNAAK093987mRNA 表 達水平。

1.2.2胃癌淋巴結轉移影響因素：收集78 例性別、年齡、病理分期、分化程度、lncRNAAK093987 表達量等臨床資料，以手術病理結果將患者分為轉移組、無轉移組，應用二元Logistic 回歸分析尋找胃癌淋巴結轉移的影響因素。

1.2.3lncRNAAK093987 表達與淋巴結轉移、預后的相關性：78 例依據lncRNAAK093987 表達量中位數（7．35）為截點分為高表達組、低表達組，比較兩組術后2 年總生存率、無進展生存率，分析患者ln?cRNAAK093987 表達量與淋巴結轉移、預后的相關性。 術后2 年以電話或復診形式進行隨訪，末次隨訪時間為2020 年1 月。 無進展生存率指患者從接受治療開始到觀察到疾病進展或因任何原因發生死亡的這段時間內的生存率。

1.3主要試劑 免疫印跡有關試劑、 ln?cRNAAK093987 序列購自上海百信生物科技公司，實時定量聚合酶鏈式反應試劑盒購自廣州銳博生物科技有限公司。

1.4統計學方法 應用SPSS 20．0 軟件分析數據。計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。 采用Spearman 分析進行相關性分析。 以α ＝0．05 為檢驗水準。

2 結果

2.1胃癌組織及癌旁組織中lncRNAAK093987 表達量比較 胃癌組織中lncRNAAK093987 表達量為（7．35±0．79）明顯高于癌旁組織中的（1．09±0.11），差異有統計學意義（t＝69．315，P＜0.001）。

2.2胃癌患者淋巴結轉移的單因素分析 78 例胃癌出現淋巴結轉移12 例，無轉移66 例。 兩組性別、年齡比較差異無統計學意義（P＞0.05）；兩組在病理分期、 分 化 程 度、 瘤 灶 大 小、 深 層 浸 潤 及 ln?cRNAAK093987 表達量方面比較差異有統計學意義（P＜0.01），見表1。

表1 78 例胃癌患者淋巴結轉移的單因素分析

2.3胃癌患者淋巴結轉移的二元Logistic 回歸分析 以胃癌患者淋巴結轉移為應變量（有轉移＝1、無轉移＝0），以上述有統計學意義的單因素［分化程度：低分化＝1、中，高分化＝0；深層浸潤：有＝1、無＝0；lncRNAAK093987 表達量：＞7．99 ＝1、≤7.99 ＝0）］為自變量進行賦值，代入二元Logistic 回歸模型中進行分析，結果顯示低分化程度、有深層浸潤、ln?cRNAAK093987 表達量＞7．99 是胃癌患者淋巴結轉移的影響因素（P＜0.05 或P＜0.01），見表2。2.4lncRNAAK093987 表達量與胃癌患者預后的關系 低表達組術后2 年總生存率、無進展生存率明顯高于高表達組，差異有統計學意義（P＜0.05 或P＜0.01），見表3。

表2 78 例胃癌患者淋巴結轉移的二元Logistic 回歸分析

表3 lncRNAAK093987 表達量與78 例胃癌預后的關系［例（%）］

2.5胃癌患者lncRNAAK093987 表達量與淋巴結轉移、預后的相關性分析 相關性分析顯示：ln?cRNAAK093987 表達量與淋巴結轉移呈明顯正相關，而與患者預后呈明顯負相關，見表4。

表4 78 例胃癌lncRNAAK093987表達量與淋巴結轉移、預后的相關性分析

3 討論

淋巴結是胃癌轉移的重要途徑，早期胃癌有10%～15%的淋巴結轉移率［7］。 淋巴結轉移與患者預后密切相關，盡管根治術是目前淋巴結轉移患者有效治療手段，但對無淋巴結轉移的早期胃癌患者，貿然采取胃癌根治術會造成過度治療，因此早期預測胃癌淋巴結轉移風險至為重要。 早期主要采用超聲內鏡、CT 等影像學技術對胃癌進行輔助檢查，但這些檢查手段無法在早期準確判斷患者是否存在淋巴結轉移。 研究表明lncRNAs 可通過轉錄調控、mRNA 加工等參與腫瘤的生理、病理過程，lncRNAs表達水平與多種腫瘤病理特征和預后密切相關［8?10］，在腫瘤診治方面具備良好的臨床應用前景。相關研究表明lncRNAAK093987 在彌漫大B 細胞淋巴瘤患者中呈高表達，lncRNAAK093987 或可作為反映彌漫大B 細胞淋巴瘤預后的標志物［11］。 另有研究指出lncRNAAK093987 在胃癌組織中呈高表達，其表達水平與胃癌惡性程度存在明顯正相關［12］，提示lncRNAAK093987 可能參與胃癌的發生、發展。

本結果顯示，胃癌組織中lncRNAAK093987 表達量較癌旁組織中顯著增高，與Liu 等［13］研究結果大體類似，提示lncRNAAK093987 在癌組織中呈高表達。 本結果還顯示，低分化程度、有深層浸潤、ln?cRNAAK093987 表達量＞7．99 是胃癌患者淋巴結轉移的影響因素。 深層浸潤、分化程度一定程度反映了腫瘤的惡性程度，腫瘤分化程度越低、存在深層浸潤表示癌灶侵襲性越強，腫瘤惡性程度就越高，故而推測存在深層浸潤且分化程度低的患者發生淋巴結轉移的風險也越高，與權蕊良等［14］結論基本相符。研究表明lncRNAAK093987 轉錄水平低于蛋白質編碼基因，且其表達存在高度的組織特異性，可精密調控并參與機體組織及細胞功能，參與腫瘤細胞的存活、增殖、侵襲及轉移等生物學行為［15］。

此外，本結果同時顯示lncRNAAK093987 低表達胃癌患者術后2 年總生存率、無進展生存率較高表達患者顯著增高，lncRNAAK093987 表達量與淋巴結轉移呈明顯正相關，而與患者預后呈明顯負相關，初步說明lncRNAAK093987 表達量與胃癌患者淋巴結轉移和預后密切相關。 盡管具體機制尚未明確，但是提示在胃癌患者治療期間動態監測ln?cRNAAK093987 表達，能夠為患者淋巴結轉移風險的早期預警和預后判斷提供一定參考。

綜 上， 本 文 初 步 證 實 胃 癌 患 者 ln?cRNAAK093987 表達量與淋巴結轉移和預后密切相關，其有望成為胃癌新型分子標志物。