基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的心肌缺血大鼠血清和心肌組織代謝組學(xué)

尹春園,孫明謙,金 龍,林 力,苗 蘭,劉建勛*

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,中藥藥理北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100091;2.北京中醫(yī)藥大學(xué),北京 100029)

心肌缺血(myocardial isochemia)是由于心臟的血液灌注量降低,導(dǎo)致心臟的供氧減少,心肌能量代謝異常,不能支持心臟正常工作的病理狀態(tài)[1]。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活方式的轉(zhuǎn)變,我國(guó)心血管疾病患者人數(shù)逐年增加。目前,心血管病是城鄉(xiāng)居民死亡原因的首位,且農(nóng)村居民心血管病的死亡率逐年增加[2]。如何應(yīng)用現(xiàn)代技術(shù)對(duì)心肌缺血的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行闡釋,是中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的重要任務(wù)之一。

代謝組學(xué)(metabolomics)是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后發(fā)展起來(lái)的新興組學(xué)技術(shù),是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分,它通過(guò)檢測(cè)來(lái)自體液或組織中的小分子代謝物,來(lái)實(shí)現(xiàn)在疾病的早期診斷和治療檢測(cè)過(guò)程中的重要作用[3,4]。代謝物作為基因的下游產(chǎn)物,能夠最直接反映不同組之間的表型差異,從代謝層面上放大表達(dá)基因、轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)層面的差異[5]。

本文利用液相色譜-四極桿軌道離子肼質(zhì)譜對(duì)異丙腎上腺素(isoproterenol,ISO)誘導(dǎo)的心肌缺血大鼠進(jìn)行心肌組織和血清的靶向代謝組學(xué)研究和生物標(biāo)志物的分析,揭示與心肌缺血有關(guān)的代謝通路,探索其發(fā)病機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

賽默飛UltiMate 3000高效液相色譜儀(美國(guó)ThermoFisher Scientific公司);Q ExactiveTM組合型四極桿質(zhì)譜儀(美國(guó)ThermoFisher Scientific公司);22 R高速離心機(jī)(德國(guó)Mikro公司);低溫冰箱(美國(guó)Thermo公司);Mix-3000振蕩混勻器(杭州米歐儀器有限公司);Mikro 220R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)Hettich公司)。……