羊肚菌菌種規模化生產技術

賀新生 王茂輝 王 玨 王一璞 李小勇 王亞洲 朱曉琴 趙 苗

羊肚菌菌種規模化生產技術

賀新生1王茂輝2王 玨2王一璞2李小勇1王亞洲1朱曉琴1趙 苗1

（1. 西南科技大學生命科學與工程學院，四川 綿陽 621010；2. 綿陽佐伊精耕科技有限公司，四川 綿陽 621039）

羊肚菌菌種生產是羊肚菌栽培的第一步。使用優質的菌種，栽培種培養料和營養料袋以小麥為主要原料，使用足夠數量的的栽培種和營養料袋是羊肚菌栽培成功的關鍵。從原始菌種選擇、母種生產、原種生產、栽培種生產和營養料袋制作等方面介紹羊肚菌菌種的規模化生產技術和流程，并列出具體的數量參數和各項注意事項。

羊肚菌；菌種選擇；栽培種；生產技術；注意事項

羊肚菌系羊肚菌科（Morchellaceae）羊肚菌屬[Dill. ex Pers., Neues Mag. Bot. 1: 116 (1794)]內所有種類的統稱，而不是指具體的某個物種。因其菌蓋表面凹凸不平、狀如羊肚而得名。羊肚菌是一種食藥兼用的珍稀菌類，不僅味道鮮美、營養價值高，而且還是一類天然的保健食品，深受廣大消費者喜愛。

羊肚菌栽培的基礎是優質的各級菌種，原始菌種來源必須非常可靠，生產時接種要嚴格執行環境滅菌和無菌操作，要創造良好的培養條件；栽培種原料配方中要有足夠比例的小麥，栽培種和營養料袋的數量要足夠。菌種必須在最優的播種時節集中供應，從多方面保證栽培的成功和效益。

目前國內商業化栽培羊肚菌的面積已經達到13萬～15萬畝（1畝≈667 m2，下同），對栽培種和營養料袋的需求量大。羊肚菌菌種規模化生產廠家的生產規模一般為1 000～20 000畝；栽培種生產量為20萬～500萬袋，營養料袋的生產量是其10倍以上。栽培種和營養料袋的生產時間一般只有30～50天，生產期非常集中，每天必須生產20萬～300萬袋甚至更多，菌種生產廠家的生產壓力之大可想而知。廠家為了趕進度、提高生產效率，時有不留意細節，違反操作規程的情況，往往使栽培種和營養料袋的質量得不到保障，而導致大田栽培大面積的減產以至絕收。為避免此種情況，特鄭重介紹羊肚菌菌種的規模化生產技術和流程，供廣大生產者參考。

1 原始菌種的選擇

1.1 菌種來源

羊肚菌菌種的分離方法包括鮮菇組織分離、干菇組織分離、多孢分離、單孢分離、單菌核分離、多菌核分離、組孢混合分離等，很多方法得到的菌種可能會不出菇、出菇率很低，或產量、品質不佳。因此，生產者自行分離的菌種最好先通過出菇試驗，能夠大量形成原基后再進行推廣，應用于生產。一般來說，購自可靠機構經過出菇試驗和大面積種植獲得高產的原始菌株母種，較為放心。對自行采集本地野生或栽培的新鮮成熟子實體，并用可靠的方法純化得到的純菌種，又經出菇試驗的也可使用。

1.2 羊肚菌栽培物種的主要種類

常見的羊肚菌商業化栽培物種有：六妹羊肚菌、七妹羊肚菌、梯棱羊肚菌等。其他黑色物種，如Mel-21、Mel-20等產量很低，不適合商業化栽培。

1.3 注意事項

建議采用當年的野生或栽培子實體通過單孢分離得到的純菌種；不建議使用保藏多年的菌種，多次、無限轉擴的母種，技術信譽度不高的機構的菌種，以及所謂多孢菌種、組孢混合、組織分離的菌種，或是分離方法不詳、無法說清原理的菌種。也不建議使用未經鑒定的野生物種進行分離和大面積栽培，特別是黃色的物種。

2 一級菌種（母種）的生產技術

2.1 培養基配方

土壤、麩皮、米糠、小麥粒、黃豆粉、木屑、松針、馬鈴薯、干麥芽、鮮麥芽等中的一種或是多種組合（下同）50～200 g，葡萄糖（蔗糖或紅糖）20～25 g，蛋白胨或酵母粉1～2 g，瓊脂20～22 g，pH自然。

2.2 培養基制作

土壤或其他天然原料加1 200～1 300 mL清水，煮沸20 min，過濾后在濾液中加入其他成分和瓊脂，加熱至全部溶解后，分裝在試管中。清理試管口處的殘留培養基，用新的白色乳膠塞封口。采用手提式高壓鍋滅菌，0.1 MPa、121.6°C下保持20 min后自然冷卻，壓力表降到0后，取出擺放成斜面或柱狀。常溫下培養10～15天，培養基表面無明水，備用。

建議使用15′150（mm）的試管，便于在顯微鏡下用2倍、4倍、10倍的物鏡直接原位觀察，18～25′200～250（mm）的大試管，無法在顯微鏡下直接觀察。

2.3 接種與培養

在超凈工作臺上進行無菌接種操作，每支原始菌種轉接30～50支。采用懸掛接種法，把接種塊懸掛粘貼在斜面上方5～8 mm的試管壁上，不要把接種塊直接放在新試管的斜面上。接種后的試管置于22～24°C恒溫培養箱中避光培養5～7天，使斜面長滿菌絲。每天用顯微鏡原位觀察菌絲的生長情況，及時淘汰污染、菌絲生長異常的試管。

2.4 顯微鏡檢測

活力強的母種，試管顯微鏡下原位觀察，單根菌絲粗壯，菌落邊緣的菌絲肉眼可識別，菌落表面淡黃色或黃褐色，試管壁上有氣生菌絲，瓊脂培養基表面有絨毛狀氣生菌絲。絨毛狀氣生菌絲和培養基內菌絲粗壯，分枝發達，培養基表面及上方氣生菌絲上有大量菌核，有菌絲自融合網絡，無雜菌，無波浪狀菌絲、纏繞菌絲、細胞壁破裂菌絲、原生質濃縮菌絲及巨大液泡菌絲。

將剛剛長滿試管斜面的菌種，立即轉接栽培種。

2.5 注意事項

建議使用復合配方制備瓊脂培養基，而不使用簡單的PDA培養基，培養基的配方不可固化，可經常改變。低海拔地區，瓊脂培養基的滅菌不建議采用0.15 MPa、60～90 min的“高壓超級滅菌法”（一種不科學的方法）。不建議在滅菌后的培養基表面尚有明顯水珠時接種。培養好的母種不宜長時間存放在冰箱中。

3 二級菌種（原種）的生產技術

3.1 培養基配方

小麥70%～75%，稻殼3%～5%，闊葉樹木屑或玉米芯18%～23%，碳酸鈣1%，石膏1%，含水量60%～62%，pH自然。

3.2 原料預處理

小麥用清水浸泡24～48 h或煮沸20 min，撈起、瀝干，干/濕為1/1.8～2.0；稻殼浸泡24 h，撈起、瀝干；木屑、玉米芯加水拌勻，堆制發酵2周后使用。堆制方法：玉米芯、木屑、稻殼混合，加1.2倍水攪拌均勻，建1～1.2 m高的堆，蓋厚膜發酵，第6～7天翻堆1次，發酵5天后再次翻堆，4天后攤開晾曬1～2天即可使用。

3.3 拌料、裝瓶、滅菌

將各種輔料與小麥按比例混合均勻，水分含量以用手擠壓有水跡而不下滴為度。裝料采用新的體積為750～2 000 mL的帶通氣蓋聚丙烯菌種瓶，不能使用舊的菌種瓶、玻璃瓶和通氣蓋。將培養料裝入菌種瓶中，用清水清洗瓶口、底部和外表面，透氣蓋封口。采用高壓滅菌鍋滅菌，121～125°C下保持2～3 h，自然冷卻。

3.4 接種、培養

接種方法：在超凈工作臺上，用75%乙醇噴灑工作臺，放入待接菌種瓶，點燃酒精燈，在無菌條件下接入一級斜面菌種，斜面長度5～10 mm，每支試管斜面菌種接5～6瓶原種。

接種后置于20～23°C培養箱中避光培養15～25天，菌絲滿瓶后立即使用。

3.6 注意事項

小麥的處理，浸泡和蒸煮擇一即可，不同時進行，因為小麥的干/濕比達到1/3時，其含水量會超過70%，滅菌后易發生表皮破裂而黏連，菌絲無法長滿全部培養料。宜選用厚皮的小麥，如常見的紅皮小麥；而薄皮的小麥表皮容易在蒸煮、滅菌過程中破裂，影響菌種質量。經驗豐富的技術人員一般會采用純麥粒生產原種。不宜使用長期存放的木屑、玉米芯等原料。長滿的原種須盡快使用。

4 三級菌種（栽培種）生產技術

4.1 培養料配方

小麥70%～75%，木屑或玉米芯一種或兩種的混合物18%～23%，稻殼5%，碳酸鈣1%，石膏1%，輔料含水量60%～62%，pH 6～7。小麥和輔料的預處理方法與原種相同。

4.2 拌料、裝袋

預處理后的原料攪拌均勻，水分以手指擠壓有水跡而不成水滴為度。裝袋后套上口圈和封口膜或用報紙封口。將料袋立放于滅菌框中，每框裝12袋或16袋。當天拌料當天裝袋、滅菌。

常壓滅菌使用聚乙烯料袋，高壓滅菌采用聚丙烯料袋，大小為17～24′40～50（cm），每袋裝濕料量為0.8～2.0 kg。

4.3 滅菌、接種

可采用高壓滅菌和常壓滅菌兩種方法，將裝滿料袋的滅菌框水平擺放在滅菌架上，單層擺放。高壓滅菌在121～125 °C下保持3～4 h；常壓滅菌在100～105 °C下保持12～16 h。待自然冷卻到60 °C以下時打開滅菌鍋，推出滅菌架，直接推入與滅菌鍋連接的冷卻室，開制冷機冷卻到25°C以下。接種在無菌條件下進行，于料袋一端接入原種后用薄膜或報紙封口。每瓶原種接30～50袋栽培種，具體根據原種的容量確定。

4.4 培養及檢測

接種后的菌袋先在22～24°C避光條件下培養10天，后在18～20°C下避光培養7～10天，使菌絲長滿袋，表面形成菌核。

培養料長滿菌絲后，表面呈黃褐色、褐色、紫褐色，較堅實、不松散，敲擊聲音清脆，表面分布不均勻、大小不等的黃褐色斑塊狀菌核。掰開菌種培養料有明顯的羊肚菌菌絲香氣，無霉味、酸味、氨味、土腥味等異味，無霉斑、雜色斑、菌絲斑、石灰粉白斑及紅色菌斑。

4.5 運送與存放

運送菌種的車輛經消毒劑消毒處理后再裝入放有菌袋的周轉框，菌袋要在框中分層碼放，不得直接堆碼在車內。須在低溫時段將菌種運送到栽培現場，長途運輸必須使用冷藏車。

尚未運送的菌袋暫時存放在經過消毒的潔凈室內，不堆碼存放，不可放在日光下或被雨水淋。

4.6 播種

羊肚菌栽培種應在長滿菌袋后7～10天內播種，不使用老化、陳放的菌種。

4.7 注意事項

栽培種生產前要先做好場地的消毒殺菌工作，特別是連續生產3年以上的老廠房、舊培養室。否則在菌種培養過程中極易出現鏈孢霉、青霉、木霉等雜菌污染，造成慘重損失。

不宜在栽培種原料配方中加入土壤、河沙、腐殖土、樹葉、食用菌廢料、牛糞粉及彩色金屬片等物料。盡量多用小麥，少用石灰、磷肥、麩皮、玉米粉、黃豆粉、蔗糖等輔料。宜使用北方的玉米芯粉碎料，不使用南方地區生產的被雨水淋濕、易霉變的玉米芯。輔料使用發酵料，不要用生料直接拌料裝袋。禁止使用多菌靈、百菌清、硫酸銅、激素、各種殺蟲劑或防蟲劑等。

菌種培養過程中要注意防止高溫燒菌、雜菌污染、害蟲滋生及菌絲老化等問題。檢測菌袋溫度時，要把溫度計插在2個貼緊的菌袋之間，不要懸掛在墻上或培養架上檢測。培養料溫度如超過24 ℃，應及時采取加大通風量、延長通風換氣時間、拉大菌袋間距等措施降溫。培養室放入新接種的菌袋前，須經消毒劑、殺蟲劑處理，密閉1～2天后打開通風1天，再放入菌袋，之后每5～7天進行一次消毒和殺蟲。

盡量使用大的菌袋或容器制作栽培種，不用玻璃瓶和小菌種袋。菌袋封口不用透氣蓋、棉塞、泡沫等。菌袋通氣口太小、裝料過于緊實、培養料水分含量過高，都會導致袋內通氣不足，菌絲體無法長滿袋，有的還容易在袋內形成厚菌皮，消耗大量營養物質，導致菌種活力減弱，影響產量。用報紙、薄膜封口，菌袋內通氣良好，菌絲生長速度快，易在菌袋表面形成大量肉眼可見的菌核。

高壓滅菌達到規定時間后，自然冷卻至80°C以下后開鍋；常壓滅菌必須自然冷卻到60°C以下開鍋，切不可剛到滅菌時間就強行開門排氣、冷卻。

5 營養料袋的制作

5.1 配方及用量

麥粒60%～75%，木屑或玉米芯一種或兩種的混合物18%～23%，谷殼5%，石膏1%，碳酸鈣1%，含水量62%～64%，pH自然。原料預處理方法同原種和栽培種。

一般每畝擺放2 400～3 000袋，擺放前1～2天制備。制作時將原料拌勻后裝入大小為12～14′24～35（cm）的聚乙烯或聚丙烯料袋中，用橡皮筋、細繩或扎口機扎緊袋口，平鋪裝入大的滅菌網袋或蛇皮袋中，扎口。每個大滅菌網袋中裝營養料袋80～100袋。

5.2 滅菌與大田培養

大滅菌網袋單層或2層水平錯位擺放在滅菌架上滅菌。高壓滅菌121～125 °C保持3～4 h，常壓滅菌100～105 °C保持12～16 h。自然冷卻后，將整個滅菌網袋裝車，立即運送至羊肚菌栽培大田，在1～2天內將全部營養料袋打孔或切口后孔口、切口緊貼菌床擺放在菌床上，不得長期存放。

5.3 注意事項

輔料宜使用發酵料，不使用生料或長期存放的舊料拌料裝袋；切不要用堆碼式、無層架的“蒙古包”式進行滅菌；每畝栽培種、營養料袋使用的小麥數量宜在400 kg以上。

營養料袋內不接入任何菌種，是無菌培養料。羊肚菌菌絲可以從土壤中竄到已經打孔或有切口的營養料袋內，能夠長滿全部的營養料袋，形成肉眼可見的菌核。羊肚菌菌絲吸收料袋內部小麥中的營養物質，供土壤內菌絲體生長，儲存營養物質，滿足生長大量子實體對營養物質的需求，保證產量。理論上，羊肚菌子實體產量在一定范圍內與營養料袋數量呈正相關關系。羊肚菌大田栽培要求必須使用營養料袋，無營養料袋也可能會出菇，但形不成產量。營養料袋的擺放時間不能太遲，以在播種后0～15天為宜，超過30天或更久，會導致嚴重減產或絕收。規模化的栽培者最好多準備一些常壓滅菌鍋，多地點、集中時間生產出營養料袋，及時擺放入田。

用營養液替代固體營養料袋，也可以出菇，但由于目前營養液的配方、施用量、施用時間等技術參數還不夠準確，不適宜大面積推廣。用煮熟的土豆、番薯、小麥、玉米等的顆粒直接放在羊肚菌菌床的土壤表面，也能夠出菇并獲得一定產量，但蒸煮工作量過大，無法滿足規模化生產的需求，也不適宜推廣。

中國發明授權專利ZL201610334688.6公開了一種無營養料袋的栽培方法，實質是把栽培種直接放在土壤表面培養羊肚菌子實體，其栽培種的用量為常規用種量的5～10倍或更多，菌種生產壓力巨大，生產成本很高，規模化生產的新鮮子實體每畝產量已達到500～1 000 kg，生產經濟效益顯著，已經有許多機構在推廣應用。

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The large-scale production technology of Morel spawn

He Xinsheng Wang Maohui Wang Jue Wang Yipu Li Xiaoyong Wang Yazhou Zhu Xiaoqin Zhao Miao

(1. Southwest University of Science and Technology, School of Life Science and Engineering, Mianyang, Sichuan, 621010, China; 2. Mianyang Zoe Precision Technology Co., Ltd. Youxian District, Mianyang, Sichuan 621039, China)

The production of morel spawn is the first step in morel cultivation. The key to the success of morel production is to use high-quality strains of all levels and a sufficient number of spawn and nutrient bags with wheat as the main raw material. This article introduces the large-scale production technology and production process ofspawn from the aspects of original spawn selection, mother spawn production, original spawn production, cultivated spawn production and nutrient bag production, and lists the specific quantity parameters and various precautions.

Morel; spawn selection; cultivated spawn; production technology; matters needing attention

S646

B

2095-0934（2020）05-346-05