RhoGDI2和NDRG2在肝癌組織中的表達及與預后的相關性*

石林昌 王雅冰 趙孟杰 孫景武

河北中石油中心醫院肝膽外科 (河北 廊坊， 065000)

肝癌是臨床常見的消化系統惡性腫瘤之一，惡性程度高，預后差，死亡率目前位居所有惡性腫瘤第3位。乙型肝炎病毒感染是國內造成肝癌發病率升高的主要原因，肝癌的早期診斷及治療對于改善患者預后具有重要意義[1]。傳統的診斷方法是采取甲胎蛋白(AFP)進行預測，但是診斷準確性與可靠性值得商榷。近年來分子生物學指標的發展使得越來越多的指標在臨床應用，Rho GTP酶屬于同細胞骨架、細胞黏附關系密切物質，表達升高會造成腫瘤發生侵犯與轉移，鳥嘌呤核苷酸抑制因子2(RhoGDI2)則是調節Rho GTP 酶活性的重要因子；N-myc下游并受其調節基因2(NDRG2)則是臨床新近發現的基因家族，同細胞增殖與分化關系密切，可以參與腫瘤發生、發展過程，與細胞生長與分化關系密切[2]。本研究分析了RhoGDI2和NDRG2在肝癌組織中的表達，以期為臨床提供指導，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年6月至2019年8月在我院治療的肝癌患者89例，其中男51例，女38例；年齡30～61歲，中位年齡50.40歲。術中采集肝癌組織及癌旁組織，即距離腫瘤邊緣超過5 cm作為對照。納入標準：①均經病理檢查確診；②術前未行放化療等抗腫瘤治療；③隨訪資料保存完整。排除標準：①合并有其他惡性腫瘤者；②繼發轉移性肝癌者。

1.2 免疫組化染色 組織固定、石蠟包埋，切成厚度4 μm切片，免疫染色按照試劑盒流程操作，按照脫蠟、脫水、抗原修復、封閉、加抗體、染色步驟在鏡下觀察，陰性對照采用PBS代替一抗，觀察RhoGDI2、NDRG2蛋白表達情況。每張切片隨機選取5個視野，每個視野計數200個細胞。①染色強度：無著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分，棕褐色為4分；②陽性細胞比例低于25%為1分，26%～50%為2分，51%～70%為3分，超過70%為4分。①+②最終得分≥3分為陽性表達。

1.3 統計學方法 數據分析采用SPSS19.0軟件，陽性表達率比較使用χ2檢驗，RhoGDI2和NDRG2表達相關性采用Pearson相關分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 肝癌和癌旁組織RhoGDI2、NDRG2表達 肝癌組織RhoGDI2陽性表達率為69.66%，明顯高于癌旁組織的28.09%(P<0.05)，而NDRG2陽性表達率為22.47%，明顯低于癌旁組織的97.75%(P<0.05)。見插頁彩圖1。

2.2 RhoGDI2、NDRG2表達與臨床病理關系 Ⅲ～Ⅳ期患者RhoGDI2陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，而NDRG2陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)；有淋巴結轉移患者RhoGDI2陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移患者(P<0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理特征患者的RhoGDI2、NDRG2陽性表達率 [例(%)]

2.3 相關性分析 肝癌組織RhoGDI2與NDRG2表達的相關分析結果顯示，RhoGDI2與NDRG2表達呈負相關(rs=-0.406，P<0.05)。

2.4 RhoGDI2、NDRG2表達與患者復發、預后的關系 截止隨訪結束日2019年10月，共有36例患者復發，復發率為40.45%；復發患者RhoGDI2陽性表達率明顯高于無復發患者(P<0.05)，而NDRG2陽性表達率明顯低于無復發患者(P<0.05)。29例患者死亡，60例患者存活；死亡患者RhoGDI2陽性表達率明顯高于存活患者(P<0.05)，而NDRG2陽性表達率明顯低于存活患者(P<0.05)。見表2。

表2 RhoGDI2、NDRG2表達與患者復發、預后的關系 [例(%)]

3 討論

原發性肝癌屬于臨床常見的消化系統惡性腫瘤，是目前世界范圍內死亡率最高的癌癥之一，目前在我國肝癌發病率呈現逐年升高的趨勢，預后極差，有報道顯示診斷后5年生存率不足5%[3]。目前認為肝癌的發生和發展是多因素、多階段的過程，一般認為肝細胞惡性腫瘤主要由乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒慢性感染或者黃曲霉毒素感染造成肝硬化進而演變而來。由于肝癌發病隱匿，臨床癥狀不典型，因此多數患者就診時已處于中晚期，外科手術一直是治療肝癌的首選方法，但是外科手術治療也無法達到完全根除腫瘤的目的，術后出現復發和轉移會影響患者預后[4]。研究發現腫瘤干細胞是慢周期細胞，大部分處于細胞分裂周期的G0和G1周期，一旦受到外界刺激情況下將表達具有化學抵抗分子或者活化的信號通路，導致進行細胞分裂增殖周期，但是在手術后未被殺死腫瘤干細胞會進入到細胞周期并參與調控腫瘤細胞增殖和分化過程，也是術后導致肝癌復發的重要原因[5]。病理學檢查一直是肝癌診斷的金標準，但是在部分患者中可能出現假陰性率，而且在操作的過程中也可能導致腫瘤破裂引發播散種植的風險[6]。近年來化學腫瘤標記物檢查在臨床應用越來越廣泛，其中AFP是原發性肝癌應用最廣泛的標記物，但是近年來研究顯示其缺乏敏感性與特異性，尤其是在肝炎、肝硬化患者病變急劇惡化時AFP數值也會顯著升高，而且在妊娠或者炎癥反應過程中AFP也存在假陽性的結果，而在部分原發性肝癌患者中也存在AFP陰性或者數值較低的情況，但是目前臨床尚無更為可靠地血清標記物取代AFP在肝癌診斷中的低位[7，8]。

研究顯示肝癌的發生發展涉及多個分子通路，牽涉的基因較多，而且越來越多的研究希望相關基因可以作為靶點，對肝癌進行早期診斷并開展治療[9]。NDRG2在正常組織中廣泛表達，但是在腫瘤組織中幾乎不表達，而且表達的量與器官成熟程度具有正相關關系，成熟度越高且增殖能力越低的細胞中表達更多。一方面該基因可以參與細胞的分化過程，有報道指出NDRG2能夠減弱轉移性結腸癌細胞浸潤過程，同時可以抑制裸鼠轉移酶的活性，提示其在誘導分化與逆轉表型抑制腫瘤細胞轉移具有重要意義[10]。另一方面該基因可以參與應激反應，通過模擬缺氧條件造成細胞發生氧化應激反應，可以誘發形成活性氧通過信號轉導促進相關基因表達，而且腫瘤發生后會啟動NDRG2啟動子活性并在細胞惡性轉化的過程中會抑制NDRG2表達[11]。RhoGDI2屬于Rho GTPases 蛋白家族重要的調節因子，可以對該蛋白家族分布與活性狀態進行調節，對細胞的分裂、形態改變、血管侵犯等多種生物學行為進行影響[12]。研究發現RhoGDI2在多種腫瘤組織中形成異常表達過程，該因子可以和各種受體、解離因子之間相互作用，通過促進Rho GTPases 釋放的蛋白質并運送至細胞膜并產生激活作用發揮解離因子效果[13]；同時RhoGDI2在內皮細胞中可以在酶作用下發生磷酸化過程，研究發現其表達會造成腫瘤細胞對失巢凋亡敏感程度，腫瘤細胞由于喪失和其他細胞黏附造成凋亡信號通路表達不通，因此腫瘤細胞極易發生轉移[14，15]。

本研究顯示，肝癌組織RhoGDI2陽性表達率明顯高于癌旁組織，而NDRG2陽性表達率明顯低于癌旁組織，說明在肝癌組織中存在RhoGDI2表達升高，NDRG2表達降低。Ⅲ～Ⅳ期患者RhoGDI2陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，而NDRG2陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期患者；有淋巴結轉移患者RhoGDI2陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移患者，說明隨著肝癌患者分期越晚且出現淋巴結轉移患者RhoGDI2陽性表達率更高，而分期越早的肝癌患者NDRG2陽性表達率越低。通過相關性分析發現，RhoGDI2與NDRG2表達呈負相關，說明兩者同肝癌發生具有一定的關聯。本組研究還發現，復發患者RhoGDI2陽性表達率明顯高于無復發患者，而NDRG2陽性表達率明顯低于無復發患者，同時死亡患者RhoGDI2陽性表達率明顯高于存活患者，而NDRG2陽性表達率明顯低于存活患者，說明肝癌患者復發、存活與RhoGDI2、NDRG2表達具有一定的聯系。本研究優勢在于證實了RhoGDI2與NDRG2表達同肝癌患者發生和發展具有一定的關系，對患者預后具有一定的判斷意義，但是本研究隨訪時間短，入組病例有限，因此還需擴充樣本量、長期隨訪深入研究論證。