紫外分光光度法測定刺梨原汁中總黃酮含量的研究

耿寧　劉易偉　卿云光

摘要：建立一種操作簡單、結果可靠、測定成本較低的檢測刺梨原汁中總黃酮含量的方法。通過實驗驗證，方法定量限為7.00mg/100g，在常見樣品濃度和檢出最高限的測試結果變異系數（CV值）分別為2.3%、1.9%，4個刺梨原汁樣品中總黃酮含量分別為80.24、72.34、86.69、74.39mg/g，平均回收率為100.3%。

關鍵詞：刺梨原汁;總黃酮;含量測定

刺梨是貴州的特色食品資源[1]，含有豐富的活性成分黃酮類物質，貴州省生產的刺梨鮮果，加工產品主要以刺梨原汁為主，然后再利用刺梨原汁加工成濃縮汁、飲料等多種營養食品和保健品[2]，刺梨原汁中含有豐富的活性成分總黃酮，是一種很強的抗氧劑，可有效清除體內的氧自由基，阻止細胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發生，改善心腦血管疾病的癥狀[3] [4]。建立一種適合刺梨原汁中總黃酮含量的測定方法，為檢測機構和相關企業提供更適合的檢測方法，提高檢測效率，也對于規范刺梨產品加工企業質量管理、強化市場監管、促進貴州刺梨產業的健康發展具有重要意義和作用。

一、儀器、試劑及材料

1.儀器

TU-1901紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司。

2.對照品

蘆丁對照品（供UV法測定，含量為92.4%），中國食品藥品檢定研究院。

3.試劑

無水乙醇、甲醇，均為分析純。

4.樣品

“刺梨原汁”（貴州天瀧集團投資開發有限公司，樣品1）;“刺梨原汁”（貴州貴定敏子食品有限公司，樣品2）;“刺梨原汁”（貴州山果王健康實業有限公司，樣品3）;“刺梨汁”（貴州綠視野綠色開發有限公司，樣品4）。

二、方法與結果

1.試樣制備

稱取1g（精確至0.01g）的試樣至25ml容量瓶中，用乙醇定容，搖勻后，超聲提取20min，室溫靜置30min，取上清液1mL于25mL比色管中，用甲醇定容后待測。

2.標準曲線的制備

以蘆丁為對照品，精確稱取蘆丁標準品109.7mg（含量為92.4%）于100mL容量瓶內，用甲醇定容至刻度，得1.014mg/mL蘆丁儲備溶液。依次稀釋至濃度為1.01μg/mL、2.03μg/mL、3.04μg/mL、4.06μg/mL、5.07μg/mL、6.08μg/mL蘆丁對照品溶液，以甲醇溶液為零點，于360nm處測量吸光度。以蘆丁對照品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制校準曲線，線性方程為y=0.0299x-0.0003，R2=0.9999，表明蘆丁含量在0～6.08μg/mL范圍內具有良好的線性關系，經計算，該方法在0～380mg/100g范圍內，樣品中總黃酮濃度與吸光度呈良好的線性關系。

3. 檢出限（LOD）和定量限（LOQ）實驗

樣品空白獨立測試20次實驗，計算結果為0.63 mg/100g，計算標準偏差（s）為2.278×10-16。

根據LOD=樣品空白平均值+3s，即LOD=0.63+3×2.278×10-16，計算結果保留小數點后兩位，LOD=0.63 mg/100g。

為增加數據可信度，且檢測樣品的結果范圍為55～90 mg/100g，取LOQ值=10×LOD值，即LOQ=6.30 mg/100g，最終取值LOQ=7.00mg/100g。

4.精密度實驗

精確稱取1號樣品12份，其中6份分別加入3mg蘆丁對照品，按照“1.試樣制備”方法處理并測定，結果如表1所示。結果顯示本方法在常見樣品濃度和檢出最高限的測試結果變異系數（CV值）分別為2.3%、1.9%，均符合GB/T 27404-2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》中相關規定，表明方法精密度良好。

5. 樣品檢測及回收率實驗

分別取樣品1、2、3、4號樣品做加標回收試驗，然后按照“1.試樣制備”處理，結果如表2所示，樣品1、2、3、4中總黃酮含量分別為80.24、72.34、86.69、74.39mg/mL，且平均回收率為100.3%，表明方法準確性好。

三、結語

綜上所述，本文以蘆丁為對照品，通過紫外分光光度法測定總黃酮含量，操作簡單、結果可靠、測定成本較低，在總黃酮含量為7～380mg/100g范圍內，精密度良好，測試結果準確，適用于刺梨原汁中總黃酮的測定。測試樣品1、2、3、4中總黃酮含量分別為80.24、72.34、86.69、74.39mg/100g，而相關報道中提到刺梨鮮果中總黃酮含量高達0.89%[4]，說明在加工過程中，刺梨鮮果中的大部分黃酮類化合物殘留在刺梨果渣內，如何將總黃酮類化合物更有效地提取到刺梨原汁中，本方法可以為下一步研究奠定基礎。

參考文獻：

[1] 貴州省刺梨發展現狀分析[J]. 劉易偉，楊舒清.? 食品安全導刊（下旬刊），2020，（第2期）

[2].黔南州刺梨產業鏈分析[J]. 羅桃，王玉奇，陳文本.? 中國林副特產，2020，（第5期）：106-107

[3] 刺梨中活性物質的提取與性能探討[J].陳代秀，夏偉麗，胡思前，郭艷華，張玉敏.? 化肥設計，2020，58（02）：13-17

[4] 刺梨黃酮的精制及其抗氧化活性比較[J].張匯慧，吳彩娥，范龔健，等. 南京林業大學學報（自然科學版），2015，39 （3）：101-105

[5] 刺梨總黃酮的含量測定及資源利用[J].杜薇，劉國文. 食品科學，2003（01）：112-114.

作者簡介：耿寧 ，貴州省黔南州都勻人，食品安全檢測員，工程碩士。