異常糖鏈糖蛋白在膽道良惡性腫瘤鑒別診斷中的價值

黃娜娜，顧康生，張逸寅,戴映，張騰騰

異常糖鏈糖蛋白(TAP)是蛋白質糖基化異常，糖基化修飾不完全或新的糖基轉移酶被激活產生新的糖基化而形成的。細胞癌變時發生特異性糖鏈變化，促使多種異常糖鏈糖蛋白形成，臨床可以使用特殊技術檢測這些異常蛋白來區分疾病良惡性，使腫瘤早期檢測成為可能[1]。

近年來，有多項研究發現，在肺癌、鼻咽癌、乳腺癌等多種原發性惡性腫瘤中可檢測到異常糖鏈糖蛋白的表達，為異常糖鏈糖蛋白輔助惡性腫瘤診斷提供依據。TAP對于多種惡性腫瘤的早期診斷具有較高的敏感度與特異度，具有較高的診斷價值[2-5]。 但目前TAP在膽道惡性腫瘤(biliary tract cancer,BTC)方面的研究較少，臨床證據并不完善，本研究旨在觀察異常糖鏈糖蛋白在膽道惡性腫瘤中的表達，分析其對膽道惡性腫瘤的診斷價值及臨床意義，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性收集 2019年 1月—2020年 4月安徽醫科大學第一附屬醫院腫瘤內科收治經病理證實為膽道惡性腫瘤(BTC組)患者70例的臨床資料，其中男36例，女34例，年齡31～87(59.91±10.73)歲；病程0.2～6.0(1.75±1.60)年;腫瘤類別：膽囊癌24例，膽管癌46例；既往史：膽道手術史20例，無手術史50例；70例患者均無家族遺傳性病史。另按照隨機對照原則抽取同期醫院治療的膽道良性疾病患者100例為對照組，其中男55例，女45例，年齡 19～83 ( 52.32± 15.02)歲；病程0.3～5.0(2.21±1.65)年;患者均無家族遺傳病史。2組患者性別、年齡和平均病程比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準: ①所有患者病理已確診為 BTC；②年齡>18歲。(2)排除標準: ①年齡<18歲; ②合并其他腫瘤者；③未行放化療；④合并嚴重感染及心、肝、腦等臟器嚴重器質性病變者；⑤妊娠期及哺乳期婦女。

1.3 觀察指標與方法

1.3.1 臨床資料收集：收集BTC患者性別，年齡，功能狀態評分(PS)，腫瘤部位，臨床分期，病理分型及分化程度，肝轉移情況及腫瘤切除病史等。

1.3.2 TAP和CEA檢測：采集2組患者清晨空腹靜脈血10 ml，離心后留取血漿備用。TAP使用浙江瑞生醫療儀器廠提供的診斷儀和TAP檢測促凝劑、配套試劑盒，并嚴格按照試劑盒說明書進行檢測。電化學發光法檢測CEA， 試劑盒購自羅氏診斷產品上海有限公司,所有操作按照相關 SOP文件規范操作。

1.4 TAP及CEA陽性判斷標準[5]TAP截斷值范圍：團聚物面積<121 μm2為 TAP 正常/無明顯團聚物(陰性)，面積121～225 μm2為異常/團聚物較小(陽性)，面積>225 μm2為異常/團聚物較大(陽性)。CEA正常參考范圍：0～5.00 U/ml，>5 U/ml為陽性，≤5 U/ml為陰性。

2 結 果

2.1 TAP結果判讀 TAP團聚物為近似圓形，立體感較強，顆粒中間微發亮。通過測量團聚物的面積，得出具體數值，見圖1。

2.2 2組TAP和CEA表達水平及陽性率比較 BTC組患者外周血TAP和CEA的表達水平及陽性率均明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.01)，見表1。

注：A.陰性 (<121 μm2)；B.陽性 (121～225 μm2)；C.陽性 (>225 μm2)

2.3 BTC患者不同臨床特征中TAP和CEA表達比較 TAP在不同性別、年齡、PS評分、腫瘤部位、病理分型、神經及脈管侵犯和腫瘤切除史中比較差異均無統計學意義(P>0.05)，而在膽道惡性腫瘤分期Ⅲ～Ⅳ期、發生肝轉移者外周血TAP表達高于Ⅰ～Ⅱ期及無肝轉移者，差異均有統計學意義(P<0.05)。 CEA在不同臨床特征中表達比較差異均無統計學意義 (P>0.05)，見表2。

2.4 外周血TAP和CEA診斷BTC的ROC曲線分析 ROC曲線分析顯示，TAP、CEA及聯合檢測診斷BTC的AUC分別為0.913、0.817、0.953，此時TAP截斷值為124.500 μm2，CEA的截斷值為2.590 U/ml，敏感度分別為83.7%、70.0%、84.3%，特異度分別為97.0%、83.0%、97.0%；約登指數分別為0.807、0.530、0.813； 單項檢測中TAP的敏感度及特異度均高于CEA，聯合檢測的敏感度高于單獨檢測，TAP和聯合檢測的特異度均高于CEA，見表3、圖2。

圖2 TAP和CEA診斷BTC的ROC曲線

表1 2組患者TAP和CEA表達水平及陽性率比較

表2 BTC患者外周血TAP和CEA陽性率在不同臨床特征中比較 [例(%)]

表3 TAP、CEA和聯合檢測診斷BTC的ROC曲線分析

3 討 論

膽道惡性腫瘤(BTC)是由肝內膽管上皮細胞、肝外膽管上皮細胞、膽囊上皮細胞和壺腹上皮細胞引起的一類異質性腫瘤[6]。膽道惡性腫瘤相對罕見，占成人所有惡性腫瘤的0.7%，占消化道惡性腫瘤的4%[7]，但其發病率最近在全球范圍內呈上升趨勢。到目前為止，膽道惡性腫瘤的唯一治療方法是手術切除；然而大多數膽道惡性腫瘤(>65%)在最初診斷時被認為是不可治愈的[8-10]。此外，大多數膽道惡性腫瘤即使在根治手術后也常復發。晚期膽道惡性腫瘤的預后，包括不能切除的局部晚期或轉移性疾病患者，其5年總生存率(OS)小于10%[11-13]。因此如何提高膽道惡性腫瘤的早期檢測率是目前臨床重要的關注點之一，針對膽道惡性腫瘤特異性的生物標志物研究較少，因此，尋找能夠輔助診斷膽道惡性腫瘤的生物標志物意義重大。

研究表明，蛋白質糖基化異常是導致正常細胞癌變的重要原因之一，同時也是誘導腫瘤侵襲轉移的關鍵事件[14]。蛋白質糖基化異常可促使異常糖鏈糖蛋白的表達，當表達量達到一定程度后，可以在外周血中檢測到[15-16]。目前，異常糖鏈糖蛋白主要用于腫瘤的術前分期、術后療效監測和復發的早期診斷[17-19]。許多腫瘤標志物在目前的臨床檢測中是無法檢測到的，但TAP 檢測是一種特殊的識別技術，TAP檢測試劑盒中含有促凝劑，該檢測試劑盒輔助促進了多種異常糖鏈的相互聚集形成晶體團聚體，而沒有 TAP 物質存在的血液無法形成團聚體。TAP檢測系統中，使用圖像分析儀或生物顯微鏡可以觀察到與未使用TAP的凝固血液圖像的差異。TAP檢測可以將二十多種與腫瘤相關的異常糖鏈進行一次組合檢測，聚集多種腫瘤信號，大大提高了腫瘤檢測的敏感度和特異度。

相關研究發現[20-21]，在肺癌外周血中異常糖鏈糖蛋白的表達明顯升高，可輔助肺癌的早期診斷，對于肺癌及其癌前病變的鑒別及篩查有重要的診斷價值，徐陽[22]發現甲狀腺癌患者 TAP的表達明顯高于甲狀腺良性結節患者，可作為甲狀腺良惡性腫瘤鑒別診斷的指標，診斷效能良好。本結果顯示，在膽道惡性腫瘤組TAP檢測陽性率為87.1%,明顯高于膽道良性病變組，TAP和CEA聯合檢測可提高診斷效能，特異度達97.0%，與上述的各項研究結果相似。Neela等[23]研究已發現，Ras-Raf-MAPK信號轉導途徑激活增強N-乙酰葡萄糖轉移酶V(GnT-V)活性，從而使E-鈣黏附素的β-1，6-N-乙酰葡萄糖表達增多，降低腫瘤細胞間黏附性，腫瘤細胞從原發灶脫落而轉移，腫瘤細胞膜上的β-1，6-N-乙酰葡萄糖胺分支結構表達增加形成的異常糖鏈糖蛋白，促進腫瘤細胞的轉移。在本研究中，肝轉移的患者TAP表達水平明顯升高，證實了異常糖鏈糖蛋白促進腫瘤細胞的轉移，與Neela等[23]研究結果一致。中晚期膽道惡性腫瘤患者的TAP表達水平明顯升高，可能由于腫瘤負荷重，腫瘤細胞表面和最終釋放進入體液的異常糖鏈糖蛋白多，血清TAP陽性檢出率更高。另外本研究發現，如以TAP團聚物面積>225 μm2為截斷值診斷，膽道惡性腫瘤的特異度和陽性率為100%,但其較低的敏感度將限制其廣泛應用于臨床實踐。本研究受臨床病例數限制存在一定的局限性，可能存在臨床選擇性偏倚。

綜上所述，異常糖鏈糖蛋白可以作為鑒別診斷膽道良惡性腫瘤的生物標志物，并具有較好的診斷效能，與CEA聯合檢測可提高診斷的敏感度。對于異常糖鏈糖蛋白在膽道惡性腫瘤的發生、發展中的分子作用機制有待進一步探究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

黃娜娜：設計研究方案，實施研究過程，資料收集，進行統計學分析，論文撰寫; 顧康生:提出研究思路，分析試驗數據，論文審核;張逸寅：實施研究過程；戴映、張騰騰：實施研究過程、資料搜集整理