中藥驅螨軟膏劑癬螨靈的制備及質量評價

李思琪，程嘉奇，何先林，李龍嬌，薛小腧

(1.重慶三峽職業學院，動物科技學院，重慶 404155； 2.重慶幼兒師范高等?？茖W校，重慶 404047)

螨病在西南地區是動物體表高發寄生蟲病，據報道，西南地區養殖場內螨病的感染率高達60%以上[1]。螨病的感染將導致動物體表大面積脫毛，皮膚瘙癢，動物表現劇烈不安，食欲不振，會在各處進行摩擦，導致皮膚損傷。從而對動物生長、發育、繁殖造成極大危害以及養殖戶的養殖成本帶來影響。傳統治療藥物多為化學治療藥，長期使用過程中，能導致蓄積中毒，并且引發動物產品安全性問題，從而迫切需要新藥品的研發，降低西南地區螨病的感染率[2]。

在中醫上，螨蟲病被稱為疥癬、疥瘡，是一種人與動物常見皮膚病。中醫認為疥癬的感染雖在體表，但與內在臟腑、氣血有密切關系。若臟腑功能失調，經絡不利，氣血壅滯，濕、熱、蟲三邪乘機侵入，就會引起局部病變[3]?！饵S帝內經》中提出風為百病之長，皮膚為人體防御外界的第一道屏障。故風邪是皮膚病感染的第一個致病因素?！端貑枴り庩枒蟠笳摗分忻鞔_指出了出汗后，毛孔打開、腠理疏松、濕邪侵襲肌膚所致容易引起皮肉經脈疾病，所以濕邪也是導致疥癬發生的一個重要因素[4]。除此以外，肺火和心燥，導致氣血津液喪失，也會引起皮膚病問題。而螨蟲病因為瘙癢，動物常不停撓擦，皮膚會有潰爛，結痂，甚至皮膚出血，壞死等病理現象出現，故也需修復皮膚屏障。因此，在選用驅螨中藥中，主要以殺蟲抑菌、祛風、潤燥除濕、清熱解毒、活血生肌、潤滑皮膚作為中藥篩選理論。

考慮到規?；B殖動物數目眾多，外敷法方便實施，能節約人力成本，并且制備工藝條件較為簡單，便于推廣。因此，在選用制備方法時，主要以軟膏劑作為制備劑型。本試驗中以苦參、百部、大風子、蛇床子、老鸛草、羊毛脂、凡士林等為主要處方，并進行軟膏劑型的開發，以研制出一種易于涂抹、透氣性好、療效確切、性質穩定的中藥軟膏劑型。同時，根據《中華人民共和國獸藥典》(2015版)關于軟膏制劑的質量要求，對癬螨靈軟膏劑的制劑工藝、質量標準、制劑穩定性等進行了科學研究，為臨床動物螨病防治提供新型安全有效藥物治療奠定了試驗依據。

1 材 料

1.1 藥品與試劑 苦參、百部、大風子、蛇床子、老鹮草均購自北京同仁堂藥業公司；硬脂酸、單甘脂、凡士林、羊毛脂、液狀石蠟、氮酮、甘油、三乙醇胺、尼鉑金乙酯、丁二醇均購自山東優索化工科技有限公司；無水乙醇購自天津大茂化學試劑廠。

1.2 實驗動物 選取健康兔只16只，雌雄各半，體重(2.5±0.2)Kg；豚鼠6只，雌雄各半，體重(250±30)g，均由重慶醫科大學實驗動物中心提供。

1.3 實驗儀器 磁力攪拌器購自上海醫械機廠；旋轉蒸發儀購自北京萊博泰儀器股份有限公司；純水儀購自華創有限公司；電子恒溫水浴鍋購自力辰科技有限公司；電子天平購自上海蒲春有限公司。

2 制備方法

2.1 中藥組方比例 前期通過正交試驗數據分析，在中藥組方比例為大風子：百部：苦參：蛇床子：老鹮草1∶1∶1∶1∶1(低比例組)，1∶2∶2∶2∶2(中比例組)，1∶2∶2∶3∶3(高比例組)時，藥物浸膏得出率最高，成分析出值最大，且無毒性。通過將三組比例在臨床感染疥螨兔上分組治療比較，發現按照大風子10份，苦參、百部20份，蛇床子、老鹮草30份的組方，臨床療效最佳，皮膚愈合快，具有較高安全性。具體數據見下表1。

表1 復方制劑不同比例對兔疥螨病臨床治療效果對比試驗結果Tab 1 Comparative test results of different ratios of compound preparations in the clinical treatment of rabbit scabies

2.2 中藥浸膏制備 將五種中藥按照組方稱取，分別打成粉，過40目篩，將苦參、百部、老鹮草浸泡于蒸餾水中4 h，而大風子、蛇床子具有揮發油成分，浸泡于乙醇中更利于成分析出，分別浸泡于65 %乙醇中4 h。按1∶1比例分別稀釋煎煮3次，每次1 h，過濾，合并濾液，用1倍量無水乙醇，水提醇沉，靜置過夜。待分層后，取其上清液，置于旋轉蒸發儀上，85 ℃濃縮至半流體稠膏(50%)，然后將半流體稠膏置于80 ℃水浴鍋中加熱至稠膏。稠膏性狀以玻棒取濃縮藥液滴于干燥牛皮紙上，滴膏呈現珠狀，不擴散。測定相對密度為1.2～1.3 g/mL。具體中藥浸膏制備方法見圖1。

圖1 中藥成分提取流程圖Fig 1 Flowchart of extracting traditional Chinese medicine ingredients

2.3 中藥軟膏劑基質制備 制備中藥浸膏成分分析，油類成分較重，故癬螨靈軟膏采用O/W劑型作為基質。按文獻方法[5]稱取硬脂酸120 g、單甘脂35 g、凡士林25 g、羊毛脂60 g、液狀石蠟60 g、水溶性氮酮20 mL(2%)、甘油35 g作為油相，三乙醇胺4 g、尼鉑金乙酯1 g、丁二醇70 mL(7%)，1000 mL蒸餾水作為水相。將油相成分混合置于容器內，水浴加熱至完全融化，并于水浴鍋70 ℃內保溫；將三乙醇胺、尼鉑金乙酯、丁二醇加入蒸餾水中，加熱至完全溶解。將水相緩慢倒入油相中、用磁力攪拌器攪拌均勻直至冷凝，置于冰箱5 ℃冷藏備用。

2.4 中藥軟膏劑處方 稱取中藥浸膏25.0 g，軟膏劑基質100 g作為軟膏比例。將軟膏劑基質取出，80 ℃水浴融化，攪拌均勻后加入中藥浸膏，邊加邊玻棒攪拌，至乳化完全，放置常溫凝固即得。

3 質量檢測評價

3.1 穩定性檢查

3.1.1 離心試驗 將中藥軟膏劑放入離心管中，3000 r/min離心30 min后，取出觀察有無分層及破乳現象。

3.1.2 耐寒試驗 將中藥軟膏劑置于離心管內，置于-20 ℃冰箱24 h后，觀察有無分層破乳以及色澤、均勻性改變等現象。

3.1.3 耐熱試驗 將中藥軟膏劑置于離心管內，置于50 ℃恒溫箱6 h，觀察有無分層破乳、霉敗以及色澤、均勻性改變等現象。

3.1.4 加速試驗 將中藥軟膏劑裝入器皿內，置于溫度(45±2)℃、相對濕度為75%的恒溫培養箱中，連續放置3個月，定期考察、觀察有無分層破乳、霉敗以及色澤、均勻性改變等現象。

3.1.5 pH值檢查 抽取中藥軟膏劑，用pH酸度計測定酸堿值。

3.1.6 粒度檢查 將軟膏劑在玻片上涂抹薄片，置于顯微鏡下觀察。

3.2 中藥軟膏劑安全性研究 取體重(2.5±0.2)Kg白色健康家兔16只，雌雄各半，分為空白對照組1、空白對照組2、完整皮膚給藥組、破損皮膚給藥組。每組家兔耳部及頸部舔不到區域除毛，空白對照組2和破損皮膚組家兔在除毛區域用一次性刀片鈍性刮破表皮組織，直至輕微滲血為止。每組家兔脫毛區均勻涂抹中藥軟膏劑，每天涂藥2次，每次涂抹1 g?？瞻讓φ战M1和2涂生理鹽水2 mL作為陰性對照，并分籠飼養，連續用藥7 d，并在除去藥物后48 h內觀察皮膚有無紅斑和水腫現象，按照表2進行強度刺激、過敏和毒副反應評價[6]。

表2 皮膚刺激及毒副反應評價表Tab 2 Evaluation of skin irritation and side effects

同時，實驗開始及結束24 h內，1周后分別稱取每組家兔體重，分析不同組增重情況，主要公式如下：a.平均日增重(g)=(實驗末平均體重-實驗初平均體重)/實驗天數。

4 結果與分析

4.1 穩定性試驗結果 由表3和圖2可知，本品外觀性狀為淺棕色，質地細膩，手感良好，易于推開和涂抹，穩定性良好，鏡檢下未見大顆粒存在?；痉稀吨腥A人民共和國獸藥典》(2015版)有關軟膏項的要求。

表3 軟膏劑質量標準分析表Tab 3 Ointment quality standard analysis

圖2 癬螨靈軟膏穩定性實驗結果圖Fig 2 Test results of the stability of Xian Manling ointment

4.2 動物安全性試驗結果 刺激性試驗結果：完整皮膚給藥組受試兔未見充血和水腫，破損皮膚給藥組受試兔皮膚未出現水腫，僅表現出輕微紅斑，紅斑在6 h內均消褪。

毒副作用結果：在試驗1周內，受試兔精神良好，采食、尿液及糞便均正常，未見中毒或異常癥狀。

日增重結果：用藥1周內，四組家兔體重變化均不顯著(P>0.05)，且停藥一周后，每組家兔體重沒有下降。

5 討論與結論

螨病通過接觸傳播，常引起畜禽大批量發病，甚至引起大面積死亡，嚴重影響畜牧業的健康發展。目前螨病的疫苗仍處于研究階段，藥物防治螨病仍是主要方式[7]?；瘜W類藥物如有機磷類、擬除蟲菊酯類藥物有一定治療效果，但這些藥物本身對動物有較大毒性。而抗生素類藥物如伊維菌素、多拉菌素等，化學穩定性強，很難被分解，長時間殘留在畜產品中，會導致動物及消費者食物中毒[8]。因此篩選具有殺螨活性的天然藥物，并進一步制成外用制劑，表現出較高研究價值。

本軟膏劑組方經過前期篩選[9]和離體驅螨實驗觀察[10]，所萃取的大風子液、苦參液、百部液、蛇床子液及混合液對離體螨蟲均有一定殺滅作用，表明該制劑組方切實可行。在此基礎上，加入活血為主的老鹮草，具有活血生肌及促進創面早日愈合功效，通過前期動物實驗確定藥物組成比例，所組結果表明，該中藥混合液的臨床療效治愈率高，皮膚損傷愈合良好，確有臨床療效，但治愈率仍然未達到80%以上，且治愈所需時間較長，仍需進一步優化制備工藝以提升臨床療效。

鑒于在臨床生產中使用噴劑耗費時間較多，且每日需用藥3～5次，不利于在規模化畜禽養殖生產中使用，本研究利用羊毛脂和凡士林制作軟膏劑，具有潤澤保濕作用，減少創面刺激和維持創面安靜，有利于創面愈合。本試驗中軟膏劑由中藥萃取液和適當基質混合而成。基質為軟膏的賦形劑，對軟膏的質量和療效發揮都具有重要影響[11]。軟膏基質分為水溶性，油脂性和乳劑型基質[12]。本研究根據癬螨靈的主要藥物成分及適應證以及根據前期基質篩選，最終選擇乳劑中O/W劑型作為選擇基質。

中藥制劑雖有相對安全性，但中藥成分十分復雜，部分成分可能引發過敏或毒副作用[13]。而軟膏劑作為外用制劑，臨床用藥前毒理學評價主要考察其對皮膚刺激性[14]。但癬螨靈主要針對螨蟲病例，螨蟲感染臨床典型病變就是皮膚破潰，結痂。因此，本試驗中考慮到軟膏劑涂敷皮膚破潰處，是否會從皮膚破潰處大量進入血液出現全身毒副作用，故通過構建家兔的皮膚破損模型,確定了各試驗組家兔體重變化組間對比不顯著，全身癥狀無異常，未出現毒性反應；同時，皮膚測試結果，只有破損皮膚組有輕微刺激表現，但在6 h內消退完全，與文獻報告破損皮膚使用外用制劑的輕微刺激表現相一致[15]。由此可知，癬螨靈軟膏劑具有較好的穩定性，良好的安全性，無明顯毒副反應，具有深入研發前景。