淺析產蛋雞用藥物零日棄蛋期的制定

徐 倩，楊大偉，劉艷華，梁先明，董義春，蘇富琴

(中國獸醫藥品監察所，北京 100081)

休藥期是食品動物使用獸藥治療疾病后為保證食品安全而制定由停藥至屠宰的時間。產蛋雞(包括蛋雞、種雞及后備母雞)用藥除靶組織休藥期外還應考慮棄蛋期。由于蛋黃的形成時間約為12日，且不同時期的蛋黃形成是套疊過程，因此棄蛋期不為零日的藥物無法合理執行棄蛋，這使得只有零日棄蛋期的藥物才會獲得批準用于產蛋雞。國際上獲得批準的產蛋雞用藥物屈指可數[1](表1)，且部分獲批藥物因為其他安全性問題撤市，如含二氟沙星、恩諾沙星的獸藥產品。食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量(GB31650)[2]中蛋有殘留標志物及最高殘留限量的獸藥有：氨丙啉、氨苯砷酸、洛克沙胂、桿菌肽、黏菌素、溴氰菊酯、紅霉素、非班太爾、芬苯達唑、奧芬達唑、氟苯達唑、林可霉素、新霉素、土霉素、金霉素、四環素、哌嗪、大觀霉素、泰妙菌素和泰萬菌素。然而，有最大殘留限量并不意味著零日棄蛋期，本文結合歐盟發布的歐盟最大殘留限量(MRL)制定指南(EC470/2009)[3]、殘留消除指南以及FDA發布的食品動物用新獸藥對人類食品安全性評價的一般原則(FDA-2005-D-0155)[4]，闡述產蛋雞用藥物棄蛋期制定的考慮因素，尤其是ADI合理分配，為企業研發產蛋雞用藥物提供參考。

表1 部分已經獲得批準的零日棄蛋期藥物Tab 1 The information of some approved veterinary medicines with zero-withdrawal period

1 人類食品安全性評價的通用方法

為確保人類食用治療動物可食性組織的食品安全，通過危害識別、危害表征、暴露評估對食品動物用獸藥進行食品安全性評價。其過程一般包括通過系列毒理藥理實驗確定日允許攝入量、計算安全濃度、分配容忍度、制定最大殘留限量、計算休藥期。一般從毒理學、殘留化學和微生物學角度評估食品安全(圖1)[4-5]。雞蛋作為產蛋雞的可食性產品，其評價過程與一般評價規則相似，但也有其特點。

注：虛線表示該部分適用于具有抗菌活性的新獸藥。ADI是指日允許攝入量。ARfD是指急性參考劑量。圖1 人類食品安全性評價通用方法的流程圖Fig 1 Flow diagram illustrating the general approach for the human food safety evaluation

2 確定日允許攝入量

日允許攝入量用于預估獸藥殘留量，指人體終身每日攝入藥物而不引起可察覺的危害的最高劑量。根據藥物性質，ADI分毒理學ADI和微生物學ADI。毒理學ADI是基于毒理學終點的一套標準研究，包括急性毒性試驗、亞慢性毒性試驗、長期毒性試驗、繁殖毒性試驗、發育毒性試驗、遺傳毒性試驗、致癌性試驗，得出最保守的最大無作用劑量(NOEL)/無可見不良反應劑量(NOAEL)/基準劑量單側置信限下限值(BMDL)[4-5]，除以安全系數等于獸藥總殘留的毒理學ADI，安全系數一般為100，即人群變異系數(10)×物種間外推(10)。ADI旨在評價人類間歇性和長期暴露于相對低濃度的獸藥殘留物的口服毒性。對于抗菌藥物，確定抗菌藥殘留物是否能夠到達人類結腸并保持抗微生物活性，將根據定殖屏障的破壞程度和/或抗菌素耐藥菌群的增加幅度這兩個微生物學終點分別計算ADI，其中較小值為微生物學ADI。毒理學ADI和微生物學ADI進行比較，較小值為確定的最終ADI，如GB31650中阿莫西林ADI就是微生物學ADI。特別需要注意的是，只有非致癌物才能制定ADI。

評價具有在單餐或單日攝取食物后產生急性毒性的小分子獸藥和有特定急性毒理學相關的注射部位殘留，可采用藥理學終點的急性參考劑量(ARfD)。對于“非傳統”新獸藥，如生物技術衍生的新獸藥，包括某些酶、融合蛋白、合成激素和抗體等，可采用科學的替代方法分析毒理學問題。對于性激素類藥物，美國食品藥品管理局獸藥中心(FDA-CVM)通常用“允許遞增量”方法[4]，而不是ADI或容忍度進行評價。FDA認為，如果消費者食用肉類中所含激素量小于或等于人體每日激素產量的1%，預期不會產生生理影響。但在我國，農業農村部公告第250號將性激素列為食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物[6]。

3 ADI合理分配(分配容忍度)[4]

ADI作為消費者終身每日攝入的物質殘留總和，根據新獸藥的預期用途和每種組織的食用量(食物籃)，將為適用的可食性組織分配ADI。食物籃為肌肉300 g、肝臟100 g、腎臟50 g、脂肪或皮脂550 g、奶1500 mL、蛋100 g和蜂蜜20 g。FDA-CVM假定一個人每天除了食用全部可食性組織之外，還食用全部牛奶、全部蛋和全部蜂蜜。在產品開發早期，應考慮對ADI分配的需求，將一定的ADI保留，以滿足其他動物物種或可食性組織的預期需求。如果獸藥有可能用于植保產品或殺蟲劑，也應保留一定比例的ADI。如果獸藥不用于奶牛和產蛋雞，也可不分配ADI。ADI分配時，通常將20%ADI分配給蛋。

氟雷拉鈉溶液[7]作為產蛋雞螨蟲的治療藥物研發時，將約1/3ADI分配給可食性組織，27%ADI分配給雞蛋，40%ADI保留，以備將來分配給其他種屬靶動物，或分配給牛奶或蜂蜜。泰萬菌素可溶性粉[8]作為治療蛋雞支原體病研發時，ADI分配是基于豬和家禽組織已經單獨建立的MRLs數據，每個消費者理論上每日最大攝入量(TMDI)約61 μg/天，這相當于ADI的49%，也就是51%ADI還未使用。泰萬菌素將51%儲備ADI全部分配給蛋雞，相當于占用了牛奶和蜂蜜的ADI，理由是已經有4種大環內脂類抗生素批準用于奶牛，即替米考星、紅霉素、螺旋霉素和泰樂菌素，這四種抗生素與泰萬菌素抗菌譜相同，因此可以將泰萬菌素儲備給牛奶的ADI分配蛋雞使用。蜜蜂最主要的細菌性疾病是美國蜜蜂腐蛹病(AFB)和歐洲幼蟲腐臭病(EFB)，推薦土霉素治療，如果土霉素耐藥，可以用泰樂菌素。但是抗菌藥病不能根治AFB和EFB，歐盟對待AFB和EFB的首選處理方法是銷毀被感染蜜蜂，因此也可以將泰萬菌素的儲備給蜂蜜的ADI分配給蛋雞使用。另外，泰萬菌素也沒有被用作殺蟲劑或植物保護產品的可能。但是，蛋雞全部占滿儲備ADI還是存在現實風險的，也就是當泰萬菌素批準用于奶牛時，要重新評估是否仍能符合零日棄蛋期。可以探索的是行業達成共識，當奶牛和蜜蜂有藥可用時，是否可以將部分藥物讓給最難制定棄蛋期的產蛋雞使用。

4 計算安全濃度

安全濃度是指人類一生中每天從每種可食性組織中攝入新獸藥的總殘留量，且使人類的殘留物暴露量不會超過ADI。每種可食性組織的安全濃度計算反映了上述ADI分配。獸藥在某種動物性食品和產品中的安全濃度=ADI×成年人平均體重60 kg÷每天消耗的某種動物性食品的量。注射部位如果未發現特定的急性毒理學問題，可將肌肉安全濃度乘以系數10估算注射部位安全濃度。當發現特定的急性毒理學問題時，使用ARfD計算肌肉注射部位安全濃度，注射部位安全濃度=ARfD×成年人平均體重60 kg÷每天肌肉的消耗值。

5 殘留化學安全性評價

殘留限量就是殘留標志物在靶組織中的安全濃度。殘留靶組織、殘留標志物和MRL是通過系列食品動物體內獸藥代謝和殘留動力學評價研究確定和建立的，包括靶動物代謝研究(熱試驗)、實驗動物和靶動物比較代謝研究(嚙齒和非嚙齒類熱試驗)、確立獸藥休藥期的殘留標志物消除研究、殘留消除研究用分析方法學驗證。

5.1 靶動物代謝研究和殘留消除試驗 通過靶動物代謝研究和殘留消除試驗可以確定靶組織和殘留標志物，研究代謝物譜，確定殘留量并鑒定其性質，明確藥物原形及其代謝產物在組織中的分布和消除規律。雞蛋要作為單獨的靶組織研究，殘留標志物也可能與可食性組織不同。因此，雞蛋和雞可食性組的殘留消除試驗要分別進行，測定殘留物放射性總殘留(TRR)濃度、測定殘留標志物濃度、計算殘留標志物與TRR的比值(MR/TRR)。VICH GL48[3]建議進行雞蛋殘留消除研究時，給藥期間和停藥至含卵黃發育時間(約12日)每天收集蛋，每個時間點采樣不能少于10枚蛋。FDA建議連續使用的產蛋雞用新獸藥，應在藥物濃度達穩態后使用12日的給藥方案，近似于蛋黃完全發育所需的時間，從停止治療前2日到停止治療后2日為雞蛋采樣時間點。對于間斷給藥的產品，具體問題具體分析。

5.2 實驗動物和靶動物比較代謝研究 比較代謝研究可以比較靶動物和實驗動物(嚙齒類和非嚙齒類)放射性標記代謝研究結果，確定在毒性試驗中實驗動物對靶動物代謝物為“自體暴露”，以便明確是否需要進行額外的毒理學試驗，如免疫毒性、神經毒性等。

5.3 建立最大殘留限量和確定休藥期 可以按照聯合國糧農組織和世界衛生組織聯合專家委員會(JECFA)、美國食品藥品管理局獸藥評審中心(FDA-CVM)和歐洲獸藥評審局(EMA)方法，對獸藥進行暴露評估，制定MRLs。非放射性殘留標志物消除研究測定殘留標志物(MR)在各組織和蛋中的濃度，乘以分配給各組織和蛋的ADI就可以得到各組織殘留量。殘留量除以食物籃對應的組織消費量就是MRL，但此時的MRL是放射性總殘留物TRR(熱值)，通過MR/TRR校正(熱值×MR/TRR)就得到以殘留標志物標示的MRLs。盡管FDA-CVM并未規定制定棄蛋期的計算方法[4]，由于棄蛋期與棄奶期的計算方法相似，可參考棄奶期研究方法制定棄蛋期。在確定棄奶期時，FDA-CVM優先推薦采用達到安全濃度的時間方法(TTSC法)進行統計學分析，這是因為達到安全濃度的時間不變。如果所有樣品濃度均低于MRL，TTSC法不適用，建議使用每次擠奶時的安全濃度方法(SCPM法)進行統計分析。建立MRL和制定休藥期的方法要符合所采用方法的統計學原則。最后，靶動物每種可食性組織按第99百分位的99%置信區間在零休藥期時刻的每日攝入量(EDI)要低于ADI進行驗證安全性。

綜上所述，棄蛋期的制定與其他可食性組一樣，都要基于最保守的系列措施，保證動物性食品安全。如從所有毒理學試驗中選擇最小的NOEL值，毒理學ADI和微生物學ADI比較后也要選擇最小值作為最終ADI值。ADI要做符合容忍度的合理分配，MRL要通過MR/TRR進行校正，每日攝入量要低于ADI。另外，由于棄蛋期必須為零日，部分藥物需要行業達成一致，在奶牛和蜜蜂有足夠藥物治療疾病時，把儲備ADI分配給蛋雞使用。科學合理使用藥物[9]，才能保證產業的健康可持續發展。